分子生物學(xué)研究方法習(xí)題

分子生物學(xué)常用技術(shù)練習(xí)題1

【測(cè)試題】

【名詞解釋】1．blotting（印漬技術(shù)）

2．Southernblotting

3．Northernblotting

4．Westernblotting5．dotblotting

6．DNA芯片技術(shù)

7．PCR

8．功能基因組學(xué)9．蛋白質(zhì)組學(xué)

10．功能性克隆

11．定位克隆

12．轉(zhuǎn)基因技術(shù)13．核轉(zhuǎn)移技術(shù)（克隆技術(shù)）

14．基因剔除

15．分子雜交【參考答案】一、名詞解釋１．blotting（印漬技術(shù)）：是將存在于凝膠中的生物大分子轉(zhuǎn)移于固定化介質(zhì)上并加以檢測(cè)分析的技術(shù)。２．Southernblotting：將限制性內(nèi)切酶酶切電泳后的DNA轉(zhuǎn)移至NC膜上，再與核酸探針雜交的技術(shù)。３．Northernblotting：將電泳后的RNA轉(zhuǎn)移至NC膜上，再與核酸探針雜交的技術(shù)。４．Westernblotting：將聚丙烯酰胺凝膠電泳后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至NC膜上，再與另一標(biāo)記蛋白質(zhì)分子（如抗體）雜交的技術(shù)。5．dotblotting：不經(jīng)電泳分離直接將樣品點(diǎn)在NC膜上用于雜交的技術(shù)。6．DNA芯片技術(shù)：指采用原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬計(jì)的DNA探針固化于支持物表面上，產(chǎn)生二維DNA探針陣列，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)雜交信號(hào)來實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品快速、并行、高效地檢測(cè)或醫(yī)學(xué)診斷。由于常用硅芯片作為支持物，且在制備過程運(yùn)用了計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù)，故稱基因芯片技術(shù)。7．PCR：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種快速簡(jiǎn)便的體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，能在很短時(shí)間內(nèi)，將幾個(gè)拷貝的DNA放大上百萬倍。8．功能基因組學(xué)：指探討單一類細(xì)胞（組織）在其生命的一定時(shí)刻、一定條件所表達(dá)的基因的種類和數(shù)量；比較不同細(xì)胞之間、或同一細(xì)胞在不同條件下基因表達(dá)的差異。9．蛋白質(zhì)組學(xué)：是指細(xì)胞或組織中基因組所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)，尤其是指對(duì)于不同生命時(shí)期，或正常、或疾病、或給藥前后的蛋白質(zhì)變化所作的分析。10．功能性克隆：指從對(duì)一種基因的功能的了解出發(fā)克隆該致病基因的策略。例如血友病的第Ⅷ因子基因是以此策略克隆成功的。11．定位克?。河袝r(shí)特指圖位克隆，指從染色體定位、遺傳作圖或者物理作圖出發(fā)逐步縮小范圍，在特定的標(biāo)記附近克隆該基因的策略。例如DMD致病基因是以此策略克隆成功的。12．轉(zhuǎn)基因技術(shù)：指將目的基因整合入受體細(xì)胞比如受精卵細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞或者植物組織，然后使之發(fā)育成攜帶外源基因的個(gè)體。該個(gè)體能把目的基因繼續(xù)傳給子代，該技術(shù)稱轉(zhuǎn)基因技術(shù)。目的基因的受體動(dòng)物就是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。13．核轉(zhuǎn)移技術(shù)即動(dòng)物整體克隆技術(shù)。主要是指是將動(dòng)物的體細(xì)胞核全部導(dǎo)入另一個(gè)體的去除了胞核的受精卵內(nèi)，使之發(fā)育成個(gè)體的技術(shù)。14．基因剔除：指有目的的去除動(dòng)植物體內(nèi)某種基因的技術(shù)，也叫基因靶向滅活。15．分子雜交：在DNA復(fù)性時(shí)，如把不同DNA分子或DNA與RNA分子放在同一溶液中，只要這些核酸單鏈分子之間存在一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系，就可在不同分子間形成雜化雙鏈，這種現(xiàn)象稱核酸分子雜交。【填空題】16．Southernblotting、Northernblotting和Westernblotting是分別用于研究____、____和____轉(zhuǎn)移的有關(guān)技術(shù)。17．用PCR擴(kuò)增DNA片段，在反應(yīng)中除了用該DNA片段作為模板外，尚需加入____、____、____和____。18．PCR的基本反應(yīng)步驟包括____、____和____三步。*19．Sanger法DNA測(cè)序的基本步驟包括____、____、____和____四步20．人類基因組計(jì)劃的主要研究?jī)?nèi)容包括____、____、____、____和____。21．后基因組時(shí)代的主要研究?jī)?nèi)容是____和____。*22．目前克隆致病相關(guān)基因的主要策略有____、____和____。*23．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是____，而DMD（杜氏肌營養(yǎng)不良）致病基因的克隆所采用的克隆策略是____。【填空題參考答案】16．DNA

RNA

蛋白質(zhì)17．引物

TaqDNA聚合酶

DNTP

含Mg2+的緩沖液18．變性

退火

延伸19．模板-引物雜交

引物延長(zhǎng)與合成阻斷

電泳

放射自顯影直讀圖20．遺傳圖分析

物理圖分析

轉(zhuǎn)錄圖分析

序列圖分析

資料的儲(chǔ)存和利用21．功能基因組學(xué)

蛋白質(zhì)組學(xué)22．功能性克隆

定位克隆

候選基因克隆23．功能性克隆

定位克隆【單項(xiàng)選擇題】24．經(jīng)電泳分離后將RNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素（NC）膜上的技術(shù)是A．Southernblotting

B．Northernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization25．不經(jīng)電泳分離直接將樣品點(diǎn)在NC膜上的技術(shù)是A．Southernblotting

B．Northernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization26．經(jīng)電泳分離后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到NC膜上的技術(shù)是A．Southernblotting

B．Northernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization27．經(jīng)電泳后將DNA轉(zhuǎn)移至NC膜上的技術(shù)是A．Southernblotting

B．Northernblotting

C．WesternblottingD．Easternblotting

E．insituhybridization28．PCR的特點(diǎn)不包括A．時(shí)間短，只需數(shù)小時(shí)B．?dāng)U增產(chǎn)物量大

C．只需微量模板D．用途非常廣泛

E．底物必須標(biāo)記29．用于自動(dòng)化PCR儀的DNA聚合酶必須A．耐熱B．耐高壓

C．耐酸

D．耐堿

E．耐低溫30．PCR反應(yīng)過程中，模板DNA變性所需溫度一般是A．95℃B．85℃C．75℃D．65℃

E．55℃31．PCR反應(yīng)過程中，引物粘合所需溫度一般是A．72℃B．85℃C．75℃D．65℃

E．55℃32．PCR反應(yīng)過程中，引物延伸所需溫度一般是A．95℃B．82℃C．72℃D．62℃

E．55℃33．PCR反應(yīng)體系不包括A．模板DNAB．TaqDNA聚合酶C．特異性引物A、BD．ddNTP

E．含Mg2+的緩沖液34．PCR的循環(huán)次數(shù)一般為A．5～10次B．10～15次C．15～20次D．20～25次E．25～30次35．PCR反應(yīng)體系與雙脫氧末端終止法測(cè)序體系不同的是缺少A．模板B．引物

C．DNA聚合酶

D．ddNTPE．緩沖液36．Sanger法測(cè)序不需要A．Klenow小片段

B．引物

C．dNTP

D．標(biāo)記dNTPE．ddNTP37．Sanger法測(cè)序的基本步驟不包括A．標(biāo)記模板

B．模板-引物雜交C．引物的延長(zhǎng)與合成阻斷D．電泳

E．放射自顯影直讀圖38．Sanger法測(cè)序的四個(gè)反應(yīng)體系中應(yīng)分別加入不同的A．模板

B．引物C．標(biāo)記dNTP

D．DNA聚合酶E．ddNTP39．人類基因組計(jì)劃的主要研究?jī)?nèi)容不包括A．遺傳圖分析

B．物理圖分析

C．轉(zhuǎn)錄圖分析D．序列圖分析

E．蛋白質(zhì)功能分析40．1996年，英國科學(xué)家克隆的Dolly羊所采用的技術(shù)是A．轉(zhuǎn)基因技術(shù)

B．核轉(zhuǎn)移技術(shù)

C．基因剔除技術(shù)

D．肽核酸技術(shù)

