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文檔簡介

雙小泛素樣蛋白的化學合成、結構解析及其與結合蛋白的交聯分析的任務書任務書一、任務背景和意義泛素（Ub）和其修飾在細胞生物學中扮演著重要角色，如蛋白質的降解、信號轉導、DNA損傷修復、染色質調控、細胞周期調控等等。近年來，越來越多的研究表明，雙小泛素樣蛋白（diubiquitin，diUb）的結構和功能也非常重要，關鍵的一步便是通過合成的技術來獲得理想結構、功效和規(guī)模的diUb。二、任務目標本任務主要目標是：1.合成diUb化合物；2.使用高分辨率質譜技術和核磁共振技術，對雙小泛素樣蛋白的結構進行解析；3.通過對diUb和結合蛋白的交聯分析，在不同條件下分析兩者結合情況。三、任務內容及階段目標1.合成diUb化合物（1）合成diUb分子的單元：從泛素表達體系中純化得到的泛素物質，經由酶、纈氨酸和酯化反應，可以在C端加入一分子羧基安全（BSA）;而N-端則加入對羥基苯甲酸酯（FMOC），形成N-FMOC-UB-BSA結構。（2）合成diUb分子：通過核苷酸磷酸二酯縮合反應，將兩份UB-BSA化合物連接起來，從而形成diUb化合物。2.對雙小泛素樣蛋白進行結構解析（1）使用質譜技術檢測diUb化合物的純度（2）使用核磁共振技術確定diUb化合物的結構3.對diUb和結合蛋白的交聯分析（1）進行diUb和結合蛋白的結合反應（2）在不同條件下，如pH、溫度、濃度、結合劑用量等，進行diUb和結合蛋白的結合反應，并通過交聯試劑將二者交聯，從而解析二者結合情況。四、實驗條件和必要設備本任務所需實驗條件和必要設備包括但不限于：（1）分子生物學實驗室和設備，并具備常規(guī)蛋白表達、純化和鑒定的能力；（2）高分辨率液質聯用分析儀；（3）高分辨率核磁共振儀；（4）交聯試劑、凝膠電泳儀、Westernblot儀等常規(guī)實驗室設備。五、預期成果通過本次任務，預期可以完成diUb化合物的合成、結構解析和與結合蛋白的交聯分析，進一步揭示雙小泛素樣蛋白的結構和功能，為之后針對泛素家族的藥物研究提供重要的基礎數據和理論依據。六、實驗流程實驗流程如下圖所示：七、安全注意事項1.實驗室使用前，必須熟知實驗室安全操作規(guī)程和應急預案。2.操作前需佩戴良好的實驗服和手套，操作過程中注意反應溶液的溫

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