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經(jīng)典柱色譜技術(shù)
——液-固吸附色譜操作技術(shù)江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動物藥學(xué)院儀器分析技術(shù)吸附柱色譜操作技術(shù)主要包括五個步驟3、洗脫2、加樣1、裝柱4、收集5、檢測裝柱之前,先將空柱洗凈干燥,再將空柱垂直固定在鐵架臺上。如果色譜柱下端沒有砂芯橫隔,就取一小團(tuán)脫脂棉,用玻璃棒將其推至柱底,再在上面平鋪上一層厚0.5-1cm的洗過、干燥石英砂,有助于分離時色層邊緣整齊,加強(qiáng)分離效果。柱的長度與直徑比一般為(10-20):1。色譜柱的填裝要均勻,不能有氣泡。裝法①濕法裝柱②干法裝柱
1、裝柱②濕法加樣先將色譜柱中的洗脫劑放至與吸附劑表面相齊,關(guān)閉活塞,用少量初始洗脫劑使樣品溶解,沿色譜柱管壁緩緩加入樣品溶液,待溶液完全轉(zhuǎn)移至色譜柱柱管中,打開下端活塞,使液體緩緩流至液面與吸附劑相平齊。2、加樣①干法加樣
如果樣品不易溶解在洗脫劑中,常用干法加樣,預(yù)先將樣品溶于易溶的溶劑,再用少量吸附劑拌勻,采用加溫或揮干方式去除溶劑,待干燥后,將帶有樣品的吸附劑加入已裝好的吸附劑上面。①洗脫劑一種溶劑或幾種溶劑按一定比例組成混合溶劑。②操作要求A.保持吸附層上方有一定量的洗脫劑,防止斷層和旁流B.控制洗脫劑的流速(5~10滴/min)3、洗脫(1)等份收集(亦可用自動收集器)(2)按變換洗脫劑收集4、收集對收集到的樣品用適當(dāng)?shù)姆椒?/p>
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