阿米洛利對大鼠膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2 波動的影響研究

1/1阿米洛利對大鼠膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2波動的影響研究阿米洛利對大鼠膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2+波動的影響研究1湖北省十堰市人民醫(yī)院湖北省十堰市4420002昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院云南昆明650032本研究受云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究資助，項(xiàng)目編號：

2014FB042作者簡介：

王天寶（1985-），男，碩士，十堰市人民醫(yī)院。

通訊作者：

劉孝東，碩士生導(dǎo)師，副教授，昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院。

【摘要】目的：

探討鹽酸阿米洛利對膀胱cajal樣間質(zhì)細(xì)胞（interstitialcellsofCajal，ICCs）細(xì)胞內(nèi)Ca2+波動的影響。

方法：

體外分離并培養(yǎng)SD大鼠膀胱ICCs細(xì)胞，膀胱ICCs細(xì)胞爬片成功后，將待實(shí)驗(yàn)細(xì)胞爬片分為：

50mu;mol/L和100mu;mol/L的阿米洛利溶液孵育組、空白對照組采取PBS溶液孵育。

在顯微鏡下隨機(jī)選取20個與周圍細(xì)胞無接觸、孤立存在的膀胱ICCs細(xì)胞，采用Fluo-3-AM孵育后在激光掃描共聚焦顯微鏡下檢測各組膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2+波動情況。

結(jié)果:50mu;mol/L阿米洛利處理組，膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2＋波動較孵育前有所頻率減慢但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但Ca2＋波動振幅明顯較前變小，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）；100mu;mol/L阿米洛利處理組的膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2＋波動頻率和振幅下調(diào)顯著(Plt;0.01)，而對照組前后變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

結(jié)論：

阿米洛利可以降低膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2＋波動頻率和振幅。

【關(guān)鍵詞】膀胱；間質(zhì)細(xì)胞；阿米洛利；鈣離子波動【中圖分類號】R473【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1001-5213(2016)08-0414-02膀胱是一種介于自主神經(jīng)和非自主神經(jīng)支配的一種特殊的空腔臟器[1]。

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為：

膀胱收縮存在神經(jīng)源性和肌源性兩種學(xué)說[2]。

雖然從膀胱正常收縮完全受意識控，神經(jīng)源性控制說看其合理性是毋庸置疑的。

但在一些特定情況下，諸如膀胱過度活動綜合癥(OveractiveBladder，OAB)，患者的膀胱黏膜無明顯病理變化（或者說目前有我們未知的病理改變）而出現(xiàn)非充盈性膀胱異?；顒?，提示膀胱有可能還受其它機(jī)制調(diào)控。

這種情況下，膀胱的收縮更多的表現(xiàn)為肌源性特征，呈現(xiàn)出一定程度的非神經(jīng)源性的自主性。

以往的觀點(diǎn)認(rèn)為這種自發(fā)性興奮起搏來源于逼尿肌細(xì)胞，但更多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：

逼尿肌細(xì)胞沒有自發(fā)性興奮的特點(diǎn)，無法擔(dān)當(dāng)膀胱起搏的任務(wù)[3]。

綜合OAB的病因來看，多種因素參與致病。

Kubota[4]等人研究發(fā)現(xiàn)：

膀胱出口梗阻情況下，OAB膀胱中ICCs樣細(xì)胞顯著增多，提示OAB的發(fā)生可能和ICCs細(xì)胞增多；McCloskey[5]和Hashitani[6]等研究發(fā)現(xiàn)逼尿肌的自發(fā)性電活動源于逼尿肌束邊緣的ICCs樣細(xì)胞，這些細(xì)胞首先產(chǎn)生自發(fā)性電活動，隨后刺激逼尿肌細(xì)胞產(chǎn)生動作電位，并通過肌間的縫隙連接傳導(dǎo)，引起其他肌束的電位變化的收縮活動。

