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文檔簡(jiǎn)介
1、臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù),第二十九章 生殖免疫及其免疫檢測(cè),王 芳,目 錄,第一節(jié) 概述 第二節(jié) 常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法和臨床意義,人類(lèi)生殖過(guò)程圖示,生殖免疫學(xué)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的生殖生物學(xué)與免疫生物學(xué)交叉的邊緣學(xué)科,著眼于研究生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域免疫學(xué)問(wèn)題。 主要包括神經(jīng)-生殖內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)、母-胎免疫調(diào)節(jié)及生殖免疫調(diào)節(jié)等方面。,第一節(jié) 概述,重點(diǎn)提示,生殖道組織的局部免疫 妊娠與免疫 自然流產(chǎn)與免疫 性激素與免疫,一、生殖道組織的局部免疫,(一)宮頸與陰道免疫 1. 抗原提呈細(xì)胞 (1)性質(zhì):樹(shù)突狀巨噬細(xì)胞 (2)分布:宮頸和陰道上皮層 2. T 細(xì)胞 (1)成分:主要為CD8+ T細(xì)胞
2、 (2)分布:宮頸天然上皮、轉(zhuǎn)化區(qū)上皮細(xì)胞 3. B細(xì)胞 (1)分布:陰道、宮頸陰道部、宮頸管組織 (2)分泌抗體:分泌型IgA,一、生殖道組織的局部免疫,(二)子宮局部免疫 1. T細(xì)胞 (1)免疫營(yíng)養(yǎng)作用 (2)免疫殺傷作用 2. 巨噬細(xì)胞 主要的抗原提呈細(xì)胞 3. 大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL),一、生殖道組織的局部免疫,(三)卵巢免疫 1.免疫細(xì)胞 (1)巨噬細(xì)胞 (2)淋巴細(xì)胞 (3)肥大細(xì)胞 (4)多形核細(xì)胞 2.細(xì)胞因子 (1)胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF) (2)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-) (3)表皮生長(zhǎng)因子(EGF),二、妊娠與免疫,(一)配子免疫 1. 精子抗原 (1)膜抗原 (2)結(jié)
3、構(gòu)抗原 (3)血型抗原 (4)組織相容性抗原 (5)精子內(nèi)部各種酶系抗原,二、妊娠與免疫,2. 卵細(xì)胞-透明帶抗原 由顆粒細(xì)胞分泌并包裹于卵細(xì)胞膜表面的一層基質(zhì),為糖蛋白,在受精過(guò)程中起重要作用。透明帶抗原可誘發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗透明帶抗體,當(dāng)抗體與透明帶結(jié)合可影響卵細(xì)胞的受精及著床。,二、妊娠與免疫,(二)胚胎免疫 胚胎同種抗原 (1)定義:來(lái)源于胚胎期和胚胎組織的一類(lèi)抗原。 (2)分類(lèi): 胚胎同種抗原; HLA; AFP,二、妊娠與免疫,(三)母體-胎兒免疫 胎兒不被母體所排斥的因素: (1)妊娠期母體的免疫防御反應(yīng)受到嚴(yán)重抑制; (2)胎盤(pán)的免疫屏障作用將胎兒抗原封閉起來(lái); (3)母體的抗體
4、及其他免疫因子受到胎盤(pán)屏障的阻礙。,妊娠與免疫,(四)胎盤(pán)免疫 1.胎盤(pán)機(jī)械屏障作用; 2.胎盤(pán)限制大分子抗原物質(zhì)進(jìn)入胎兒血液循環(huán); 3.滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的HLA-G抗原發(fā)揮免疫抑制作用; 4.胎盤(pán)分泌多種具有免疫抑制作用的蛋白質(zhì)及激素。,三、自然流產(chǎn)與免疫,免疫機(jī)制,非免疫相關(guān),免疫相關(guān),40%-50%,50%-60%,染色體異常,生殖道解剖異常,內(nèi)分泌異常,生殖道感染,自身免疫型,同種免疫型,三、自然流產(chǎn)與免疫,1.自身免疫型 (1)抗磷脂抗體 定義:是一組自身免疫性抗體,包括狼瘡抗凝因子、 抗心磷脂抗體、抗磷脂酸絲氨酸抗體、抗磷脂酸抗體等。 意義:若陽(yáng)性,則流產(chǎn)的發(fā)生率高達(dá)66%89%。
5、(2) 抗精子抗體 作用:阻礙精子獲能;干擾精子穿過(guò)卵子透明帶等。,三、自然流產(chǎn)與免疫,2.同種免疫型 (1)組織相容性抗原系統(tǒng)(HLA)與自然流產(chǎn) HLA-DR,HLA-DQ抗原 滋養(yǎng)層-淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原(TLX) (2)封閉抗體( blocking antibodies,BA )與自然流產(chǎn) BA與母胎界面上來(lái)自父系的抗原相結(jié)合,阻止母體Th細(xì)胞識(shí)別胎兒抗原后引發(fā)的對(duì)胚胎的攻擊。 (3)細(xì)胞免疫與復(fù)發(fā)性流產(chǎn) Th1/ Th2平衡失調(diào),四、性激素與免疫,泌乳素 孕激素 雌激素,四、性激素與免疫,(一)泌乳素 性質(zhì):垂體激素; 分布:以胸腺、卵巢、淋巴細(xì)胞為主; 作用:促進(jìn)胸腺內(nèi)T細(xì)胞分化成