E．反義核酸技術(shù)41．Maxam-Gilbert法與Sanger法測(cè)序的共同點(diǎn)是均需A．引物

B．Klenow大片段

C．ddNTPD．化學(xué)裂解試劑

E．電泳后放射自顯影讀圖42．Sanger法測(cè)序所得直讀圖像中，由終點(diǎn)至始點(diǎn)所讀序列為A．待測(cè)DNA5ˊ→3ˊ的堿基序列

B．待測(cè)DNA3ˊ→5ˊ的堿基序列C．待測(cè)DNA互補(bǔ)鏈3ˊ→5ˊ的堿基序列D．待測(cè)DNA互補(bǔ)鏈5ˊ→3ˊ的堿基序列E．引物5ˊ→3ˊ的堿基序列43．PCR實(shí)驗(yàn)的特異性主要取決于

A．DNA聚合酶的種類B．反應(yīng)體系中模板DNA的量C．引物序列的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度D．四種dNTP的濃度E．循環(huán)周期的次數(shù)44．基因剔除（knockout）的方法主要被用來研究A．基因的結(jié)構(gòu)

B．基因的功能

C．基因的表達(dá)D．基因的調(diào)控

E．基因的突變45．反義核酸作用主要是

A．封閉DNA

B．封閉RNA

C．降解DNAD．降解DNA

E．封閉核糖體的功能46．有關(guān)Sanger法測(cè)序的敘述，不正確的是A．只需標(biāo)記一種dNTP

B．一般應(yīng)去除DNA聚合酶I的5ˊ→3ˊ外切酶活性C．與dNTP相比阻斷劑應(yīng)盡可能的多D．反應(yīng)時(shí)間不必太長(zhǎng)E．應(yīng)采用超薄高壓電泳47．限制性內(nèi)切酶酶切后電泳分離再將DNA轉(zhuǎn)移至NC膜上雜交的技術(shù)是A．Northernblotting

B．Southernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization48．電泳分離后將RNA轉(zhuǎn)移至NC膜上雜交的技術(shù)是A．Northernblotting

B．Southernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization49．電泳分離后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至NC膜上與標(biāo)記蛋白雜交的技術(shù)是A．Northernblotting

B．Southernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization50．不經(jīng)電泳直接將樣品點(diǎn)在NC膜上雜交的技術(shù)是A．Northernblotting

B．Southernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization51．在組織切片上直接與探針雜交的技術(shù)是A．Northernblotting

B．Southernblotting

C．WesternblottingD．dotblotting

E．insituhybridization52．PCR變性溫度一般是A．95℃B．85℃C．72℃

D．65℃

E．55℃53．PCR退火溫度一般是54．PCR引物延伸溫度一般是A．95℃B．85℃C．72℃

D．65℃

E．55℃55．同聚物加尾連接需要A．TaqDNA聚合酶

B．末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶

C．Klenow大片段D．反轉(zhuǎn)錄酶

E．Klenow小片段56．PCR需要A．TaqDNA聚合酶

B．末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶

C．Klenow大片段D．反轉(zhuǎn)錄酶

E．Klenow小片段57．Sanger法測(cè)序需要A．TaqDNA聚合酶

B．末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶

C．Klenow大片段D．反轉(zhuǎn)錄酶

E．Klenow小片段58．由mRNA合成cDNA需要A．TaqDNA聚合酶

B．末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶

C．Klenow大片段D．反轉(zhuǎn)錄酶

E．Klenow小片段【單項(xiàng)選擇題答案】24．B

25．D

26．C

27．A

28．E

29．A

30．A31．E

32．C

33．D

34．E

35．D

36．A

37．A38．E

39．E

40．B

41．E

42．D

43．Ｃ44．B45．B

46．C47．B

48．A

49．C

50．D

51．E

52．A

53．E54．C

55．Ｂ56．A

57．C

58．Ｄ【多項(xiàng)至少兩個(gè)選項(xiàng)的選擇題】59．PCR反應(yīng)體系中含有A．特異性引物

B．Klenow大片段

C．dNTP

D．ddNTPE．35S-α-dATP60．PCR循環(huán)的反應(yīng)步驟包括A．復(fù)性B．變性

C．退火

D．引物延伸E．引物終止61．DNA鏈末端合成終止法反應(yīng)體系中含有A．引物B．dNTPC．ddNTPD．35S-α-dATPE．TaqDNA聚合酶62．DNA鏈末端合成終止法反應(yīng)體系中不含有A．模板B．TaqDNA聚合酶

C．ddNTP

D．化學(xué)裂解試劑E．35S-α-dATP63．PCR技術(shù)可以用于A．病原微生物的微量檢測(cè)

B．突變基因的篩選

C．法醫(yī)學(xué)鑒定

D．DNA序列分析E．克隆目的基因64．克隆致病相關(guān)基因的策略包括A．定位克隆

B．非定位候選克隆C．功能克隆

D．定位候選克隆E．隨機(jī)克隆65．有關(guān)人類基因組計(jì)劃（HGP）的描述，錯(cuò)誤的是A．最初由美國人提出

B．主要任務(wù)是完成人的23對(duì)染色體堿基測(cè)序C．因真正編碼蛋白質(zhì)的序列只占1%—5%，所以HGP計(jì)劃的實(shí)際意義不大D．我國未參與該計(jì)劃E．該計(jì)劃至今未有進(jìn)展66．HGP的主要研究?jī)?nèi)容有A．繪制遺傳圖

B．繪制物理圖C．完成轉(zhuǎn)錄圖

D．完成序列圖E．資料的儲(chǔ)存和利用【多項(xiàng)選擇題答案】59．AC

60．BCD

61．ABCD

62．BD

63．ABCDE64．ABCD

65．CDE

66．ABCDE【簡(jiǎn)答題】67．何謂PCR？簡(jiǎn)述其基本原理、反應(yīng)體系和主要步驟。68．簡(jiǎn)述Sanger法測(cè)序的基本原理及大體過程。69．如果你有翻譯活性很高的人酪氨酸酶的mRNA，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)以鑒定某個(gè)克隆的基因片段是否為酪氨酸酶的基因？【簡(jiǎn)答題答案】67、PCR是一種快速簡(jiǎn)便的體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，能在很短時(shí)間內(nèi)，將幾個(gè)拷貝的DNA放大上百萬倍。

其基本工作原理是

以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對(duì)分別與模板5ˊ末端和3ˊ末端相互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留復(fù)制的機(jī)制沿模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復(fù)這一過程，使目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。其反應(yīng)體系包括：模板DNA、特異性引物、耐熱DNA聚合酶、dNTP以及含Mg2+的緩沖液。

PCR反應(yīng)步驟為

（1）變性

95℃

15s

（2）退火

Tm-5℃

一般為55℃

30s（3）延伸

72℃

1.5min

。此三步為一個(gè)循環(huán)，一般進(jìn)行25～30次循環(huán)。最后一次循環(huán)的延伸反應(yīng)時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)（5min），以獲得較大量的DNA產(chǎn)物。68．雙脫氧末端終止法測(cè)序由Sanger創(chuàng)立，是常用方法之一。其基本原理是利用DNA聚合酶的聚合反應(yīng)，在試管內(nèi)復(fù)制待測(cè)DNA的隨機(jī)長(zhǎng)度的互補(bǔ)鏈。反應(yīng)設(shè)A、T、C、G體系，其中分別加入適當(dāng)比例的相應(yīng)ddNTP，由于ddNTP缺少3ˊ-OH，不能形成磷酸二酯鍵，而使合成反應(yīng)終止，致使4管中所合成的產(chǎn)物為隨機(jī)長(zhǎng)度的終止于相應(yīng)ddNTP的DNA片段。從總體看，4管中所有產(chǎn)物是一系列長(zhǎng)度只差1個(gè)核苷酸的聚合鏈，經(jīng)超薄高壓電泳可將其一一分辨。