分布在膀胱逼尿肌肌束間的膀胱ICCs細(xì)胞，可通過胞體間的縫隙連接及ICCs細(xì)胞的突起相互形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聯(lián)系,并伸出突起到肌束內(nèi)與平滑肌或神經(jīng)組織相聯(lián)系，縫隙連接是在相鄰細(xì)胞間的縫隙中構(gòu)成一個通道，細(xì)胞胞質(zhì)中的離子和小分子物質(zhì)可以通過這一通道相互溝通，進(jìn)行細(xì)胞間通訊,使興奮信號得到迅速傳播[7]。

原代培養(yǎng)的ICCs細(xì)胞和逼尿肌細(xì)胞的靜息膜電位、膜電容存在明顯差異；ICCs細(xì)胞可記錄到起搏細(xì)胞特征電流Ih,而在逼尿肌細(xì)胞則記錄不到[8]，同時膀胱ICCs細(xì)胞表面存在多種受體蛋白，最近有關(guān)超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道(hyperpolatization-activated，cyclicnucleotide-gatedcationchannel，HCN陽離子通道，簡稱HCN通道)在ICCs細(xì)胞膜上的發(fā)現(xiàn)為其是膀胱活動的潛在起搏點(diǎn)提供一重要依據(jù)[9]。

由此可見ICCs對在膀胱逼尿肌異常收縮的病理過程中可能發(fā)揮重要作用。

同時我們設(shè)想的一個問題是：

有沒有一種藥能夠通過透過膀胱粘膜影響膀胱ICCs細(xì)胞從而抑制逼尿肌異常收縮？本實(shí)驗(yàn)將在細(xì)胞水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探討酸敏感離子通道抑制劑阿米洛利（Ami）對膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的影響，從而為通過阿米洛利影響膀胱ICCs為中間環(huán)節(jié)，間接影響膀胱逼尿肌收縮，為治療膀胱異常收縮的相關(guān)疾病提供相關(guān)的基礎(chǔ)研究。

材料和方法1、材料實(shí)驗(yàn)動物：

健康成年SD大鼠，雌雄不限，體質(zhì)量200～250g。

主要試劑：

DMEM培養(yǎng)液、Ⅱ型膠原酶（Sigma，美國）、胎牛血清（FBS，Hycone公司）、Ficoll400細(xì)胞分離液（Pharmacia，美國）、青鏈雙抗（哈爾濱哈藥集團(tuán)，哈爾濱）、Alexa488標(biāo)記的兔抗羊熒光二抗、羊抗大鼠c-kit多克隆抗體（SantaCruz公司）、Fluo－3－AM（invitrogen公司）、鹽酸阿米洛利（Sigma，美國）、胰蛋白酶抑制劑（Sigma，美國）、L-多聚賴氨酸（Sigma，美國）、干細(xì)胞生長因子（SCF，Ramp;D公司）2、實(shí)驗(yàn)方法2.1體外膀胱ICCs的分離與培養(yǎng)2.1.1酶解液的配制：

Ⅱ型膠原酶10mg、牛血清白蛋白10mg、胰酶抑制劑10mg，放入小培養(yǎng)瓶中，加入D-Hank’s5ml，充分溶解，濾頭過濾后備用。

2.1.2標(biāo)本的分離制備：

動物采用SD大鼠2-3月齡，體質(zhì)量200-250g，提前沿下腹剪毛，斷頸法處死動物，超凈工作臺內(nèi)大鼠備皮處消毒后，在大鼠恥骨聯(lián)合后方尋找辨認(rèn)膀胱后取出膀胱，將膀胱組織放入冷D-Hank’s（PH7.0）液中漂洗數(shù)分鐘，在解剖顯微鏡下縱行剪開膀胱，小心撕去膀胱粘膜和漿膜層后，制成細(xì)小肌條，并用D-Hankrsquo;s反復(fù)沖洗肌條3次。

將膀胱肌條剪成1times;1times;1mm3組織塊。

2.1.3細(xì)胞懸液制作：

將組織塊移入培養(yǎng)瓶，加入配制好的酶解液充分混勻，37℃培養(yǎng)箱中消化15分鐘，期間用吸管吹打2次，將消化好的組織懸液移入離心管離心，1500rpmtimes;5分鐘，棄上清，去除消化酶；在離心管中加入等量D-Hank’s，吹打混勻，組織懸液用200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，去除組織碎塊；將細(xì)胞懸液加進(jìn)等體積的密度梯度分離液Ficoll400，1000r/min離心7min，棄上清。

