藥理學實驗基本知識

1、.,主講老師 胡建平,藥理學實驗基本知識,.,第一章 藥理學實驗須知 第二章 藥理學實驗常用儀器及技術(shù) 第三章 實驗數(shù)據(jù)的簡單統(tǒng)計學,該次課的內(nèi)容安排,.,第一章 藥理學實驗須知,一 藥理學實驗的重要性 藥理學實驗是藥理學教學的一個重要的部分。 用來驗證一些藥理學理論部分內(nèi)容。 二 藥理學實驗課程的目的 選做一些經(jīng)典、實用的實驗，使得學生熟悉藥理學實驗的基本操作方法和技能。 了解新藥評價和開發(fā)臨床前的一些藥效學和毒理學的一些基本技能。 培養(yǎng)學生獨立思考、操作、分析、解決問題的能力。,.,第一章 藥理學實驗須知,三 藥理學實驗課前、課中、課后的要求 （一）實驗前 仔細閱讀實驗指導，了解實驗的目的

2、、要求、步驟和操作程序。 結(jié)合實驗內(nèi)容復習有關(guān)理論，做到充分理解。 預測實驗應得到的結(jié)果。 寫出預習實驗報告（自己隨意寫，對自己做實驗有用就好）,.,（二）實驗時 實驗器材安放整齊、清潔有序。 按照實驗步驟，以嚴肅認真的態(tài)度循序操作，不得進行與實驗無關(guān)的活動，注意保護實驗動物（以免影響實驗結(jié)果），愛護實驗器材和節(jié)約藥品。 仔細觀察實驗過程出現(xiàn)的現(xiàn)象，隨時紀錄實驗數(shù)據(jù)，聯(lián)系理論進行思考(發(fā)生什么？為何這樣？生理意義?)。 （三）實驗后 把實驗用具整理就緒。如有損壞短缺，應向教師報告。 整理實驗數(shù)據(jù)，認真書寫實驗報告，按時上交評閱。,.,四 實驗報告的書寫,藥理學實驗報告 姓名： 班級： 組別：

3、日期： 實驗題目： 實驗目的： 實驗對象： 實驗步驟： 實驗結(jié)果： 分析與討論： 結(jié)論：,實驗結(jié)果的描述文字上力求從簡，最好用圖表表示。 填寫實驗結(jié)果時，要堅持真實性和科學性。 在分析討論中，可以結(jié)合理論部分進行分析，或?qū)嶒灥玫降囊?guī)律性的東西進行分析討論，提出見解，避免抄書。 結(jié)論部分的東西是本次實驗獲得的最為基本的規(guī)律性內(nèi)容。文字務必簡明扼要，不可憑空想象加入一些本實驗沒有證實的內(nèi)容。,.,五 實驗室規(guī)則 1 遵守學習紀律，準時上下課。實驗期間不得借故外出或早退，特 殊情況下，需要請假。 2 必須認真地進行實驗操作、觀察實驗結(jié)果。實驗期間要保持安 靜， 不得進行任何與實驗無關(guān)的活動。 3

4、實驗數(shù)據(jù)及實驗紀錄，必須經(jīng)過教師審核，否則不能結(jié)束實驗。 4 各組的儀器、用品，由本組使用，不得與別組調(diào)換，以免混亂。 如遇到儀器損壞或丟失，應報請教師處理。 5 愛護公共財物，注意節(jié)約各種實驗用品。實驗動物按組發(fā)給，如 需要補充使用，須經(jīng)教師同意之后才能補領(lǐng)。 6 保持實驗室清潔整齊，隨時清除污物。實驗完畢后，應將實驗器 材、用具收拾妥當；將手術(shù)器械擦洗干凈，清點數(shù)量，放回原處。 經(jīng)教師檢查之后才能離開實驗室。,.,一 分光光度計 二 離心作用 三 動物的捉持 四 動物的給藥方法 五 動物的取血方法 六 動物的處死方法,第二章 藥理學實驗常用儀器及技術(shù),.,一 分光光度計, 儀器介紹 分光光