大體過程為（1）單鏈模板的制備：可據(jù)M13噬菌體的特性，將目的基因用基因工程的方法插入M13復(fù)制型雙鏈DNA中，培養(yǎng)擴(kuò)增后，提取單鏈M13噬菌體作模板（2）模板-引物雜交：引物與待測(cè)DNA的3ˊ端上游雜交，并沿5ˊ→3ˊ方向延長(zhǎng)，所合成新鏈即待測(cè)DNA的互補(bǔ)鏈。（3）引物的延長(zhǎng)與合成阻斷：雜交液分4管，各管分別加入Klenow大片段、4種dNTP（其中一種被標(biāo)記）、一種ddNTP和緩沖液，保溫使引物延長(zhǎng)并隨機(jī)阻斷。（4）電泳：四泳道超薄聚丙烯酰胺-尿素凝膠高壓電泳。（5）放射自顯影和讀圖：將凝膠板干燥后，與X線片夾在一起，使X線片在電泳帶相應(yīng)位置暴光、顯影、定影后直讀圖像。自終端至始點(diǎn)讀出新合成鏈的5ˊ→3ˊ序列，其互補(bǔ)鏈即為待測(cè)DNA的堿基序列。69．設(shè)計(jì)一：可以酪氨酸酶RNA為模板合成的32P標(biāo)記的cDNA為探針，對(duì)克隆片段進(jìn)行Southern雜交。b）可以利用克隆片段與酪氨酸酶mRNA雜交，看能否使mRNA翻譯活性喪失，該克隆片段為酪氨酸酶的基因。第五章第六章分子生物學(xué)研究方法原理與技術(shù)練習(xí)題【單項(xiàng)選擇題】1、基因工程技術(shù)引起的生物變異屬于（）A．染色體變異B．基因突變C．基因重組D．不可遺傳的變異2、基因工程的操作步驟：①使目的基因與運(yùn)載體相結(jié)合，②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，③檢測(cè)目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求，④提取目的基因。正確的操作順序是（）A．③②④①B．②④①③C．④①②③D．③④①②3、基因工程常用的受體細(xì)胞有（）①大腸桿菌②枯草桿菌③支原體④動(dòng)植物細(xì)胞A．①②③④ B．①②③C．②③④ D．①②④4、下列有關(guān)基因工程技術(shù)的正確敘述是（）A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B．所有的限制酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列C．選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)5、下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述，正確的是（）A．基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；駼．基因診斷的基本原理是DNA分子雜交C．一種基因探針能檢測(cè)水體中的各種病毒D．原核生物基因不能用來進(jìn)行真核生物的遺傳改良6、我國科學(xué)家運(yùn)用基因工程技術(shù)，將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因?qū)朊藁?xì)胞并成功表達(dá)，培育出了抗蟲棉。下列敘述不正確的是（）A．抗蟲基因的提取和運(yùn)輸都需要專用的工具和運(yùn)載體B．重組DNA分子中增加一個(gè)堿基對(duì)，不一定導(dǎo)致毒蛋白的毒性喪失C．抗蟲棉的抗蟲基因可能通過花粉傳遞到近緣作物，從而造成基因污染D．轉(zhuǎn)基因棉花是否具有抗蟲特性是通過檢測(cè)棉花對(duì)抗生素抗性來確定的7、基因工程技術(shù)可使大腸桿菌合成人的蛋白質(zhì)。下列敘述不正確的是（）A．常用相同的限制性內(nèi)切酶處理目的基因和質(zhì)粒B．DNA連接酶和RNA聚合酶是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶C．可用含抗生素的培養(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒D．導(dǎo)入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá)8、基因治療是指（）A．對(duì)有基因缺陷的細(xì)胞進(jìn)行修復(fù)，從而使其恢復(fù)正常，達(dá)到治療疾病的目的B．把健康的外源基因?qū)氲接谢蛉毕莸募?xì)胞中，達(dá)到治療疾病的目的C．運(yùn)用人工誘變的方法，使有基因缺陷的細(xì)胞發(fā)生基因突變恢復(fù)正常D．運(yùn)用基因工程技術(shù)，把有缺陷的基因切除，達(dá)到治療疾病的目的9、下列關(guān)于質(zhì)粒的敘述，正確的是（）A．質(zhì)粒是廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞中的一種顆粒狀細(xì)胞器B．質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能夠自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子C．質(zhì)粒上有細(xì)菌生活所必需的基因D．細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過程一定是在宿主細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行的10、利用細(xì)菌大量生產(chǎn)人的胰島素，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．用適當(dāng)?shù)拿笇?duì)運(yùn)載體與人的胰島素基因進(jìn)行切割與連接B．用氯化鈣處理受體細(xì)菌表面，將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)菌C．通常通過檢測(cè)目的基因產(chǎn)物來檢測(cè)重組DNA是否已導(dǎo)入受體細(xì)菌D．重組DNA必須能在受體細(xì)菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，并合成人的胰島素11.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生

A.5′磷酸基和3′羥基基團(tuán)的末端B.5′磷酸基和3′磷酸基團(tuán)的末端

C.5′羥基和3′羥基基團(tuán)的末端D.3′磷酸基和5′羥基基團(tuán)的末端

E.以上都不是12.可識(shí)別并切割特異DNA序列的酶是

A.非限制性核酸外切酶B.限制性核酸內(nèi)切酶

C.限制性核酸外切酶D.非限制性核酸內(nèi)切酶

E.DNA酶13.有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶，以下哪個(gè)描述是錯(cuò)誤的？A.識(shí)別和切割位點(diǎn)通常是4～8個(gè)bp長(zhǎng)度B.大多數(shù)酶的識(shí)別序列具有回文結(jié)構(gòu)

C.在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵D.只能識(shí)別和切割原核生物DNA分子

E.只能切割含識(shí)別序列的雙鏈DNA分子14.在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的酶是

A.解鏈酶B.DNA聚合酶

C.DNA連接酶D.內(nèi)切酶

E.拓?fù)涿?5.對(duì)基因工程載體的描述，下列哪個(gè)不正確？A.可以轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞B.有限制酶的識(shí)別位點(diǎn)

C.可與目的基因相連D.是環(huán)狀DNA分子

E.有篩選標(biāo)志16.克隆所依賴的DNA載體的最基本性質(zhì)是

A.卡那霉素抗性B.青霉素抗性

C.自我復(fù)制能力D.自我表達(dá)能力

E.自我轉(zhuǎn)錄能力17.重組DNA技術(shù)中常用的質(zhì)粒DNA是

A.病毒基因組DNA的一部分B.細(xì)菌染色體外的獨(dú)立遺傳單位

C.細(xì)菌染色體DNA的一部分D.真核細(xì)胞染色體外的獨(dú)立遺傳單位

E.真核細(xì)胞染色體DNA的一部分18.下列哪種物質(zhì)一般不用作基因工程的載體？A.質(zhì)粒B.噬菌體

C.哺乳動(dòng)物的病毒D.逆轉(zhuǎn)錄病毒ＤＮＡE.大腸桿菌基因組19.關(guān)于pBR322質(zhì)粒描述錯(cuò)誤的是Ａ．有一些限制酶的酶切位點(diǎn)Ｂ．含有1個(gè)ori.Ｃ．含有來自大腸桿菌的lacZ基因片段Ｄ．含個(gè)氨卞青霉素抗性基因Ｅ．含四環(huán)素抗性基因。20.以ｍＲＮＡ為模板催化ｃＤＮＡ合成需要下列酶A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶

C.Klenow片段D.逆轉(zhuǎn)錄酶E.ＤＮＡ酶21.催化聚合酶鏈反應(yīng)需要下列酶A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶

C.TaqDNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶E.限制性核酸內(nèi)切酶22.關(guān)于ＰＣＲ的描述下列哪項(xiàng)不正確？A.是一種酶促反應(yīng)B.引物決定了擴(kuò)增的特異性

