人白介素6(IL-6)試劑盒的操作說明書

1、人白細(xì)胞介素-6試劑盒操作說明人白細(xì)胞介素-6試劑盒操作說明這個(gè)工具包僅用于研究。檢測范圍：96T0-8納克/升使用目的：該試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣品中白細(xì)胞介素6的含量。實(shí)驗(yàn)原理該試劑盒采用雙抗體夾心法測定樣品中人白細(xì)胞介素6的水平。微孔板包被有純化的人白細(xì)胞介素6(IL-6)抗體以制備固相抗體。將白細(xì)胞介素6(IL6)依次加入包被有單克隆抗體的微孔中，然后與辣根過氧化物酶標(biāo)記的IL6抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)記的抗體復(fù)合物。徹底清洗后，加入基質(zhì)TMB進(jìn)行顯色。TMB在辣根過氧化物酶的催化下變成藍(lán)色，在酸的作用下變成黃色。顏色的深度與樣品中的白細(xì)胞介素-6呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀

2、在450納米波長下測定吸光度(吸光度值)，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白細(xì)胞介素6(IL-6)的濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7停液6ml1瓶2酶標(biāo)試劑6毫升1瓶8標(biāo)準(zhǔn)(16納克/升)0.5毫升1瓶3酶標(biāo)涂布板12孔8 9標(biāo)準(zhǔn)稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋劑6ml1瓶10說明15顯影液6毫升，1瓶，11個(gè)密封板，2片6顯影劑b液體6ml1/瓶12密封袋1樣本要求1.樣品收集后應(yīng)盡快提取，提取應(yīng)根據(jù)相關(guān)文件進(jìn)行。提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果不能立即進(jìn)行試驗(yàn)，可將樣品儲存在-20下，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.含有NaN3的樣品無法檢測，因?yàn)镹aN3抑制辣根過氧化物酶(HRP)活性。操作步驟1.

3、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稀釋：該試劑盒提供一種原始標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。用戶可以根據(jù)下圖將其稀釋在小試管中。將150l標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋液添加到150l 8 ng/L5標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的原始標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中4ng/L4標(biāo)準(zhǔn)150l標(biāo)準(zhǔn)5添加150l標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑2ng/L3標(biāo)準(zhǔn)150l標(biāo)準(zhǔn)4添加150l標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑將150l標(biāo)準(zhǔn)稀釋液添加到150l 1 ng/L2標(biāo)準(zhǔn)的3號標(biāo)準(zhǔn)中0.5納克/150微升標(biāo)準(zhǔn)L1，將150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑加入標(biāo)準(zhǔn)22.樣品添加：設(shè)置空白孔(空白對照孔不含樣品和酶標(biāo)試劑，其他步驟相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測樣品孔。將50l標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)準(zhǔn)確加入酶標(biāo)包被板，將40l樣品稀釋液加入待測樣品孔，然后加入10l待測樣品(樣品最終稀釋5倍)。

4、添加樣品將樣品添加到酶標(biāo)板孔的底部，盡量不要接觸孔壁，輕輕搖動(dòng)并混合。3.孵育：用密封膜密封平板，然后在37孵育30分鐘。4.配液：用20倍蒸餾水稀釋20倍濃縮洗滌液備用5.清洗：小心地去除密封膜，丟棄液體，甩干，用清洗液填充每個(gè)孔，靜置30秒后丟棄，重復(fù)5次，拍干。6.酶添加：除空白孔外，每孔添加50l酶標(biāo)試劑。7.孵化：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：先加入50l顯色劑，再加入B50l顯色劑，輕輕搖勻，在37避光15分鐘顯色。10.終止：向每個(gè)孔中加入50l終止溶液以終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色變成黃色)。11.測定：依次測量空白空調(diào)在0和450納米波長下各孔的吸光度(外徑值)。應(yīng)在添加終止

5、液后15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定。人白細(xì)胞介素-6試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒應(yīng)在使用前從冷藏環(huán)境中取出，并在室溫下平衡15-30分鐘。如果酶標(biāo)涂層板在打開后沒有用完，應(yīng)將其放入密封袋中儲存。2.濃縮的洗滌溶液中可能會有結(jié)晶和沉淀，可以在水浴中加熱以在稀釋時(shí)有助于溶解，并且在洗滌時(shí)不會影響結(jié)果。3.加樣的每一步都應(yīng)使用加樣器，并定期檢查其準(zhǔn)確度，以避免測試誤差。一個(gè)樣本廣告的時(shí)間7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。有關(guān)注意事項(xiàng)1.從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒在使用前應(yīng)在室溫下保持平衡15-30分鐘，酶聯(lián)免疫吸附涂層板打開后如果板條耗盡應(yīng)裝入密封袋中保存。2洗滌緩沖液會結(jié)晶，加熱的水會溶解稀釋，洗滌不影響結(jié)果。3樣品的每一步都應(yīng)與進(jìn)樣器一起使用，并校對其準(zhǔn)確性以避免測試誤差。一個(gè)樣本時(shí)間控制在5分鐘以內(nèi)，如果樣本量很大，建議使用齊射式。4每次測量同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)曲線做多個(gè)孔。如待測樣品中物質(zhì)含量過高（樣品外徑大于標(biāo)準(zhǔn)孔外徑)，請先將樣品稀釋倍數(shù)(n倍)進(jìn)行測量和計(jì)算，然后再乘以總稀釋倍數(shù)(n * * 5).5 .封板膜只能一次性使用，避免交叉污染。儲存6個(gè)基板。7嚴(yán)格按照操作說明，將測定結(jié)果以微量滴定板讀數(shù)器為標(biāo)準(zhǔn)。8 .所有樣品、洗滌液和各種被