2.1.4接種：

將分離好的細(xì)胞懸液加入適當(dāng)?shù)腄MEM培養(yǎng)基(含DMEM成分、10%FBS、1mlAntibiotic、SCF50ng/ml)，取0.1ml的細(xì)胞液滴到血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，計(jì)算細(xì)胞密度將細(xì)胞濃度調(diào)整至1times;106/ml并接種至6孔培養(yǎng)板，板中預(yù)先放置包被貼黏多聚賴氨酸的蓋玻片。

放入培養(yǎng)箱內(nèi)，在37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)。

培養(yǎng)24h后換液，去除未貼壁細(xì)胞，加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，以后每隔1d換液一次，期間用倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

2.2膀胱ICCs細(xì)胞的鑒定細(xì)胞穩(wěn)定爬片培養(yǎng)5d后，進(jìn)行免疫熒光檢測。

步驟：

傾去培養(yǎng)基，用0.01mol/PBS漂洗，5mintimes;3次；室溫下用4%多聚甲醛固定30min，0.01mol/PBS漂洗5mintimes;3次，在室溫下加入10%BSA封閉30min棄液；0.2%TritonX-100（10mlPBS，20mu;lTritonX-100）透膜15min棄液，；羊抗大鼠c-kit多克隆抗體（1：

500稀釋）滴到細(xì)胞片上，4℃過夜；次日0.01mol/PBS沖洗3次，每次5min；加入AlexaFluo488標(biāo)記的羊抗兔二抗（1:150稀釋），37℃孵育1小時，0.01mol/PBS漂洗5分鐘times;3次；最后DIPI染核，指甲油封片后供激光共聚焦顯微鏡觀察。

2.3阿米洛利對膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的影響2.3.1染液配制：

Fluo-3-AM50ug溶于45ulDMSO(Fluo-3-AM濃度1mM)，15ul/支分裝，-20℃保存。

染色時用15～50mMHEPES緩沖液將其稀釋為1～20uM(如1.5ml為10uM)。

必要時，可加入助染劑HBSS增強(qiáng)染色效果。

2.3.2染色步驟：

1)取在圓形蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，緩沖液漂洗2～3次。

2)對照組加入500mu;lPBS，實(shí)驗(yàn)組加入同濃度Fluo-3-AM(1～20uM)，37℃下孵育30分鐘。

3)緩沖液漂洗2～3次。

4)加0.5ml緩沖液，上機(jī)測量。

2.3.3細(xì)胞分組：

將待實(shí)驗(yàn)細(xì)胞爬片分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。

實(shí)驗(yàn)組分別以50mu;mol/L和100mu;mol/L的阿米洛利的PBS溶液孵育30分鐘，對照組以PBS孵育。

隨機(jī)選取20個目標(biāo)細(xì)胞，要求選擇顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)典型的、與周圍細(xì)胞無接觸孤立的ICCs細(xì)胞，用藥前、用藥后分別進(jìn)行檢測，最后采用樣本均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平Plt;0.050為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.結(jié)果3.1膀胱ICCs的分離與培養(yǎng)結(jié)果對大鼠膀胱細(xì)胞分離并培養(yǎng)8h后通過相差顯微鏡觀察，可發(fā)現(xiàn)胞體呈紡錘狀、梭形貼壁生長細(xì)胞，胞體較小，折光性強(qiáng)，有兩個長的突起或多個短的側(cè)突，梭形細(xì)胞兩極可見有兩個或多個突起的膀胱ICCs細(xì)胞，視野中偶見膀胱平滑肌細(xì)胞（SMC）其形態(tài)上與膀胱ICCs細(xì)胞有明顯區(qū)別，呈現(xiàn)短棒狀，ICCs-SMC可見類似神經(jīng)-肌肉突觸鏈接樣結(jié)構(gòu)單元(圖1-A)。