5、度計有幾個部件：其中包括光源、提供選擇波長的的單色器、可變狹縫、樣品架、光探測器和儀表。不同的光譜區(qū)要使用不同的光源。在可見區(qū)（400nm700nm）和紫外區(qū)（200nm400nm）分別使用鎢燈和氘燈。在這些區(qū)域的光波長是由分光光度計中的單色器選擇的，單色器是由棱鏡或衍射光柵構(gòu)成的，在可見區(qū)和紫外區(qū)給出窄帶波長的光，光由可控制光強的可調(diào)狹縫進入樣品，然后由光電管探測透過的光，并被電流計所測量。下圖為分光光度計的部件原理圖：, 紫外和可見光譜的應用 紫外和可見光譜最為主要的應用是：測量溶液中物質(zhì)的濃度。其基本原理是：光吸收值和吸光物質(zhì)的濃度成正比。,.,二 離心作用 離心作用是裝有固體顆粒懸浮液

6、的容器迅速旋轉(zhuǎn)的過程，顯著增加的重力場使顆粒沉降，離心力或引力與角速度的平方（2）乘以距轉(zhuǎn)動中心的徑向距離r（cm）成正比，角速度以每分鐘的轉(zhuǎn)速（rpm）來表示，離心力由下式給出：F=(1.1210-5) (2) (r) 從上式可以看出：對于徑向距離為7cm的轉(zhuǎn)子，若角速度為10000 rpm，則離心力為8000g。成功的離心作用取決于兩個因素（1）離心時間和（2）發(fā)揮的g值。如下表： 表1 在離心場中沉降生物顆粒所需的重力和時間的比較,所以使用不同的g力，不同的離心t的差速離心法可用來分離細胞組分。,.,三 動物的提持（限小鼠和家兔）,1 小鼠的提持（2種方法） 雙手提斥法 右手提起鼠尾，放

7、在鼠籠（或其他粗糙面）上，向后輕拉其尾，小鼠即固定于鼠籠上，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠頭頸部皮膚，并以左手小指、無名指壓其尾部于手掌尺側(cè)。 單手提持法 只用左手，先用食指和拇指抓住小鼠尾巴后用手掌尺側(cè)和小指夾住尾根部，然后用左手拇指和食指捏住頭頸部皮膚 2 家兔的提持 一只手抓住兔頸背部皮膚，將兔輕輕提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿勢。切不可用手握持雙耳提起兔子。,.,1 灌胃方法 2 皮下注射方法 3 肌內(nèi)注射方法 4 腹腔注射方法 5 靜脈注射方法,四 動物的給藥方法（限小鼠和家兔）,.,動物給藥方式一 - 灌胃方法,小鼠的灌胃方法 左手捉持小鼠，腹部朝向操作者，右手持灌胃管，經(jīng)口角

8、插入口腔，使灌胃管與食管成一直線，將灌胃管沿上腭壁緩慢插入食管2cm3cm，灌胃管的前端即達膈肌部位，此時操作者可有抵抗感，如動物安靜，呼吸無異常，即可將藥液注入。操作宜輕柔，防止損傷食管。如遇阻力應抽出灌胃管重新插入，若將藥液誤注氣管，動物立即死亡。 家兔的灌胃方法 給兔灌胃需兩人合作，一人坐好將兔軀體夾于兩腿之間，左手抓住雙耳，固定其頭部，左手抓住兩前肢，使兔頭稍向后仰；另一人將開口器橫放于兔口中，慢慢旋轉(zhuǎn)開口器，將兔舌壓住，并固定之。將8號導尿管經(jīng)開口器中央孔，沿上腭壁慢慢插入食管15cm18cm。為避免誤入氣管，可將導尿管的外口端放入清水中，無氣泡逸出方可注入藥液，再用少量清水沖洗管內(nèi)

9、殘存藥液。灌畢，慢慢拔出導尿管，取出開口器。,.,小鼠的皮下注射方法 一般需要兩個人合作，一人左手捏小鼠頭部皮膚，右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定；另一人左手提起背部皮膚，右手持注射器將針頭刺入皮下，稍稍擺動針頭，若容易擺動則表明針尖確實位于皮下，此時注入藥液。拔針時，右手捏住針刺部位片刻，以防止藥液逸出。 也可一人操作，將小鼠放在粗糙的平面上，左手拉小鼠尾巴，趁小鼠向前爬動時，右手持注射器迅速將針頭刺入小鼠背部皮下，推注藥液。 家兔的皮下注射方法 通常選擇背頸部皮下注射。操作者左手拇指、食指和中指提起背頸部皮膚，使其折成三角體，右手持注射器自皺折下方刺入皮下，松開皮膚注入藥液。,動物給藥方式二 -