C.擴(kuò)增產(chǎn)物量大D.擴(kuò)增的對(duì)象是ＤＮＡ序列E.擴(kuò)增的對(duì)象是RNA序列23.在基因工程中，DNA重組體是指A.不同來源的兩段DNA單鏈的復(fù)性B.目的基因與載體的連接物C.不同來源的DNA分子的連接物D.原核DNA與真核DNA的連接物E.兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)基因形成的連接物24.基因工程操作中轉(zhuǎn)導(dǎo)是指A.把重組質(zhì)粒導(dǎo)入宿主細(xì)胞B.把DNA重組體導(dǎo)入真核細(xì)胞C.把DNA重組體導(dǎo)入原核細(xì)胞D.把外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞E.以噬菌體或病毒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞25.重組DNA的篩選與鑒定不包括哪一方法A.限制酶酶切圖譜鑒定B.PCR擴(kuò)增鑒定C.顯微注射D.藍(lán)白篩選E.抗藥篩選【單選答案】1.C2.C3.D4.C5.B6.D7.B8.B9.B10.C11.Ａ12.Ｂ13.Ｄ14.Ｃ15.Ｄ16.Ｃ17.Ｂ18.Ｅ19.Ｃ20.Ｄ21.Ｃ22.Ｅ23.Ｂ24.E25.Ｃ【多項(xiàng)選擇題】1.在分子克隆中，目的DNA可來自A.原核細(xì)胞染色體DNAB.真核細(xì)胞染色體DNAC.人工合成的DNAD.聚合酶鏈反應(yīng)E.真核細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA2.重組DNA技術(shù)基本過程包括A.目的基因的獲取B.克隆載體的構(gòu)建C.目的DNA與載體的連接D.將重組體導(dǎo)入受體菌E.重組DNA分子轉(zhuǎn)化受體菌的篩選3.分子克隆又稱A.基因克隆B.DNA克隆C.單克隆抗體制備D.構(gòu)建基因組DNA文庫E.基因重組4.參與聚合酶鏈反應(yīng)體系的組分有A.DNA引物B.目的DNAC.三磷酸脫氧核苷D.TaqDNA聚合酶E.RNA聚合酶5．從基因組DNA文庫或cDNA文庫分離、擴(kuò)增某一感興趣基因的過程就是A.基因克隆B.分子克隆C.DNA克隆D.構(gòu)建基因組DNA文庫E.重組DNA技術(shù)6.可用作克隆基因載體的DNA有A.細(xì)菌質(zhì)粒DNAB.真核細(xì)胞基因組DNAC.病毒DNAD.酵母人工染色體E.噬菌體DNA7．將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)菌的方法有A.接合B.轉(zhuǎn)座C.感染D.轉(zhuǎn)染E.轉(zhuǎn)化8．轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞的方法有A.磷酸鈣共沉淀法B.電穿孔C.DEAE葡聚糖法D.脂質(zhì)體載體法E.顯微注射法9．下述操作可能用于基因工程過程的是Ａ．DNA的制備和酶解Ｂ．不同來源DNA的拼接Ｃ．重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞Ｄ．細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖Ｅ．核酸分子雜交10．關(guān)于質(zhì)粒DNA的敘述正確的是A.是基因組DNA的組成部分B.具有獨(dú)立復(fù)制功能C.含有抗生素抗性基因D.含有感興趣的目的DNAE.具有編碼蛋白質(zhì)的功能【多項(xiàng)選擇題參考答案】1.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ2.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ3.Ａ、Ｂ、Ｅ4.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ5.Ａ、Ｂ、Ｃ6.Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ7.Ｃ、Ｄ、Ｅ8.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ9.Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ10.Ｂ、Ｃ【填空題】１、DNA重組技術(shù)主要涉及兩大核心技術(shù)：和。２、一個(gè)完整的基因克隆過程應(yīng)包括：目的基因的獲取，_________的選擇與改造，____與____的連接，重組DNA分子受體細(xì)胞，出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞。３、限制性核酸內(nèi)切酶是由________產(chǎn)生的一類識(shí)別_____，并在識(shí)別位點(diǎn)切割鍵的核酸內(nèi)切酶。４、科學(xué)家感興趣的外源基因又稱_____，其來源有_____、_____、_____、_____等幾種途徑。５、常用的目的基因與載體連接的方式有_____、_____、_____、_____。６、根據(jù)采用的克隆載體性質(zhì)不同，將重組DNA分子導(dǎo)入細(xì)菌的方法有___、___等。７、基因組文庫含有組織或細(xì)胞的____信息，cDNA文庫含有組織或細(xì)胞的____信息。8、載體的本質(zhì)是，它應(yīng)具備下列基本條件：、、、和?！咎羁疹}答案】１．DNA重組、克?。玻d體、目的基因與載體、導(dǎo)入、篩選３．細(xì)菌、雙鏈DNA中的特定堿基序列、磷酸二酯４．目的基因、制備基因組文庫、構(gòu)建cDNA文庫、PCR擴(kuò)增、人工合成DNA技術(shù)５．粘性末端連接、平頭末端連接、人工接頭法、同源多聚尾連接法６．轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)７．DNA、mRNA。8．DNA、具有獨(dú)立復(fù)制能力、具有多克隆位點(diǎn)、具有篩選標(biāo)志、具有足夠的容量、能導(dǎo)入受體細(xì)胞【名詞解釋】1.基因工程2.DNA重組3.克隆4.DNA克隆5.目的基因6.基因載體7.質(zhì)粒8.限制性核酸內(nèi)切酶9.基因文庫10.cDNA文庫11.轉(zhuǎn)化12.轉(zhuǎn)導(dǎo)13.轉(zhuǎn)染【名詞解釋答案】1、基因工程是指在體外將DNA分子“剪切”并重新“拼接”形成一個(gè)新的重組DNA分子，然后將它導(dǎo)入細(xì)菌或動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)使之表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物或改造新的生物品種。2、DNA重組是指用酶學(xué)方法將不同來源的DNA進(jìn)行切割、連接，組成一個(gè)新的DNA分子的過程。3、克隆(clone)原指一個(gè)親本細(xì)胞經(jīng)無性繁殖產(chǎn)生無數(shù)個(gè)相同細(xì)胞的子代群體的過程。4、DNA克隆是指將重組DNA分子導(dǎo)入到合適的受體細(xì)胞中，使其擴(kuò)增和繁殖，以獲得大量的相同的DNA分子，又稱分子克隆或基因克隆。5、目的基因是要分離和克隆的相應(yīng)基因。因目的基因片段需插入載體，導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)，所以對(duì)宿主細(xì)胞DNA而言，又稱它為外源性基因或外源性DNA。6、載體：能夠攜帶外源DNA進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)的DNA分子，被稱為基因載體。7、質(zhì)粒：是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，能自主復(fù)制的共價(jià)閉合環(huán)狀雙鏈DNA。8、限制性內(nèi)切酶：是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異識(shí)別雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)。9、基因文庫：將所有的重組DNA分子都導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，得到分子克隆的混合體，這樣一個(gè)混合體稱為基因文庫。10、cDNA文庫：從組織細(xì)胞中分離得到純化的mRNA，然后以mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成其互補(bǔ)DNA，再復(fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后導(dǎo)入受體菌內(nèi)，擴(kuò)增，構(gòu)建cDNA文庫。11、轉(zhuǎn)化：是指以質(zhì)粒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細(xì)胞，并使其獲得新的表型的過程。12、轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體或細(xì)胞病毒為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并獲得新的表型的過程稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)。13、轉(zhuǎn)染：真核細(xì)胞主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程稱為轉(zhuǎn)染?！竞?jiǎn)答】１.載體應(yīng)具備以下基本條件２.常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？３.重組DNA技術(shù)常包括哪些基本步驟：４.常用的目的基因的獲取方法有哪些？５.常用的目的基因與載體的連接方法有哪些？５.何謂限制性核酸內(nèi)切酶？寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)DNA序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。６.解釋質(zhì)粒，為什么質(zhì)?？勺鳛榛蜉d體?！竞?jiǎn)答參考答案】１、①具有獨(dú)立復(fù)制能力；②具備多個(gè)限制酶的識(shí)別位點(diǎn)(多克隆位點(diǎn))；③具有遺傳表型或篩選標(biāo)志；④有足夠的容量以容納外源DNA片段；⑤可導(dǎo)入受體細(xì)胞。經(jīng)過人工構(gòu)建的載體，不但能與外源基因相連接，導(dǎo)入受體細(xì)胞，還能利用本身的調(diào)控系統(tǒng)，使外源基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制并表達(dá)。２、（1）限制性核酸內(nèi)切酶：識(shí)別并特異切割DNA堿基序列；（2）DNApolⅠ：催化缺口平移，制備高比度DNA探針；（3）Klenow片段：合成cDNA第二條鏈，補(bǔ)齊或標(biāo)記雙鏈DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA體外擴(kuò)增(PCR)；（5）逆轉(zhuǎn)錄酶：催化合成cDNA；(6)T4DNA聚合酶：聚合補(bǔ)平或標(biāo)記DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA連接酶：催化2條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵；（8）大腸桿菌DNA連接酶：應(yīng)用于黏端DNA或切口間連接；（9）T4DNA連接酶：應(yīng)用于粘性或平末端DNA的連接；（10）末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶：給載體或cDNA加上互補(bǔ)的同聚尾、加標(biāo)記物；（11）堿性磷酸酶：防止載體自身連接、32P標(biāo)記5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端標(biāo)記放射性核素。３、（1）分離制備目的基因——“分”；（2）切割目的基因和載體——“切”；（3）目的基因與載體的連接——“連”；（4）將重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞——“轉(zhuǎn)”；（5）篩選并鑒定含重組DNA分子的受體細(xì)胞克隆——“篩”；（6）克隆基因在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)——“表達(dá)”。 ４、（1）制備基因組文庫；（2）構(gòu)建cDNA文庫；（3）PCR擴(kuò)增目的基因；（4）人工合成DNA技術(shù)。（5）RACE克隆、圖位克隆等５、⑴粘性末端連接：將靶基因片段和載體DNA經(jīng)相同的限制酶分別切割，使它們兩端產(chǎn)生相同的粘性末端。然后經(jīng)粘性末端堿基配對(duì)，再經(jīng)DNA連接酶作用，共價(jià)連接成新的重組DNA分子；⑵平頭末端連接：將平末端的DNA分子在T4DNA連接酶催化下，使DNA分子的3′OH和5′P進(jìn)行共價(jià)結(jié)合；⑶人工接頭法：是指利用人工接頭加在平端DNA片段的兩端，然后用相應(yīng)限制酶切割人工接頭以產(chǎn)生粘性末端，再與帶相同粘性末端的載體相連；⑷同源多聚尾連接法：在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化下，在線型載體分子的兩端加上單一核苷酸如dG組成的多聚尾；而在目的DNA分子的兩端加上dC尾，兩者混合退火，然后經(jīng)DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填補(bǔ)裂口處缺失的核苷酸，再通過DNA連接酶修復(fù)成環(huán)狀的雙鏈DNA。6、限制性核酸內(nèi)切酶(RE)是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異識(shí)別雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)。限制酶的識(shí)別和切割位點(diǎn)通常是4～8個(gè)bp長(zhǎng)度且具有回文序列的DNA片段，主要產(chǎn)生5′突出、3′突出的粘性末端或平端。當(dāng)一個(gè)樣本DNA被一個(gè)特定的限制酶切割后，可以產(chǎn)生一批相同堿基序列的DNA片段，進(jìn)而可以用于基因重組、克隆、核酸分子雜交與序列分析等。7、質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，能自主復(fù)制的共價(jià)閉合環(huán)狀雙鏈DNA。經(jīng)過人工構(gòu)建的載體，不但能與外源基因相連接，而且質(zhì)粒含有復(fù)制起始原點(diǎn)(ori)，此起始點(diǎn)與順式作用調(diào)控元件構(gòu)成一個(gè)復(fù)制子(復(fù)制區(qū)內(nèi))，能借助宿主細(xì)菌染色體DNA復(fù)制所用的同一套酶系獨(dú)立地進(jìn)行自我復(fù)制、克隆。第五章第六章練習(xí)題3【單項(xiàng)選擇題】1．科學(xué)家們經(jīng)過多年的努力，創(chuàng)立了一種新興的生物技術(shù)——基因工程，實(shí)施該工程的最終目的是（