培養(yǎng)72h后可見膀胱ICCs細(xì)胞突起間相互接觸(圖1-B)，原代分離培養(yǎng)8h膀胱ICCs光鏡下形態(tài)，藍(lán)色箭頭指示大鼠膀胱cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICCs)，藍(lán)色箭頭指示膀胱平滑肌細(xì)胞（SMC），可見ICCs-SMC間借助ICCs的突起相接處。

（times;40倍）(圖1-A)；原代分離培養(yǎng)72h膀胱ICCs光鏡下形態(tài)，可見ICCs-ICCs間突起相互交錯、接觸成網(wǎng)狀，部分ICCs細(xì)胞胞體呈紡錘形，折光性強(qiáng)，其中夾雜少量平滑肌肌細(xì)胞。

（times;20倍）(圖1-B)3.2膀胱ICCs細(xì)胞的鑒定待細(xì)胞穩(wěn)定爬片培養(yǎng)5d后行C-Kit免疫熒光抗體鑒定膀胱ICCs細(xì)胞，結(jié)果提示此類貼壁細(xì)胞C-Kit染色呈陽性，提示為膀胱ICCs細(xì)胞(圖2-A及圖2-B)。

膀胱ICCs培養(yǎng)5d后，免疫熒光染色激光共聚焦下細(xì)胞形態(tài)，紅色為細(xì)胞核，胞體C-kit受體熒光染色呈綠色，兩端可見長的細(xì)胞突起，形成ICCs-ICCs間突起相互交錯、接觸成網(wǎng)狀，細(xì)胞核與胞體重疊部分顯色成淡黃色。

(圖2-A)；膀胱ICCs細(xì)胞DIPI染核，細(xì)胞核呈紅色，標(biāo)尺。

(圖2-B)3.3應(yīng)用共聚焦顯微鏡鏡觀察阿米洛利對膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)的Ca2＋波動的影響，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)plusmn;標(biāo)準(zhǔn)差表示，檢驗(yàn)方法采用配對t檢驗(yàn)。

對照組的膀胱ICCs細(xì)胞呈有規(guī)律的亮度波動，Ca2＋波動振幅、頻率變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

而在被Ami孵育的實(shí)驗(yàn)組中，與加藥之前相比，實(shí)驗(yàn)1組(50mu;mol/L阿米洛利處理)，膀胱ICCs細(xì)胞的Ca2＋波動較孵育前有所頻率減慢但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但Ca2＋波動振幅明顯較前變小，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）；而實(shí)驗(yàn)2組(100mu;mol/L阿米洛利處理)的膀胱ICCs細(xì)胞的Ca2＋波動這種頻率和振幅下調(diào)的現(xiàn)象更為顯著(Plt;0.01)。

6.討論膀胱的貯尿、排尿功能有乃于膀胱結(jié)構(gòu)的完整外還受自主神經(jīng)支配。

目前的研究表明膀胱黏膜由外向內(nèi)由3種明顯的細(xì)胞層：

基底細(xì)胞層；中間細(xì)胞層；傘狀細(xì)胞層。

傘狀細(xì)胞層表面由葡萄糖胺聚糖層（GAG）、Uroplakin班及盤狀小泡、封閉帶組成的防水層。

Birder[10]等在對尿路上皮細(xì)胞的研究表明其具有感覺并且發(fā)出信號的特征，這使得它們能夠?qū)χ車奈锢砗突瘜W(xué)環(huán)境變化做出反應(yīng)，并且傳遞給膀胱壁的下級傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)。

最近的有關(guān)超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道(HCN陽離子通道，簡稱HCN通道)在ICCs胞膜上的發(fā)現(xiàn)為其膀胱活動的潛在起搏點(diǎn)提供一重要依據(jù)。

HCN離子通道在心臟的竇房結(jié)細(xì)胞，神經(jīng)元細(xì)胞等自律性細(xì)胞上被發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是起搏細(xì)胞的重要特征，同時HCN通道是產(chǎn)生起搏電流Ih(hyperpolarization-activatedinwardcurrent)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

