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文檔簡介

1、植物組織培養(yǎng)技術,第一章緒論一,植物組織培養(yǎng)的概念(一)概念植物組織培養(yǎng)(Plant tissue culture )廣義上指在無菌條件下,在特定的培養(yǎng)基上培養(yǎng)離體植物器官、組織、細胞和原生質(zhì)體的技術。 (2)主要特征1是在培養(yǎng)容器中進行2無菌培養(yǎng)環(huán)境,排除了真菌、細菌、害蟲等微生物侵入的3種環(huán)境因子,如營養(yǎng)因子、激素因子和光、溫度等物理因子可以人工控制,達到最佳條件。 4隨著打破正常植物發(fā)育過程和結構的5單細胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)技術的發(fā)展,可以操作植物的微細結構。 (3)植物組織培養(yǎng)類型:根據(jù)分類可分為不同的類型。 1 .根據(jù)培養(yǎng)材料的不同,可分為完全的植物體培養(yǎng)(Plant Culture )

2、 :幼苗和大的植物體等的培養(yǎng)。 胚胎培養(yǎng)(Embryo Culture ) :包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等培養(yǎng)。 器官培養(yǎng)(Organ Culture ) :包括離體根、莖、葉、果實、種子、花器官的培養(yǎng)。 組織培養(yǎng)(Tissue Culture ) :例如分生組織、薄壁組織、進口組織培養(yǎng)。 細胞培養(yǎng)(Cell Culture ) :指培養(yǎng)單細胞或小細胞塊。 原生質(zhì)體培養(yǎng):培養(yǎng)去除細胞壁得到的原生質(zhì)體。 矮牛莖尖離體培養(yǎng),牡丹成熟胚的離體培養(yǎng)和快速繁殖matureembryocultureandrapidpropagationoftreepeony,小月季莖離體培養(yǎng),燭葉離體快速繁殖,大蒜根尖

3、培養(yǎng)和植物再生,大蒜試管鱗莖誘導, 人參細胞懸浮培養(yǎng)非洲紫羅蘭的原生質(zhì)體分離、培養(yǎng)和植物再生,通過2 .再生途徑:器官發(fā)生途徑(Organogenesis ) :直接器官發(fā)生途徑:植物器官可以直接從外植體誘導。 用莖尖培育。 間接器官的發(fā)生途徑:成熟細胞經(jīng)過去分化(dedefrentiation )和再分化(redifferention )的過程形成新的組織和器官的過程。 像葉子一樣培養(yǎng)。 體細胞胚胎發(fā)生(Somatic embryogenesis ) :體胚胎發(fā)生途徑是指二倍體或一倍體體體細胞在特定條件下不融合性細胞,而是通過與合子胚胎發(fā)生類似的途徑發(fā)育新個體的形態(tài)發(fā)生過程。 經(jīng)體胚發(fā)生與合

4、子胚相似的結構稱為胚狀體(embryoid )或體細胞胚(somatic embryo ),直接器官發(fā)生間接器官發(fā)生,體細胞胚發(fā)生,貫葉金絲桃不定芽直接再生過程,最佳培養(yǎng)基中沒有蔗糖1 %5%蔗糖,bappbap 0.1 mg/非洲堇葉培養(yǎng)無lnaa,培養(yǎng)基無1%蔗糖5%蔗糖,無bapbap0.1mg/lbap5.0mg/lnaa,優(yōu)化臺灣百合的離體培養(yǎng),大花薔薇原球莖的增殖和植物再生,器官的發(fā)生途徑(原球莖的形成),大蒜愈傷組織培養(yǎng),日本禾本科牧草體胚的發(fā)生過程菊花體細胞胚的發(fā)生和植物的再生、大蒜體細胞胚的發(fā)生過程、人工種子(Artificial seed,Synthetic Seed )