）A．定向提取生物體DNA分子B．定向?qū)NA分子進(jìn)行人工“剪切”C．定向改造生物的遺傳性狀D．在生物體外對(duì)DNA分子進(jìn)行改造2．下列哪項(xiàng)不是基因工程中用來運(yùn)載目的基因的載體？（

）A．細(xì)菌質(zhì)粒

B．噬菌體C、動(dòng)植物病毒

D．細(xì)菌核區(qū)的DNA3．基因工程中，常用的細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是（

）A．結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便B．繁殖速度快C．遺傳物質(zhì)含量少D．性狀穩(wěn)定，變異少4．質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體，它的主要特點(diǎn)是（

）

①能自主復(fù)制

②不能自主復(fù)制

③結(jié)構(gòu)很小④蛋白質(zhì)

⑤環(huán)狀RNA

⑥環(huán)狀DNA

⑦能“友好”地“借居”A．①③⑤⑦

B．②④⑥C．①③⑥⑦

D．②③⑥⑦5．在基因工程中用來修飾改造生物基因的工具是（

）A．限制酶和連接酶

B．限制酶和水解酶C．限制酶和運(yùn)載體

D．連接酶和運(yùn)載體6．有關(guān)基因工程的敘述正確的是（

）A．限制性內(nèi)切酶只在獲得目的基因時(shí)才用B．重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成C．質(zhì)粒都可作運(yùn)載體D．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料7．不屬于目的基因與運(yùn)載體結(jié)合過程的是（

）A．用一定的限制酶切割質(zhì)粒露出粘性末端B．用同種限制酶切割目的基因露出粘性末端C．將切下的目的基因的片段插入到質(zhì)粒切口處D．將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增8．科學(xué)家將含有人的抗胰蛋白酶基因的DNA片段注射到羊的受精卵中，該受精卵發(fā)育的羊能分泌含抗胰蛋白酶的奶。這一過程涉及（

）

①DNA按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則自我復(fù)制,

②DNA以其一條鏈為模板合成RNA

③RNA以自身為模板自我復(fù)制,

④按照RNA密碼子的排列順序合成蛋白質(zhì)A．①③

B．③④C．①②③

D．①②④9．實(shí)施基因工程第一步的一種方法是把所需的基因從供體細(xì)胞內(nèi)分離出來，這要利用限制性內(nèi)切酶。從大腸桿菌中提取的一種限制性內(nèi)切酶ECORI，能識(shí)別DNA分子中的GAATTC序列，切點(diǎn)在G與A之間。這是應(yīng)用了酶的（

）A．高效性B．專一性C．多樣性D．催化活性受外界條件影響10．基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是（

）A．人工合成目的基因B．目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D．目的基因的檢測(cè)和表達(dá)11．下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述中正確的是（

）A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B．所有的限制酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列C．選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)12．下列說法正確的是（

）A．DNA連接酶最初是從人體細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的B．限制酶的切口一定是GAATTC堿基序列C．質(zhì)粒是基因工程中惟一用作運(yùn)載目的基因的運(yùn)載體D．利用運(yùn)載體在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制的過程可稱為“克隆”13．下列關(guān)于限制酶的說法不正確的是（

）A．限制酶廣泛存在于各種生物中，微生物中很少分布B．一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列C．不同的限制酶切割DNA的切點(diǎn)不同D．限制酶的作用是用來提取目的基因14.確切地講，cDNA文庫包含A.一個(gè)物種的全部基因信息

B.一個(gè)物種的全部mRNAC.一個(gè)生物體組織或細(xì)胞的全部基因信息

D.一個(gè)生物體組織或細(xì)胞的全部mRNA信息E.一個(gè)生物體組織或細(xì)胞所表達(dá)的全部mRNA信息15.利用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增特異DNA序列重要原因之一是：A.反應(yīng)體系內(nèi)存在特異DNA模板

B.反應(yīng)體系內(nèi)存在特異RNA模板C.反應(yīng)體系內(nèi)存在特異DNA引物

D.反應(yīng)體系內(nèi)存在特異RNA引物E.反應(yīng)體系內(nèi)存在的TaqDNA聚合酶具有識(shí)別特異DNA序列的作用16.表達(dá)人類蛋白質(zhì)的最理想的細(xì)胞體系是A.Eoli表達(dá)體系

B.原核表達(dá)體系C.酵母表達(dá)體系

D.昆蟲表達(dá)體系E.哺乳類細(xì)胞表達(dá)體系17.基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生A.3`磷酸基末端和5`羥基末端

B.5`磷酸基末端和3`羥基末端C.3`磷酸基末端和5`磷酸基末端

D.5`羥基末端和3`羥基末端E.3`羥基末端、5`羥基末端及磷酸18.下列描述最能確切表達(dá)質(zhì)粒DNA作為克隆載體特性的是A.小型環(huán)狀雙鏈DNA分子

B.攜帶有某些抗性基因C.在細(xì)胞分裂時(shí)恒定地傳給子代細(xì)胞

D.具有自我復(fù)制功能E.獲得目的基因19.用于鑒別轉(zhuǎn)化細(xì)菌是否含重組DNA的最常用方法是A.抗藥性選擇

B.分子雜交選擇

C.RNA反轉(zhuǎn)錄D.免疫學(xué)方法

E.體外翻譯【單選題答案】1．C

2．D

3．B

4．C

5．A

6．D

7．D

8．D

9．B

10．C

11．C

12．D

13．A14.E15.C16.E17.B18.D19.A【單項(xiàng)選擇題】1．F因子從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移過程稱為：

A．轉(zhuǎn)化

B．轉(zhuǎn)導(dǎo)

C．轉(zhuǎn)染

D．轉(zhuǎn)座

E．接合2．通過自動(dòng)獲取或人為地供給外源DNA使受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，稱為：

A．轉(zhuǎn)化

B．轉(zhuǎn)導(dǎo)

C．轉(zhuǎn)染

D．轉(zhuǎn)座

E．接合3．溶原菌是指：

A．整合了噬菌體基因組的細(xì)菌

B．整合了質(zhì)?；蚪M的細(xì)菌

C．含有獨(dú)立噬菌體基因組的細(xì)菌

D．含有獨(dú)立質(zhì)粒基因組的細(xì)菌

E．含有獨(dú)立噬菌體和質(zhì)?；蚪M的細(xì)菌4．由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排稱為：

A．轉(zhuǎn)化

B．轉(zhuǎn)導(dǎo)