相關(guān)研究表明Ih特異性阻斷劑ZD7288對ICCs細(xì)胞Ih有明顯抑制作用，從而可以抑制逼尿肌的收縮活動，而膀胱ICCs與神經(jīng)末梢間存在傳導(dǎo)電信號的縫隙連接,表明膀胱ICCs細(xì)胞可能是神經(jīng)膀胱ICCs細(xì)胞逼尿肌這一信號傳導(dǎo)通路的中間環(huán)節(jié)，為以膀胱ICCs細(xì)胞為靶點(diǎn)治療膀胱異?；顒有约膊√峁┝艘罁?jù)。

Fluo-3-AM是一種檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光探針。

Fluo-3若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與鈣離子Ca2+結(jié)合后熒光會增加60至80倍，是目前最常用的一種鈣離子熒光探針。

Fluo-3-AM被動擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞后，被酯酶水解釋出Fluo-3，F(xiàn)luo-3會與Ca2+絡(luò)合，受488nm的激光激發(fā)而產(chǎn)生熒光，其熒光值與[Ca2+]i呈正相關(guān)，即以熒光值變化表示[Ca2+]i變化，在激光掃描共聚焦顯微鏡TimeSeries程序下對細(xì)胞XY平面進(jìn)行掃描，基礎(chǔ)熒光值在圖像分析程序下按最小噪聲最大圖像信號人為設(shè)定。

計(jì)算細(xì)胞XY平面內(nèi)平均熒光強(qiáng)度，以平均熒光強(qiáng)度代表細(xì)胞內(nèi)Ca2+。

本實(shí)驗(yàn)成功體外、分離培養(yǎng)大鼠膀胱ICCs細(xì)胞，對大鼠膀胱細(xì)胞分離并培養(yǎng)8h后通過相差顯微鏡觀察，可發(fā)現(xiàn)胞體呈紡錘狀、梭形貼壁生長細(xì)胞，胞體較小，折光性強(qiáng)，有兩個長的突起或多個短的側(cè)突，梭形細(xì)胞兩極可見有兩個或多個突起的膀胱ICCs細(xì)胞，視野中偶見膀胱平滑肌細(xì)胞（SMC）其形態(tài)上與膀胱ICCs細(xì)胞有明顯區(qū)別，呈現(xiàn)短棒狀，ICCs-SMC可見類似神經(jīng)-肌肉突觸鏈接樣結(jié)構(gòu)單元(圖1-A)。

培養(yǎng)72h后可見膀胱ICCs細(xì)胞突起間相互接觸(圖1-B)，待細(xì)胞穩(wěn)定爬片培養(yǎng)5d后行C-Kit免疫熒光抗體鑒定膀胱ICCs細(xì)胞，結(jié)果提示此類貼壁細(xì)胞C-Kit染色呈陽性，提示為膀胱ICCs細(xì)胞，為膀胱ICCs細(xì)胞在逼尿肌異?；顒酉嚓P(guān)疾病的研究提供了基本的實(shí)驗(yàn)探索，SCF(干細(xì)胞生長因子)為ICCs細(xì)胞膜C-kit的配體，培養(yǎng)液中加入干細(xì)胞生長因子，是維持ICCs細(xì)胞表型和功能的關(guān)鍵；是進(jìn)行該類研究的基礎(chǔ)。

本研究采用細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光探針（Fluo-3-AM）檢測經(jīng)阿米洛利處理后膀胱ICCs細(xì)胞[Ca2+]i變化。

結(jié)果表明：

對照組的膀胱ICCs細(xì)胞以PBS孵育前后仍有規(guī)律的亮度波動，Ca2＋波動振幅、頻率變化前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

而在被Ami孵育的實(shí)驗(yàn)組中，與加藥之前相比，實(shí)驗(yàn)1組(50mu;mol/L阿米洛利處理)，膀胱ICCs細(xì)胞的Ca2＋波動較孵育前有所頻率減慢但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但Ca2＋波動振幅明顯較前變小，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）；實(shí)驗(yàn)2組(100mu;mol/L阿米洛利處理)的膀胱ICCs細(xì)胞的Ca2＋波動和振幅均下調(diào)，且下調(diào)較明顯，有顯著差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(Plt;0.01)。