6、促進(jìn)B細(xì)胞的分化和成熟,也是NK細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子。,四、性激素與免疫,(二)孕激素 孕酮通過(guò)識(shí)別胎兒來(lái)源的抗原,活化/TCR+形成孕酮受體對(duì)妊娠的免疫保護(hù)作用; 孕酮通過(guò) PIBF干擾花生四烯酸的代謝和誘導(dǎo)免疫反應(yīng)向TH2偏移,降低NK細(xì)胞活性,有助于妊娠維持。,四、性激素與免疫,(三)雌激素 1.雌激素對(duì)免疫系統(tǒng)的作用: 調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、增生; 影響細(xì)胞因子的產(chǎn)生; 刺激B細(xì)胞的活化和抗體的產(chǎn)生。 2.雌激素受體(estrogen receptor , ER),第二節(jié) 常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法和臨床意義,重點(diǎn)提示,不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè) 反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)
7、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè) 生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè) 生殖系內(nèi)分泌功能的免疫學(xué)檢測(cè),一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),不孕癥:指婚后未避孕,同居2年未曾受孕者。抗精子抗體,抗透明帶抗體是其中重要的免疫性因素。,一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),(一)抗精子抗體(AsAb) 1.抗精子抗體產(chǎn)生機(jī)制: (1)男性抗精子抗體:自身抗體; (2)女性抗精子抗體:同種異體抗體; 2.抗精子抗體類(lèi)型: (1)生殖道分泌物中主要為分泌型IgA,血清中以IgG和IgM為主; (2)臨床上通常檢測(cè)的是血清中的IgG。,一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),3.抗精子抗體的檢測(cè)方法 (1)精子凝集試驗(yàn) 原理:精子表面結(jié)合了抗體后可相互凝集;
8、 檢測(cè)方法:明膠凝集法、管板凝集法、圓盤(pán)凝集法、毛細(xì)管凝集法等; 特點(diǎn):本法特異性差,假陽(yáng)性發(fā)生率高。,精子凝集圖,一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),(2)補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動(dòng)試驗(yàn) 原理:在補(bǔ)體作用下,精子與抗體結(jié)合后不能向前移動(dòng); 特點(diǎn):本法僅能檢測(cè)作用于精子尾干等的精子抗體,特異性強(qiáng),敏感性差,假陰性發(fā)生率高。 (3)免疫珠結(jié)合法 原理:用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面,在相差顯微鏡可見(jiàn)此種免疫珠隨精子前進(jìn)而移動(dòng)。 特點(diǎn):此法可靠性好但敏感性難以肯定,不能進(jìn)行定量測(cè)定。,一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),(4)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 是不孕不育的一項(xiàng)
9、初篩試驗(yàn); 敏感性高,重復(fù)性好。,人抗精子抗體ELISA試劑盒,一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),(二)抗透明帶抗體(AzpAb) 1. AzpAb產(chǎn)生機(jī)制 透明帶具有抗原性,感染或育齡婦女排卵過(guò)程中透明帶反復(fù)破裂和吸收,機(jī)體處于抗原刺激的敏感狀態(tài),產(chǎn)生AzpAb; 2. AzpAb對(duì)生殖的影響 阻遏精子吸附和穿過(guò)透明帶;干擾著床;影響卵細(xì)胞發(fā)育和生長(zhǎng)。,不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè),3. AzpAb的檢測(cè)方法 (1)ELLSA及BA-ELLSA法: (2)透明帶沉淀反應(yīng) (3)放射免疫法 (4)間接免疫熒光試驗(yàn) (5)被動(dòng)血凝法 (6)精子-透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn),二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè),(一)封閉