C．轉(zhuǎn)染

D．轉(zhuǎn)座

E．接合5．由整合酶催化、在兩個(gè)DNA序列的特異位點(diǎn)間發(fā)生的整合稱為：

A．位點(diǎn)特異的重組

B．同源重組

C．基本重組

D．隨機(jī)重組

E．人工重組6．發(fā)生在同源序列間的重組稱為：

A．位點(diǎn)特異的重組

B．非位點(diǎn)特異的重組

C．基本重組

D．隨機(jī)重組

E．人工重組7．限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生：

A．5’磷酸基和3’羥基基團(tuán)的末端

B．3’磷酸基和5’羥基基團(tuán)的末端

C．5’磷酸基和3’磷酸基團(tuán)韻末端

D．5’羥基和3’羥基基團(tuán)的末端

E．以上都不是8．可識(shí)別并切割特異DNA序列的稱：

A．限制性核酸外切酶

B．限制性核酸內(nèi)切酶

C．非限制性核酸外切酶

D．非限制性核酸內(nèi)切酶

E．DNA酶9．限制酶的識(shí)別順序通常是：

A．聚腺苷酸

B．聚胞苷酸

C．RNA聚合酶附著點(diǎn)

D．回文對(duì)稱序列

E．甲基化“帽”結(jié)構(gòu)10．限制酶：

A．從噬菌體中提取而得

B．可將單鏈DNA任意切開

C．可將雙鏈DNA任意切開

D．可將雙鏈DNA特異切開

E．不受DNA甲基化影響．11．限制酶的作用特性不包括：

A．在對(duì)稱序列處切開DNA

B．同時(shí)切開雙鏈DNA

C．DNA兩鏈的切點(diǎn)常在同一位點(diǎn)

D．酶切后的DNA片段多具有粘性互補(bǔ)末端

E．酶辨認(rèn)的堿基一般為4—6個(gè)12．限制酶的特點(diǎn)不包括：

A．只識(shí)別一種核苷酸序列

B．其識(shí)別不受DNA來源的限制

C．不同生物的DNA經(jīng)相同限制酶切割后產(chǎn)生相同末端

D．對(duì)雙鏈和單鏈DNA同樣切割

E．同一限制酶在一DNA分子上可有數(shù)個(gè)切點(diǎn)

13．關(guān)于限制酶的敘述錯(cuò)誤的是：

A．能識(shí)別DNA特定的堿基順序并在特定的位點(diǎn)切開DNA

B．切割點(diǎn)附近的堿基順序一般呈回文結(jié)構(gòu)

C．它能專一降解經(jīng)甲基化修飾的DNA

D．是重組DNA的主要工具酶

E．主要從細(xì)菌中獲得14．在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的是DNA的：

A．聚合酶

B．解鏈酶

C．連接酶

D．拓?fù)涿?/p>

E．內(nèi)切酶15．在重組DNA技術(shù)領(lǐng)域所說的分子克隆是指：

A．建立單克隆抗體

B．建立多克隆抗體

C．構(gòu)建重組DNA分子

D．無性繁殖DNA-

E．有性繁殖DNA16．無性繁殖依賴DNA載體的最基本性質(zhì)是：

A．青霉素抗性

B．卡那霉素抗性

C．自我復(fù)制能力

D．自我轉(zhuǎn)錄能力

E．自我表達(dá)能力17．重組DNA技術(shù)領(lǐng)域常用的質(zhì)粒DNA是：

A．細(xì)菌染色體DNA的一部分

B．細(xì)菌染色體外的獨(dú)立遺傳單位

C．病毒基因組DNA的一部分

D．真核細(xì)胞染色體DNA的一部分

E．真核細(xì)胞染色體外的獨(dú)立遺傳單位18．pBR322是：

A．天然的酵母質(zhì)粒

B．經(jīng)人工改造的酵母質(zhì)粒

C．天然的大腸桿菌質(zhì)粒

D．經(jīng)人工改造的大腸桿菌質(zhì)粒

E．經(jīng)人工改造的噬菌體19．基因工程的操作程序可簡(jiǎn)單地概括為：

A．載體和目的基因的分離、提純與鑒定

B．分、切、接、轉(zhuǎn)、篩

C．將重組體導(dǎo)人宿主細(xì)胞，篩出含目的基因的陽性株

D．將載體和目的基因接合成重組體

E．限制酶的應(yīng)用20．基因工程的基本過程不包括：

A．載體和目的基因的分離

B．限制酶的切割

C．DNA重組體的形成及轉(zhuǎn)化

D．重組體的篩選與鑒定

E．重組體的序列分析21．理想的基因工程載體應(yīng)：

A．分子盡可能大

B．有適宜的限制酶切割位點(diǎn)

C．含有多個(gè)耐藥性基因

D．不易在宿主細(xì)胞間轉(zhuǎn)移

E．能整合于宿主細(xì)胞DNA，并隨其復(fù)制22．下列哪一種物質(zhì)不能作為基因（克隆）載體：

A．質(zhì)粒

B．λ噬菌體

C．M13噬菌體

D．病毒RNA

E．逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA23．用于轉(zhuǎn)化哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的常用載體是：

A．質(zhì)粒

B．λ噬菌體

C．M13噬菌體

D．逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA

E．大腸桿菌基因組24．關(guān)于建立cDNA文庫的敘述，錯(cuò)誤的是：

A．從特定組織中提出mRNA

B．將特定細(xì)胞的DNA用限制酶切割后，克隆到噬菌體或質(zhì)粒中

C．用逆轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對(duì)應(yīng)單股DNA

D．用DNA聚合酶，以單股DNA為模板合成雙鏈DNA

E．加SAM，以使新生的DNA雙鏈甲基化25．cDNA文庫包括該種生物：

A．某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因

B．所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因

C．所有結(jié)構(gòu)基因

D．結(jié)構(gòu)基因與不表達(dá)的調(diào)控區(qū)

E．內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)26．某限制性內(nèi)切核酸酶切割5’…GGGGGG↓AATTCC…3’序列后產(chǎn)生：

A．5突出末端

B．3突出末端

C．5及3突出末端

D．5或3突出末端

E．平頭末端27．目的基因與載體連接不涉及：

A．限制酶

B．單鏈核酸酶

C．末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶

D．DNA連接酶

E．核酸外切酶28．理想的宿主細(xì)胞不應(yīng)有下列哪種特點(diǎn)：

A．易接納重組子

B．對(duì)載體的復(fù)制擴(kuò)增無嚴(yán)格限制

C．不存在特異的限制酶體系以降解外源DNA

D．不對(duì)外源DNA進(jìn)行修飾

E．含有載體的篩選標(biāo)記基因29．基因工程中不需要：

A．限制酶

B．基因載體

C．DNA連接酶

D．末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶

E．核酶30．重組噬菌體DNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞的過程屬于：

A．轉(zhuǎn)化

B．轉(zhuǎn)導(dǎo)

C．轉(zhuǎn)位

D．轉(zhuǎn)染

E．轉(zhuǎn)錄

31．有關(guān)重組體轉(zhuǎn)化及表達(dá)的敘述，錯(cuò)誤的是：

A．宿主細(xì)胞經(jīng)CaCl2處理后對(duì)重組體的通透性增加

B．電擊法也可增加宿主細(xì)胞的通透性

C．噬菌體為載體的重組體必須以體外包裝的方式轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞

D．真核基因難于在原核細(xì)胞中表達(dá)

E．轉(zhuǎn)化生殖細(xì)胞可采用直接導(dǎo)入的方法32．連接目的基因與載體不能采用：

A．粘端連接

B．平端連接

C．尾接法

D．人工連接器

E．非共價(jià)鍵連接33．直接針對(duì)目的DNA進(jìn)行篩選的方法是：

A．青霉素抗藥性

B．氨卞青霉素抗藥性

C．分子雜交

D．分子篩

E．電泳34．“克隆”某一目的DNA的過程不包括：

A．基因載體的選擇與構(gòu)建

B．外源基因與載體的拼接

C．重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞

D．篩選并無性繁殖含重組分子的受體細(xì)胞

E．表達(dá)目的基因編碼的蛋白質(zhì)35．表達(dá)人類蛋白質(zhì)的最理想的細(xì)胞體系是：

A．E．coli表達(dá)體系

B．原核表達(dá)體系

C．酵母表達(dá)體系

D．昆蟲表達(dá)體系

E．哺乳類細(xì)胞表達(dá)體系36．不能用作克隆載體的DNA是：

A．質(zhì)粒DNA

B．噬菌體DNA

C．細(xì)菌基因組DNA

D．腺病毒DNA

E．逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA37．克隆的真核黃素基因組DNA可在多種系統(tǒng)表達(dá)，例外的是：