甲磺酸伊馬替尼(Glivec)在體內(nèi)外均可在細(xì)胞水平上抑制酪氨酸激酶C受體，實(shí)驗(yàn)表明甲磺酸伊馬替尼可以與ICCs細(xì)胞表面的酪氨酸激酶C受體結(jié)合并特異性阻斷酪氨酸激酶C受體，致使ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2＋波動頻率、振幅下降，通使用Glivec后進(jìn)行FRAP（熒光漂白實(shí)驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：

膀胱ICCs細(xì)胞與逼尿肌細(xì)胞之間的信號傳遞被明顯抑制。

鹽酸阿米洛利也有相似作用，由于膀胱GAG層細(xì)胞不能阻止鹽酸阿米洛利進(jìn)入并影響傘狀細(xì)胞上皮表面的鈉通道功能，同時可以影響膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)鈣離子波動，為優(yōu)勢，但其能否在膀胱灌注治療時透過膀胱粘膜而抑制膀胱ICCs而影響膀胱平滑肌的收縮尚需實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

酸敏感離子通道（acid-sensingionchannels，ASICs）是一類由胞外液體酸化所激活的陽離子通道，酸化激活后產(chǎn)生電流并影響相關(guān)靶器官。

到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ASICs家族的6個亞基ASIC1a、ASIC1b、ASIC2b、ASIC3、ASIC4。

這6個亞基可以按照不同的模式，組成同聚體或異聚體酸敏感離子通道。

已初步探明ASICs在人體內(nèi)廣泛分布，在觸覺、痛覺、酸味覺、學(xué)習(xí)記憶以及部分病理反應(yīng)中具有重要作用。

李霞等研究發(fā)現(xiàn)：

在脊髓背根有ASIC3較多的表達(dá)，與痛覺及傷害性感受密切相關(guān)，在慢性炎性疼痛的病理過程中發(fā)揮重要的作用，在炎性痛模型中可以增加脊髓背根ASIC3在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的表達(dá)；阻斷或敲除ASIC3基因(ASIC3-/-)能明顯抑制炎癥性關(guān)節(jié)痛。

上述研究表明，在生理或病理情況下,脊髓背根中ASIC3對脊髓水平的感覺信息傳遞特別是痛覺的傳導(dǎo)可能發(fā)揮著重要作用，這可能是關(guān)節(jié)炎疼痛的治療靶點(diǎn)。

有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)：

激活A(yù)SIC3可以刺激小腸迷走神經(jīng)傳入神經(jīng)元產(chǎn)生相應(yīng)的電流改變，進(jìn)而影響小腸平滑肌的收縮。

由此提出ASIC3與胃腸道收縮可能有一定的聯(lián)系。

ASIC3抑制劑鹽酸阿米洛利臨床上為保鉀利尿藥或鈉氫交換抑制劑。

目前除抑制ASICs外，短時間低劑量的的膀胱灌注不會產(chǎn)生任何的藥理作用。

由于ASIC3與痛覺和平滑肌收縮密切相關(guān)，OAB癥狀通常伴有不同程度的膀胱疼痛以及膀胱逼尿肌亢進(jìn)。

因此我們大膽設(shè)想：

阿米洛利對膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2+抑制波動的作用是否通過抑制ASIC3的表達(dá)通路完成的，其作用機(jī)制值得深入研究。

值得提出的是：

甲磺酸伊馬替尼(Glivec)雖然可以抑制膀胱ICCs細(xì)胞與逼尿肌細(xì)胞之間的信號傳遞，但尚無磺酸伊馬替尼(Glivec)能自由通過膀胱灌注進(jìn)入黏膜下層的相關(guān)研究；同時其價(jià)格昂貴，難以在臨床上普及使用，而阿米洛利價(jià)格便宜。

本實(shí)驗(yàn)通過基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證明阿米洛利對膀胱ICCs細(xì)胞內(nèi)Ca2+抑制波動的作用，為OAB等膀胱異常活動的進(jìn)一步研究提供新的思路。

參考文獻(xiàn)[1].WardSM，BurnsAJ，TorihashiS，etal.Mutationoftheprotooncogenec-kitblocksdevelopmentofinterstitialcellsandelectricalrhythmicityinmurineintestine.JPhysiol1994;480(Pt1):91-97.[