5、:指植物離體培養(yǎng)中發(fā)生的胚狀體或不定芽被含有營養(yǎng)和保護功能的人工胚乳和人工種皮包著,形成可以發(fā)芽的顆粒體作為繁殖材料。 3 .根據(jù)培養(yǎng)基的種類不同,固體培養(yǎng)(Solid culture):瓊脂、卡拉膠等會固化。 半液半固體培養(yǎng)(Semisolid Culture ) :固液雙重。 液體培養(yǎng)(liquidcrysculture ) :振動、旋轉、靜置培養(yǎng)。 液體培養(yǎng)的優(yōu)點: a不使用凝固劑,節(jié)省生產(chǎn)成本,b營養(yǎng)吸收充分,c操作流程簡化。固體培養(yǎng):液體培養(yǎng),體胚液體培養(yǎng),不同種類的液體培養(yǎng)裝置:液體培養(yǎng)系統(tǒng),菠蘿種苗液體培養(yǎng)系統(tǒng),丹參毛狀根培養(yǎng),二,植物組織培養(yǎng)發(fā)展簡史一,理論準備階段(探索階段)

6、 (20世紀30年代前)1667年,鉤子(R. Hooke )發(fā)現(xiàn)了細胞1756 18381839,Schleiden(1838施萊登提出植物細胞說)和sch wann (認為細胞說也適用于動物)創(chuàng)立了細胞說。 1902年德國的Haberlandt (哈布蘭特):植物離體細胞培養(yǎng)試驗”。 提出高等植物器官和組織可以不斷分割到各個細胞,提出大膽地用試管培養(yǎng)植物,預言體外細胞在生理發(fā)育中有潛在的全能性。 也就是說,所有植物的細胞都有在適當?shù)臈l件下繼續(xù)分裂和繁殖,生長成獨立的個體,增殖,分化成完整的植物的潛能。 Cell具有所有遺傳信息和生長成完整植物的能力,而完整植物上的生活細胞受到整體Cell的

7、控制(即gene塊or other的作用),完整植物上的Cell細胞僅表達一定形態(tài)的生理功能。 上述階段只是探索,沒有實質(zhì)性的進展,主要受當時的理論水平、科研和設備條件的限制,無法誘導完整的股票。 2、發(fā)展時期(建立階段,從30年代中期到50年代末)組織培養(yǎng)的真正建立和發(fā)展,從1934年突破。 1933李繼頓,沈同用銀杏胚乳提取物培養(yǎng)銀杏胚取得成功,(得到3mm以上大小的胚,可以正常生長為小株)胚乳提取物可以促進銀杏的離體胚的生長,為后代利用植物組織提取液促進培養(yǎng)物的生長提供了實驗依據(jù)。 這是第一次利用天然提取物。 1934年,美國白色在無機鹽、糖類和酵母提取物的培養(yǎng)基上切番茄根部培養(yǎng),建立了

8、第一個活躍生長的無性繁殖系。 代替無機鹽、三種b族維生素、酵母的浸出液(19341968 )繼1600多歲后也能正常生長。 1943年,懷特出版了第一部特輯植物組織培養(yǎng)手冊 A Hand Book of Plant Tissue Culture。 1945年F.Skoog和崔澄發(fā)現(xiàn)腺嘌呤促進細胞分裂,產(chǎn)生芽。 Skoog和催澄在煙莖段和髓培養(yǎng)和器官形成的研究中,發(fā)現(xiàn)腺嘌呤和腺苷解除生長素(IAA )對芽形成的抑制作用,誘導芽形成。 1956年Miller發(fā)現(xiàn)驅(qū)動蛋白的效果是腺嘌呤的3萬倍。 1957 Skoog和Miller提出了植物激素調(diào)節(jié)器官形成的概念細胞分裂素莖生長素根,1958 Rei