A．E．coli表達(dá)體系

B．酵母表達(dá)體系

C．昆蟲表達(dá)體系

D．COS細(xì)胞表達(dá)體系

E．CHO細(xì)胞表達(dá)體系38．原核生物的粘端連接方式不涉及；A．質(zhì)粒B．限制性核酸內(nèi)切酶C．核酸外切酶D．退火E．DNA連接酶

39.下列關(guān)于同裂酶的敘述錯(cuò)誤的是()A.是從不同菌種分離到的不同的酶,也稱異源同工酶。B.它們的識(shí)別序列完全相同。C.它們的切割方式可以相同，也可以不同。D.有些同裂酶識(shí)別的完整序列不完全一樣，但切割位點(diǎn)間的序列一樣。E.兩種同裂酶的切割產(chǎn)物連接后，可能會(huì)丟失這兩個(gè)同裂酶的識(shí)別位點(diǎn)。40.多數(shù)限制酶消化DNA的最佳溫度是（）A.37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃41.下列關(guān)于限制酶的敘述錯(cuò)誤的是()A.I類限制酶反應(yīng)需要Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。B.II類限制酶反應(yīng)需要Mg2+、ATP。C.III類限制酶反應(yīng)需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促進(jìn)反應(yīng)，但不是絕對(duì)需要。D.I、III類限制酶對(duì)DNA有切割和甲基化活性，II類限制酶對(duì)DNA只有切割活性而無甲基化活性。E.II類限制酶要求嚴(yán)格的識(shí)別序列和切割點(diǎn)，具有高度精確性。42.多數(shù)II類限制酶反應(yīng)最適PH是()A.PH:2-4B.PH:4-6C.PH:6-8D.PH:8-10E.PH:4-1043.下列關(guān)于限制酶反應(yīng)的說法錯(cuò)誤的是()A.限制酶識(shí)別序列內(nèi)或其鄰近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能會(huì)阻礙限制酶的酶解活性。B.許多限制酶對(duì)線性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明顯差異的。C.有些限制酶對(duì)同一DNA底物上不同酶切位點(diǎn)的切割速率會(huì)有差異。D.限制酶反應(yīng)緩沖系統(tǒng)一般不用磷酸緩沖液，是由于磷酸根會(huì)抑制限制酶反應(yīng)。E.BSA對(duì)許多限制酶的切割活性都有促進(jìn)作用，所以酶切反應(yīng)中常加入一定量的BSA。44.II類限制酶反應(yīng)中必須的陽離子是（）A.Na+B.Ca2+C.Mg2+D.Zn2+E.Mn2+45.RFLP形成的原因是（）A.由于遺傳變異造成同源染色體中堿基的隨機(jī)變化。B.使用不同的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行切割。C.雜交時(shí)使用不同的探針。D.每種染色體存在兩條。E.提取不同的染色體DNA酶切。46.下列關(guān)于限制酶命名的表示方法，正確的是（）A.Sau.3AIB.B.amHIC.pstID.EcorIE.HindIII47.需進(jìn)行DNA部分酶切時(shí)，控制下列哪種條件最合適（）A.反應(yīng)時(shí)間B.反應(yīng)體積C.PHD.限制酶量E.反應(yīng)溫度48．限制酶的星號(hào)活性是指在非正常條件下，限制酶（）A.識(shí)別和切割序列發(fā)生變化。B.切割活性大大提高。C.識(shí)別和切割序列與原來完全不同。D.可以任意切割DNA。E.只能部分切割DNA。49.限制性內(nèi)切酶可特異性識(shí)別()A.雙鏈DNA的特定堿基對(duì)B.雙鏈DNA的特定堿基序列C.單鏈RNA的特定堿基序列D.單鏈DNA的特定堿基序列E雙鏈RNA的特定堿基對(duì)50.下列與RFLP相關(guān)的一條是()A.不同限制酶在單個(gè)染色體DNA上的限制性圖譜。B.兩種物種個(gè)體間的限制性圖譜。C.同一個(gè)體等位基因的限制性圖譜。D.同一物種不同個(gè)體的限制性圖譜。E.非同源染色體用同種限制酶切形成的限制酶圖譜。【單項(xiàng)選擇題答案】1．E