10、 皮下注射方法,.,小鼠的肌內(nèi)注射方法 需兩人合作，一人左手捏小鼠頭部皮膚，右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定；另一人左手固定注射側(cè)后肢，右手持注射器，將針頭刺入外側(cè)股部肌內(nèi)。小鼠肌肉較少，肌內(nèi)注射不常用。 家兔的肌內(nèi)注射方法 注射部位為臀部和股部肌肉。,動物給藥方式三 - 肌內(nèi)注射方法,.,小鼠的腹腔注射方法 左手捉持小鼠，將腹部朝上，頭部下傾，右手持注射器在下腹左側(cè)或右側(cè)（避開膀胱）向頭端穿刺，針頭與皮膚呈30,刺入腹腔（有落空感）注入藥液。注意針頭不要刺入太深，太靠上，以免刺破肝臟。 家兔的腹腔注射方法 方法幾乎與小鼠相同 。,動物給藥方式四 - 腹腔注射方法,.,小鼠的靜脈注射（多用尾靜脈注射

11、） 將小鼠固定在一鐵絲籠或特制筒內(nèi)，使小鼠尾露在外面。用75%乙醇溶液涂擦尾巴或在45左右溫水中侵泡30s，使尾靜脈充血。注射時，左手拇指和食指捏持鼠尾，右手持注射器，選擇尾巴兩側(cè)靜脈，使針頭與鼠尾成3 5（幾乎平行），進行靜脈穿刺。如推注藥液無阻力，局部皮膚發(fā)白則表明針頭未刺入血管，退出針頭重新穿刺，注意靜脈穿刺時應從遠端（近尾尖）開始，不僅容易穿刺，而且還可向近端多次穿刺。注射完畢，用棉球按壓穿刺口止血。 家兔的靜脈注射（多用耳緣靜脈） 注射部位去毛并用酒精棉球涂擦。用左手拇指和中指捏住兔耳尖部，以食指墊于耳下，右手持注射器，從靜脈遠端將針頭刺入血管，將藥液推入。如推注時有阻力，局部出現(xiàn)腫

12、脹，表明針頭不在血管內(nèi)，應立即拔針重新穿刺。注畢要用棉球壓迫針眼幾分鐘止血。,動物給藥方式五 - 靜脈注射方法,.,小鼠剪尾采血 將小鼠固定在鐵絲籠或特別筒內(nèi)，使鼠尾露在外面。剪掉鼠尾1mm2mm，用拇指和食指由尾根向尾尖按捏，血液即從尾尖流出，小鼠每次可采血0.1ml。注意：只剪去尾尖，如剪去過多組織，反而流血少。下次采血時，只需將尾尖血痂jia剪掉就可以了。 家兔心臟采血 將家兔被部固定，剪去左側(cè)胸部相當于心臟部位的被毛，用碘酒和酒精消毒皮膚，選擇心臟跳動最明顯處穿刺。一般由胸骨左緣外3mm處刺入兔的第三肋間隙。穿刺時，最好用左手觸診心臟，以作配合。當針頭接近心臟時，就會感到心臟的跳動。這

13、是需將針頭再向里穿刺，便可進入心室。由于心臟的搏動，血液會自然進入注射器。如認為針頭已經(jīng)進入心臟，但抽不出血液，可將針頭稍微退出或進入一點。 一般來講，心臟采血經(jīng)67天后，可以重復進行。采血量大約20ml30ml。,五 動物的取血方法（限小鼠和家兔）,.,家兔耳緣靜脈采血 拔去耳緣被毛，用燈泡照射加熱耳朵或75%酒精涂擦局部，使靜脈擴張，再用石蠟油涂擦耳緣，防止血液凝固。耳受熱之后用小血管夾夾緊耳根部，用粗號針頭逆靜脈回流方向刺破靜脈或用刀片切開靜脈，血液可自動流出，一般可采血2ml3ml。取血后棉球壓迫止血。 家兔耳中央動脈采血 將兔子置于兔固定箱內(nèi)，用酒精棉球擦揉兔耳片刻，使其充血。在兔耳

