TLC點(diǎn)板教程PPT課件

1、.,1,薄層色譜（TLC法）,.,2,定義、原理 薄層色譜(Thin Layer Chromatography)簡(jiǎn)稱TLC，又稱薄層層析，屬于固液吸附色譜。樣品在薄層板上的吸附劑（固定相）和溶劑（移動(dòng)相）之間進(jìn)行分離。由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開劑上移時(shí)，它們進(jìn)行不同程度的解吸，從而達(dá)到分離的目的。,.,3,TLC是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法。它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，將樣品點(diǎn)成一條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此，又可用來(lái)精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性

2、較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，薄層色譜法還可用來(lái)跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來(lái)判斷反應(yīng)是否完成。,.,4,薄層色譜常用的固定相是氧化鋁或硅膠。硅膠略帶酸性，適用于酸性和中性物質(zhì)的分離；堿性物質(zhì)則能與硅膠作用，不易展開或發(fā)生拖尾的斑點(diǎn)，不好分離。對(duì)于氧化鋁則相反。流動(dòng)相則是一種極性待選的溶劑。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)中都使用標(biāo)準(zhǔn)硅膠板。 應(yīng)該根據(jù)化合物的極性大小來(lái)選擇吸附活性合適的吸附劑，對(duì)極性小的試樣可選擇吸附活性較高的吸附劑，對(duì)極性大的試樣，選擇活性較低的吸附劑。,.,5,將溶液中的反應(yīng)混合物點(diǎn)在薄板上

3、，然后利用毛細(xì)作用使溶劑（或混合溶劑）沿板向上移動(dòng)進(jìn)行展開。根據(jù)混合物中組分的極性，不同化合物將會(huì)在薄板上移動(dòng)不同的距離。極性強(qiáng)的化合物會(huì)“粘”在極性的硅膠上，在薄板上移動(dòng)的距離比較短。而非極性的物質(zhì)將會(huì)在流動(dòng)的溶劑相中保留較長(zhǎng)的時(shí)間從而在板上移動(dòng)較大的距離。,.,6,薄層色譜（TLC）實(shí)驗(yàn)步驟：,1、 點(diǎn)樣 通常將樣品溶于低沸點(diǎn)溶劑（丙酮、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚和四氯化碳）配成1 %的溶液，用內(nèi)徑小于1 mm管口平整的毛細(xì)管點(diǎn)樣。 實(shí)驗(yàn)具體操作： （1）先用鉛筆在距薄層板一端1.5cm處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直徑一般不超過2-3mm。 （2

4、）若樣品溶液太稀，可重復(fù)點(diǎn)樣，但應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點(diǎn)樣，以防樣點(diǎn)過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影響分離效果。 （3）若在同一板上點(diǎn)幾個(gè)樣，樣點(diǎn)間距離應(yīng)為1.5-2cm。 （4）點(diǎn)樣要輕，不可刺破薄層。,.,7,展開方式可分為三類：上行展開和下行展開；單次展開和多次展開；單向展開和多向展開 常用的是上行展開，就是使展開劑從下往上展開：當(dāng)樣點(diǎn)上的溶劑充分揮干后，將薄層置于盛有適當(dāng)展開劑的標(biāo)本缸、大量筒或方形玻缸中，使展開劑浸入薄層的高度約為0.5cm。 注意事項(xiàng)：先懸空飽和、再入液展開；樣點(diǎn)不能泡在展開劑中；薄層浸入時(shí)不能歪斜進(jìn)入。,2展開：,.,8,3顯跡：用適當(dāng)?shù)姆椒ɑ蛘哌m當(dāng)?shù)娘@

5、色劑處理薄層，使其上可能已經(jīng)分離的各成分斑點(diǎn)顯示出來(lái)，以方便計(jì)算各個(gè)斑點(diǎn)的比移值，從而提供定性與定量的依據(jù)。方法有： 物理顯跡法 化學(xué)顯跡法： 1）蒸氣顯色 利用一些物質(zhì)的蒸氣與樣品作用而顯色； 2）噴霧顯色 將顯色劑配成一定濃度的溶液，用噴霧的方法均勻噴灑在薄層上。噴霧器與薄層相距最好0.5-0.8m，對(duì)于未加粘合劑的薄層，應(yīng)趁展開劑未干前噴霧顯色，以免吸附劑吹散。 生物顯跡法 薄層色譜掃描儀,.,9,4比移值的計(jì)算與定性、定量：展開結(jié)束后，經(jīng)過各種顯色操作后，樣品中各個(gè)成分的斑點(diǎn)可能出現(xiàn)了不同程度的分離，為了表達(dá)各成分的相對(duì)位置（極性）通常以比移值作為稱量斑點(diǎn)位置的指標(biāo)。 比移值Rf(斑點(diǎn)