2.A

3.A

4.D

5.A

6.C

7.A

8.B

9.D

10.D

11.C

12.D

13.C

14.C

15.D

16.C

17.B

18.D

19.B

20.E

21.B

22.D

23.D

24.B

25.C

26.E

27.E

28.E

29.E

30.D

31.C

32.E

33.C

34.E

35.E

36.C

37.A

38.C

39.B40.A41.B42.C43.D44.C45.A46.E47.D48.A49.B50D練習(xí)題4【單選題】1.用DEAE膜片法回收電泳分離的DNA片段時(shí)，在緊靠目的DNA片段前方的凝膠切一裂縫，以插入DEAE纖維素膜，該裂縫長(zhǎng)度與DNA條帶相比應(yīng)（C）A.略短B.等長(zhǎng)C.略長(zhǎng)D.A或B都可E.A、B、C都可2.用透析膜插片凝膠電泳法回收DNA片段時(shí)，再區(qū)帶前挖一小槽，將透析膜置于槽中，這時(shí)應(yīng)注意（B）A.透析膜要接觸DNA區(qū)帶一側(cè)的膠緣。B.透析膜不能接觸DNA區(qū)帶一側(cè)的膠緣。C.透析膜要接觸DNA區(qū)帶相對(duì)一側(cè)的膠緣。D.透析膜不能接觸DNA區(qū)帶相對(duì)一側(cè)的膠緣。E.隨意插入槽中即可。3.在回收DNA片段時(shí)，觀察電泳結(jié)果為盡量減少對(duì)DNA的照射損傷應(yīng)使用（A）A.長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外B.短波長(zhǎng)紫外C.長(zhǎng)波長(zhǎng)紅外D.短波長(zhǎng)紅外E.ABCD都不可4.DNA回收時(shí)，如要除去EB（溴化乙錠）可用下列那種試劑（A）A.正丁醇B.苯酚C.氯仿D.異戊醇E.乙醇5.在DNA分子克隆時(shí)，常用到部分填補(bǔ)法，填補(bǔ)時(shí)應(yīng)注意（E）A.控制反應(yīng)溫度B.控制酶的反應(yīng)時(shí)間C.控制DNA聚合酶的用量D.控制反應(yīng)PHE.限制dNTP的種類6.下列關(guān)于平末端連接的說法正確的是（B）A.同等條件下連接效率高于粘末端連接的連接效率。B.加入凝聚劑PEG8000可促進(jìn)平末端連接。C.平末端連接時(shí)反應(yīng)溫度要比粘末端連接溫度高。D.平末端連接方法的使用僅限于酶切后產(chǎn)生的兩個(gè)平末端之間的連接。E.平末端連接比粘末端連接更易產(chǎn)生自身環(huán)化。7.用同一種酶切割載體和目的基因后進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物會(huì)含大量自身環(huán)化載體，采用下列哪種酶處理，可防止自身環(huán)化（E）A.核酸內(nèi)切酶B.核苷酸激酶C.核酸外切酶D.末端轉(zhuǎn)移酶E.堿性磷酸酶8.分子克隆中用T載體主要是與下列哪種產(chǎn)物連接（D）A.單酶切產(chǎn)物B.雙酶切產(chǎn)物C.同裂酶產(chǎn)物D.PCR產(chǎn)物E.酶切后形成的平末端產(chǎn)物9.采用BamHI單切載體和目的基因后，進(jìn)行重組連接前要（D）A.65℃處理10分鐘使BamHI滅活。B.用堿性磷酸酶處理載體防止其自身環(huán)化。C.電泳檢測(cè)酶切結(jié)果。D.A、B、C都正確。E.只有A、C正確。10.粘末端連接的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便且（C）A.可產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)B.載體易自身環(huán)化C.易于回收片段D.具有方向性E.選時(shí)更簡(jiǎn)便11.下列哪種DNA結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)化時(shí)能獲得最高轉(zhuǎn)化效率（）A.線形雙鏈DNAB.單鏈線形DNAC.完整的環(huán)狀雙鏈DNAD.開口環(huán)狀雙鏈DNAE.A和C12.下列表型中，哪種是基因工程上的理想的受體菌表型（B）A.r+m+rec+B.r-m-rec-C.r-m+rec+D.r+m+rec-E.r-m-rec+13.大腸桿菌出現(xiàn)感受態(tài)的生理期是（B）A.潛伏期B.對(duì)數(shù)期C.對(duì)數(shù)后期D.平衡期E.衰亡期14.CaCl2法制備E.coli感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，攝入ＤＮＡ溫度是（E）A.0℃B.16℃C.37℃D.25℃E.42℃15.關(guān)于感受態(tài)細(xì)胞的下列說法不正確的是（C）A.有人工感受態(tài)細(xì)胞和自然感受態(tài)細(xì)胞。B.具有可誘導(dǎo)性。C.有可轉(zhuǎn)移性。D.不同種細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的生理時(shí)期不同。E.不同種細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例不同。【多選題】1.下列因素中影響限制酶切割的有(A,B,C,D,E)A.EDTA濃度B.甘油濃度C.DNA純度D.酶的自身活性E.鹽濃度2.限制酶反應(yīng)中出現(xiàn)星活性的可能原因是（ABDE）A.酶濃度太高B低鹽C鹽濃度過高D高PHE甘油濃度>5%（V/V）3.限制酶切割后的DNA電泳得到的電泳條帶有些擴(kuò)散，可能原因是（B，C，D，E）A.酶失活B有蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合C酶切條件不合適D有外切核酸酶污染E星號(hào)活性4.下列有關(guān)回文序列的描述正確的是（A，B，C）A.是II類限制酶的識(shí)別序列B是某些蛋白的識(shí)別序列C是基因的旁側(cè)序列D是高度重復(fù)序列E是衛(wèi)星序列5.下列有關(guān)回文序列的一般特征正確的是（B，C，D，E）A.可增強(qiáng)基因表達(dá)B有對(duì)稱軸C是自我互補(bǔ)的序列D.兩條鏈從5‘3‘方向的序列一致E是II類限制酶的識(shí)別序列6.關(guān)于II類限制酶說法正確的是（B，D）A.具內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性B.僅有內(nèi)切核酸酶活性C.只識(shí)別非甲基化的DNA序列D.II類限制酶反應(yīng)條件只需要Mg2+E.II類限制酶反應(yīng)需要Mg2+,ATP7.通過限制性片段分析，可對(duì)等位基因進(jìn)行精確比較是因?yàn)椋˙，C）A.限制酶只切割兩個(gè)變異等位基因中的一個(gè)B.限制酶位點(diǎn)可作為遺傳標(biāo)記C.它不依賴變異的等位基因的產(chǎn)物的功能D.不同組織等位基因的核苷酸序列存在差異E.同一組織等位基因核苷酸序列不會(huì)完全相同8.下列關(guān)于II類限制酶的敘述正確的是（B，C，D，E）A.它既有內(nèi)切酶的活性，也有外切酶活性B.在特異位點(diǎn)對(duì)DNA進(jìn)行切割C.同一限制酶切割雙鏈DNA時(shí)產(chǎn)生相同的末端序列D.有些限制酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生粘末端E.有些限制酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生平末端9.限制酶反應(yīng)結(jié)果若顯示沒有切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A.限制酶無活性B存在抑制劑如SDS，EDTACDNA不純D.緩沖液組成不合適EDNA甲基化10.下列關(guān)于限制酶的敘述正確的是（B，C，D）A.在限制與修飾系統(tǒng)中，修飾主要是甲基化作用，一旦位點(diǎn)被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。B.限制酶在DNA中的識(shí)別/切割位點(diǎn)的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)影響酶切效率。C.如果限制酶的識(shí)別位點(diǎn)位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影響切割。D.已知某限制酶在一環(huán)狀DNA上有3個(gè)切點(diǎn)，因此該酶切割這一環(huán)狀DNA，可得到3個(gè)片段。E.能產(chǎn)生防御病毒侵染的限制酶的細(xì)菌，其自身的基因組中沒有該酶識(shí)別的序列。11.酶在儲(chǔ)存過程中迅速失活，可能原因是（A，B，C，E）A.儲(chǔ)存溫度不合適B稀釋后儲(chǔ)存C儲(chǔ)存緩沖液不合適D.分裝后儲(chǔ)存E儲(chǔ)存緩沖液中蛋白濃度低12.限制酶切反應(yīng)結(jié)果顯示為部分切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A.限制酶失活B有抑制劑如SDS，EDTA等存在C反應(yīng)條件不合適DDNA不純EDNA結(jié)構(gòu)（線形或超螺旋）的影響13.如果用限制酶切割DNA后得到的片段比預(yù)期的多，可能原因是（B，C，E）A.限制酶失活B.限制酶的星號(hào)活性C.有其他限制酶污染D.有抑制劑存在E.測(cè)試DNA中有其他DNA污染14.限制酶切割后的產(chǎn)物連接反應(yīng)效果差，可能原因是（A，B，C，E）A.限制酶去除不完全B.平端連接C.核酸外切酶污染D.連接反應(yīng)溫度低于16℃E.從限制酶消化中帶來太高濃度的磷酸鹽或其他鹽類15.下列限制酶屬同裂酶的是（A，B，D，E）A.BamHIG↓GATCCSau3AI↓GATCB.SalIG↓TCGACXhoIC↓TCGAGC.BamHIG↓GATCCEcoRIG↓AATTCD.HpaIIG↓CGCMspIC↓CGGE.XbaIT↓CTAGANheIG↓CTAGC16．重組連接時(shí)，反應(yīng)體系必須的組分有（A、C）A.Mg2+B.BSAC.ATPD.PO43-E.EDTA17.DNA片段重組連接可用下列哪些方法（A、B、C、D、E）A.平末端連接B.粘末端連接C.加接頭連接D.同聚尾連接E.T載體連接18.酚抽提法回收DNA片段后殘余的哪些物質(zhì)可能會(huì)影響連接反應(yīng)（A、C）A.酚B.微量的EBC.瓊脂糖D.少量的乙酸鈉E.少量的乙醇19.產(chǎn)生平末端的方法主要有（A、B、E）A.用產(chǎn)生平末端的限制酶切。B.用klenow片段補(bǔ)齊5‘粘末端。C.用末端轉(zhuǎn)移酶補(bǔ)齊粘末端。D.用Taq聚合酶補(bǔ)齊粘末端。E.用S1核酸酶降解粘末端。20.在DNA重組連接時(shí)，常采用連接頭連接（linkerligation），其作用是（A、B、C、E）A.引入某些限制酶切位點(diǎn)。B.人工構(gòu)建載體。C.增加調(diào)控元件。D.調(diào)整閱讀框。E.通過接頭引入與目的基因相同的限制酶位點(diǎn)，并對(duì)目的基因相應(yīng)酶切點(diǎn)進(jìn)行甲基化修飾保護(hù)，可保護(hù)目的基因不受限制酶破壞。21.構(gòu)建載體時(shí)，使用雙酶切相對(duì)于單酶切的優(yōu)點(diǎn)在于（A、B、C、D）A.避免載體自身環(huán)化B.提高連接效率C.控制外源基因的插入方向D.便于轉(zhuǎn)化后的篩選E.便于修改閱讀框22.下列關(guān)于同聚物加尾法的說法正確的是（A、B、C、D、E）A.其核心是利用末端轉(zhuǎn)移酶的功能，將載體和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。B.不易自身環(huán)化。C.連接效率高D.適用于CDNA克隆E.可能會(huì)產(chǎn)生某種限制酶切位點(diǎn)。23.下列與DNA重組連接相關(guān)的說法正確的是（A、D、E）A.不匹配的粘末端可通過部分填補(bǔ)后連接。B.同聚尾法連接不僅連接效率高，也易回收插入的片段。C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS終止液抑制限制酶活性，將有利于重組連接。D.Mg2+-ATP是T4DNA連接酶反應(yīng)時(shí)的必須因素。E.平末端連接時(shí)，在反應(yīng)體系中加入適量凝聚劑可提高連接效率。24.下列哪些因素對(duì)保證較高連接效率是有利的（A、C、D）A.高純度DNA。B.載體與目的基因摩爾數(shù)之比為1：1。C.載體與目的基因摩爾數(shù)之比為1：3~5。D.連接反應(yīng)體系中DNA濃度較高。E.連接反應(yīng)體系中DNA濃度較低。25.如果DNA分子重組時(shí)，需要用平端連接，下列哪些方法可形成平末端（B、C、D、E）。A.3‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。B.3‘突出的粘末端用核酸酶切平。C.5‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。D.5‘突出的粘末端用核酸酶切平。E.利用切口為平末端的限制酶。26.CaCl2誘導(dǎo)E.coli感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，下列哪些因素會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率（A、B、C、D、E）A.Ca2+濃度B.DNA純度與構(gòu)象C.DMSOD.溫度E.PH27.人工誘導(dǎo)感受態(tài)細(xì)胞，下列方法哪些正確（A、B、C、D）A.CaCl2處