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1、切片方法321如下圖,在切片之前首先要用刀片對(duì)SD大鼠腦進(jìn)行粗切,可平分為5段,粗切之后進(jìn)行切紋狀體,海馬,黑質(zhì)的精細(xì)切分。36541:紋狀體和黑質(zhì)的切法:切除小腦和嗅球(保險(xiǎn)起見(jiàn)用刀片切除1,和6的位置);然后從3處切開(kāi)(即大約整體的2/5處),13區(qū)為黑質(zhì),36區(qū)為紋狀體,黑質(zhì)和紋狀體都是以3處處的剖開(kāi)面為底面用膠水固定在切片機(jī)小圓板底座上。22:海馬的切法:切除小腦和嗅球(保險(xiǎn)起見(jiàn)用刀片切除1,和6的位置),保險(xiǎn)起見(jiàn)海馬保留24之間的區(qū)段(用刀片切在2和4的位置)然后以 處的剖開(kāi)面為底面用膠水固定在切片機(jī)小圓板底座上。具體切片方案如下根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜(第三版)在PD模型中,所需部位
2、主要為鼠大腦的紋狀體、黑質(zhì)以及海馬部位: 紋狀體區(qū):前囟1.70mm至-0.4mm,共2.10mm,由前往后平均分為以下四個(gè)區(qū)間(每區(qū)段0.5mm): +1.70mm-+1.20mm, +1.20mm-+0.70mm, +0.70 mm -+0.20mm,+0.20mm- -0.40mm,+1.70mm-+1.20mm,+1.70mm-+1.20mm, +1.20mm-+0.70mm, +0.70 mm -+0.20mm, +0.20mm- -0.40mm,可分為四個(gè)小瓶來(lái)裝片,于10ml 的棕色玻璃瓶中( 內(nèi)盛6ml的0.01mM PBS,pH7.4配制的5%多聚甲醛溶液 ),每個(gè)區(qū)段長(zhǎng)度為
3、0.50mm,理論上可切30m的腦片16張,實(shí)際保留時(shí)至少保證12張腦片。并從前到后標(biāo)明區(qū)段1(+1.70mm-+1.20mm),區(qū)段2(+1.20mm-+0.70mm),區(qū)段3(+0.70mm-+0.2mm),區(qū)段4(+0.2mm- -0.4mm). 黑質(zhì)區(qū):前囟-4.52mm至-6.04mm,共1.52mm,理論上一共可切56張30m的腦片。進(jìn)入腦區(qū)-4.16mm后,先連續(xù)切100m的腦片共3片,接著切30m的腦片共2張,均不保存,理論上此時(shí)已到-4.52mm的腦區(qū)位置。 開(kāi)始腦區(qū)位置-4.52mm- -4.8mm 為一個(gè)備用腦片區(qū)段,共0.28mm理論上該區(qū)段可切9片腦片。從-4.8mm開(kāi)始到-6.04mm, 共1.24mm,分為四個(gè)區(qū)段(每區(qū)段0.31mm),每個(gè)區(qū)段至少保留8片。-4.8mm- -5.11mm-5.11mm- -
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