14、中央有一條縱行、較粗、顏色鮮紅的中央動脈。左手固定兔耳，右手持注射器（一般用6號針筒，不可太細），在中央動脈的末端，沿動脈平行地向心方向刺入動脈，慢慢回抽針筒，動脈血立即進入針筒，一次可取血15ml。因耳中央動脈容易發(fā)生痙攣收縮（容易導致采血無法進行），因此必須要先讓兔耳充分充血，并在痙攣前迅速完成抽血，抽血后棉球壓迫止血。,五 動物的取血方法（限小鼠和家兔）,.,六 動物的處死方法（限小鼠和家兔）,小鼠的處死（常采用頸椎脫臼法） 用左手拇指和食指將其頭部緊緊按在硬的物體上，右手捏住鼠尾，用力向后上方牽拉，使頸椎脫位，小鼠可瞬間死亡。 家兔的處死（常采用空氣栓注法） 用50ml100ml的注射

15、器，往家兔的耳緣靜脈內(nèi)注射20ml40ml的空氣量，使之發(fā)生栓塞而死亡。,.,一 均數(shù) 二 標準差（SD） 三 標準誤和t檢驗,第三章 實驗數(shù)據(jù)的簡單統(tǒng)計學,.,實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計的意義,藥理學實驗所得的數(shù)據(jù)一般都需要經(jīng)過統(tǒng)計學處理，以便通過分析樣本，推斷總體，透過偶然，找出規(guī)律。 統(tǒng)計處理數(shù)據(jù)資料的系統(tǒng)知識比較豐富，這里僅僅對處理藥理學實驗結(jié)果的需要，對實驗結(jié)果的均數(shù)、標準差、標準誤以及計量資料的顯著性測定做一個簡單的介紹，以供學生對實驗結(jié)果作出正確的判斷。,.,一 均數(shù)（）,均數(shù)也就是算術(shù)平均值，統(tǒng)計學上用 表示。均數(shù)是分析計量數(shù)據(jù)最基本的指標。它表示一套變量值的集中趨勢（平均水平），不僅可以

16、給人一個簡明概括的印象，并可用來作事物間的比較。均數(shù)的計算公式為： 其中 為總和；x1、x2、xn等為各次的測定值（變量）；n為變量的個數(shù)，即樣本容量；而 為各變量的總和。,.,二 標準差（SD）,均數(shù)只是集中趨勢的指標，不能反映一組數(shù)據(jù)與均數(shù)的離散程度。特別是數(shù)據(jù)不符常態(tài)分布時，更是如此。而標準差是最為常用的、最能完整地反映全套變量值離散程度的統(tǒng)計指標，一般用SD表示。而計算SD的公式為：,式子中x為每一個變量值；為均數(shù)；n為變量的個數(shù)；,.,例1 根據(jù)某年級12名女學生收縮壓的數(shù)據(jù)（見下表），求其均數(shù)和標準差？,表一 12名女學生收縮壓數(shù)據(jù),表一 12名女學生收縮壓數(shù)據(jù),表一 12名女學生

17、收縮壓數(shù)據(jù),.,解：將有關(guān)數(shù)據(jù)帶入公式（1）求出均數(shù) 代入公式（2）求出標準差 所以可以得到： 從上面的例子也可以看出：標準差反映了各變量離開均數(shù)的分布情況。在均數(shù)與單位相同的情況下，標準差越大，則表示各變量離開均數(shù)越遠，諸變量離散程度也越高；反之，標準差越小，則表示離均數(shù)越近，離散程度越低，偏差小，精密度高。,.,三 標準誤（SE）和t檢驗,標準誤和標準差不同，它表示的是多次測定的均數(shù)與總體均數(shù)的離散程度，也就是總體中各樣本的均數(shù)的標準差。計算公式如下： 其中：SE為標準誤，SD為標準差，n為樣本數(shù)。值得注意是：SE的目的主要是為了用于兩個均數(shù)差別的顯著性檢驗之中。,.,t檢驗的定義：在抽樣研究中，經(jīng)常遇到兩個樣本均數(shù)的有所差別。對于兩個均數(shù)的差別不可以僅看表面數(shù)值的不同而匆忙推論出其本質(zhì)的差異。必須考慮到引起這種差別有兩種可能性：（1）差別僅僅又抽樣誤差所引起，它們之間沒有本質(zhì)上的誤差；（2）差別已經(jīng)超出了抽樣誤差所引起的范圍，它們之間有本質(zhì)差異。 除t值之外，在得到組間差異的概率之前還需要知道自由度，上述例子的自由度為： 通過t值和自由度f值可以從t-分布表上找到組間差異的概率P（兩者差別不大且接受抽樣誤差的概率）。其中t值的判斷標準（表二）和