6、中心與原始樣點(diǎn)之間的距離)/(溶劑前沿與原始樣點(diǎn)之間的距離) 各種物質(zhì)的Rf 隨要分離化合物的結(jié)構(gòu)，濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對(duì)每一種化合物來(lái)說是一個(gè)特定數(shù)值。,.,10,1）讓溶劑向上展開約90%的薄板長(zhǎng)度。 2）從展開池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置。 3）讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉，將薄板干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色，用鉛筆標(biāo)出所有顯色點(diǎn)或有紫外活性的點(diǎn)。,.,11,薄層層析的Rf 值受多種因素影響，即使嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求做了，結(jié)果的重現(xiàn)性仍較差。因此，薄層定性時(shí)常與標(biāo)準(zhǔn)品一起點(diǎn)樣進(jìn)行對(duì)比分析。在跟蹤反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，一定要點(diǎn)上起始反

7、應(yīng)物、反應(yīng)混合物以及兩者的混合物。,.,12,根據(jù)初始薄層色譜結(jié)果修改溶劑體系的選擇。如果想讓Rf變得更大一些，可使溶劑體系極性更強(qiáng)些；如果想讓Rf變小，就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析，如果還是不能奏效，就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系。,.,13,展開劑：薄層層析中用來(lái)將樣品展開的溶劑。 展開：用極性適當(dāng)?shù)娜軇┙?rùn)已經(jīng)點(diǎn)了樣品的薄層板一端，憑借毛細(xì)作用帶動(dòng)樣品在薄層板上移動(dòng)，最終使樣品分離的操作過程。 展開劑常是由兩種或者兩種以上的溶劑按一定的比例組成的溶劑系統(tǒng)。簡(jiǎn)稱溶劑系統(tǒng)或展開所用的溶劑。 在吸

8、附薄層中，化合物在吸附薄層上移動(dòng)的速度與展開劑的極性有關(guān)。展開劑的極性越大，化合物移動(dòng)的速度越快，展開劑的極性越小，化合物的移動(dòng)速度慢。 薄層層析要得到較好的展開效果，必須依據(jù)所要分離的樣品來(lái)正確選擇層析條件，對(duì)樣品的極性進(jìn)行認(rèn)真研究，以確定及實(shí)驗(yàn)摸索適宜的吸附劑、展開劑。選擇適當(dāng)?shù)恼归_劑是首要任務(wù).有時(shí)使用單一溶劑不能達(dá)到很好的分離效果，往往使用混合溶劑。,.,14,展開劑的比例要靠嘗試. 展開劑的選擇條件： 對(duì)所需成分有良好的溶解性； 可使成分間分開； 不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)； 沸點(diǎn)適中，黏度較小； 展開后組分斑點(diǎn)圓且集中； 混合溶劑最好用新鮮配制。,.,15,單一溶劑的極性從小到大順序?yàn)椋?石油醚環(huán)己烷四氯化碳三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇甲醇吡啶乙酸,.,16,混合溶劑的極性順序由小到大為：,苯氯仿（1+1） 環(huán)己烷乙酸乙酯（8+2）氯仿丙酮（95+5）苯丙酮（9+1）苯乙酸乙酯（8+2）氯仿乙醚（9+1）苯甲醇（95+5） 苯乙醚（6+4）環(huán)己烷乙酸乙酯（1+1）氯仿乙醚（8+2）氯仿甲醇（99+1）苯甲醇（9+1）氯仿丙酮（85+15）苯乙醚（4+6）苯乙酸乙酯（1+1）氯仿甲醇（95+5）氯仿丙酮（7+3）苯乙酸乙酯（3+7）苯乙醚（1+9）乙醚甲醇（99+1）乙酸乙酯甲醇（99+1）苯