高效液相色譜使用常見(jiàn)問(wèn)題及工作原理

第第頁(yè)高效液相色譜使用常見(jiàn)問(wèn)題及工作原理高效液相色譜使用常見(jiàn)問(wèn)題

1.色譜柱中的流動(dòng)相見(jiàn)排干嗎？

不少做色譜分別試驗(yàn)的人碰到過(guò)這樣的情形：不慎未適時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中全部流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，假如泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充分了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。由于泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘掉蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干枯的情況不太簡(jiǎn)單發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉全部溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不愿定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤(rùn)填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)當(dāng)能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤(rùn)，恢復(fù)到正常狀態(tài)。

2.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問(wèn)題？

假如常常需要更改流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會(huì)特別便利。PEEK管路簡(jiǎn)單連接；PEEK接頭不僅無(wú)需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且簡(jiǎn)單調(diào)整錐箍之外的管路長(zhǎng)度，便利與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。

使用此類(lèi)材料的管路需要注意的是：PEEK對(duì)鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未察看到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK碰到上述溶劑會(huì)變脆。另一個(gè)西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會(huì)超過(guò)3000psi）。

使用PEEK接頭時(shí)則無(wú)需掛念接頭耐溶劑性能，由于接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會(huì)使接頭在管路上滑動(dòng)而產(chǎn)生死體積或漏液。

3.如何防備液相泵的故障:

要保持泵的良好操作性能,必需維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾和脫氣.下面列出防備泵故障的幾項(xiàng)措施:

1）、用高質(zhì)量試劑和HPLC級(jí)溶劑；

2）、過(guò)濾流動(dòng)相和溶劑；

3）、脫氣；

4）、每天開(kāi)始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；

5）、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；

6）、定期更換墊圈；

7）、需要時(shí)加潤(rùn)滑油；

8）、查閱有關(guān)泵操作手冊(cè)中的其它建議。

處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)當(dāng)能使色譜圖上的基線(xiàn)平穩(wěn)；保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動(dòng)小于2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平