9、ner and Steward通過胡蘿卜的愈傷組織和細胞培養(yǎng),誘導分化產(chǎn)生體細胞胚,這是人類第一次實現(xiàn)人工體細胞胚,獲得個體株。 爆發(fā)了Haberlandt的愿望,科學證明了全能性理論。 這個階段,White等人的工作建立了植物組織培養(yǎng)的綜合培養(yǎng)基,包括無機鹽、有機成分和生長刺激因素,同時建立了植物組織培養(yǎng)的基本方法,為目前植物組織培養(yǎng)的技術基礎。 成功原因: (1)植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的應用,控制離體細胞生長和分化;(2B族v生物素對植物細胞生長的重要認識和采用(1934,white)3white和Gautheret發(fā)展的基本方法,3快速發(fā)展階段(60年代以來) 可以歸納為以下四個方面: (1)

10、基礎研究領域成績顯著: 1962 Murashige Skoog在煙草培養(yǎng)中篩選出了優(yōu)秀的MS培養(yǎng)基。 1965 Vasil Hildebrandt成功地從分離培養(yǎng)的煙草單細胞中培育出了完全的再生株。 從細胞水平證實植物細胞具有全能性。 (2)原生質(zhì)體培養(yǎng)突破: 1971 Takebe首次用煙草從原生質(zhì)體中獲得再生株。 再次確認植物細胞的全能性。 原生質(zhì)體培養(yǎng)為外源基因的導入提供了理想的受體,促進了體細胞融合技術的發(fā)展細胞水平分子水平,(3)花藥培養(yǎng)取得了顯著的成績: 1964 Guha首次實現(xiàn)了花藥的離體培養(yǎng)。該技術主要用于遺傳育種,可以大幅度縮短育種周期,提高效率。 我國科學家在煙草、水稻

11、、小麥多倍體培養(yǎng)中取得了重要成績。 (4)微繁技術得到了廣泛應用: 1960 Morel提出了分離早產(chǎn)蘭的方法。 “蘭的工業(yè)”現(xiàn)在微繁技術已經(jīng)廣泛用于各種經(jīng)濟作物的生產(chǎn),結合莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒技術,有助于無毒種苗的繁殖。 60年代以來,植物組織培養(yǎng)技術發(fā)展迅速,重要原因之一是離開實驗室,通過選育優(yōu)良品種、遺傳育種與植物基因工程技術結合,對植物改良發(fā)揮了重要作用。 在組織培發(fā)展史上,我國科學家作出了多方面的貢獻。 早期的李繼頓、羅宗洛、羅士偉、崔瀓等做了很多寶貴的工作。 進入70年代以來,中國科學家在原生質(zhì)體培養(yǎng)和花藥培養(yǎng)上獲得了世界公認的重要成績,得到了世界同事的普遍重視和稱贊。 我國成績:

12、中國從70年代開始開展花藥培養(yǎng)的多倍體培養(yǎng)(棉花、玉米、谷子、高粱、大麥)。 全國科技大會以來,中國在組織培養(yǎng)方面關注許多研究成果。 我國植物組織培養(yǎng)技術的普及度和技術水平都處于世界領先水平(周永青1990 ),中國是世界上從事植物組織培養(yǎng)人數(shù)最多、實驗室面積最大的國家(陳維倫1990 )。 朱至清開發(fā)的N6培養(yǎng)基獲得國家發(fā)明二等獎。 國家的“六五”、“七五”、“八五”和“九五”都把生物技術作為國家重點難關項目。 三、植物組織培養(yǎng)技術應用,一、優(yōu)質(zhì)種苗快速無性繁殖: (1)無性繁殖作物和不易繁殖的作物快速繁殖,園藝植物種苗工廠化生產(chǎn),蘭科植物生產(chǎn),a、b、e、c、f、g,水燭屬植物、廄類植物、盆栽和剪花植物繁殖,珍貴樹種、無菌苗快速繁殖,無菌苗馴化經(jīng)濟植物快速繁殖,(2)通過莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒健康種苗:草莓等virus-free tissue,莖尖培養(yǎng)脫毒,脫毒馬鈴薯種生物反應器液體培養(yǎng),2,用于植物遺傳育種的種資源脫體保存花粉花藥培養(yǎng)產(chǎn)多倍體胚乳培養(yǎng)產(chǎn)三倍體的胚培養(yǎng)是雜種

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