10、抗體(blocking antibodies) 1. 定義:是人類(lèi)白細(xì)胞抗(HLA)、滋養(yǎng)層及淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原(TLX)等刺激母體免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的一類(lèi)IgG型抗體。 2. 分類(lèi):抗HLA-DR抗 體抗TLX抗體; 抗Fc受體抗體; 抗基因抗體; 抗冷B細(xì)胞抗體。,二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè),3.檢測(cè)方法 (1)補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒試驗(yàn) 女方血清內(nèi)的封閉抗體與男方外周血淋巴細(xì)胞結(jié)合,在補(bǔ)體作用下致細(xì)胞死亡,經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色(使死亡細(xì)胞著色),顯微鏡下評(píng)判結(jié)果。 (2)單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)封閉試驗(yàn) 絲裂霉素處理男方淋巴細(xì)胞后,分別在含有AB型血清及女方血清的培養(yǎng)條件下與女方淋巴細(xì)胞混合培育,3H-胸
11、腺嘧啶核苷摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖水平,結(jié)果以封閉效率表示。,二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè),(3)流式細(xì)胞術(shù)分析封閉抗體 原理:采用競(jìng)爭(zhēng)法原理,以AB型或小牛血清中抗CD3、CD4、CD25的抗體與測(cè)定管中的抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合男方細(xì)胞; 測(cè)定抗CD3、CD4、CD25封閉效率大于1%為陽(yáng)性。,流式細(xì)胞儀,二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè),(二)抗磷脂抗體(APLA) 1. 定義:是一種廣泛的、異種基因的自身抗體家族,分為狼瘡抗凝物(LAC)和抗心磷脂抗體(ACA)兩大類(lèi)。 2.抗心磷脂抗體(ACLA)的檢測(cè)方法 ELISA法最常用,二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè),(三)夫婦雙方HLA抗原檢測(cè) HLA-I類(lèi)抗原多
12、用血清學(xué)方法檢測(cè); HLA-DR抗原檢測(cè)常用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)鑒定; (四)透明帶抗體及抗精子抗體檢測(cè) 見(jiàn)第二十九章第二節(jié),二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè),(五)血型及抗血型抗體測(cè)定 1.常見(jiàn)的血型不合引起的同種免疫病 (1)ABO血型不合的同種免疫??; (2)Rh血型不合的同種免疫病; 2.診斷主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室特異性抗體檢查,三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè),(一)支原體檢測(cè) 1.定義:是一類(lèi)缺乏細(xì)胞壁,能在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核生物; 2.分類(lèi):16種, 5種對(duì)人有致病性 (1) 肺炎支原體 (2) 解脲支原體 (3) 人型支原體 (4) 生殖支原體 (5) 發(fā)酵支原體,支原體示意圖,三、
13、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè),3.檢測(cè)方法 (1) 病原培養(yǎng) 采用間接培養(yǎng)法 (2) 血清學(xué)試驗(yàn) 1) 特異性血清學(xué)檢測(cè)方法:補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 2) 非特異性血清學(xué)檢測(cè)方法:肺炎支原體冷凝集試驗(yàn)等,支原體培養(yǎng)基,三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè),(3) 抗原檢測(cè) ELISA、間接免疫熒光法、反向間接血凝法等直接檢測(cè)分泌物和體液中支原體抗原,具有較高的特異性和靈敏度。 (4)核酸檢測(cè) 基因探針、PCR等方法,三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè),(二)衣原體檢測(cè) 定義:是一類(lèi)能通過(guò)細(xì)菌濾器,有獨(dú)特發(fā)育周期,專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞類(lèi)微生物。 分類(lèi):沙眼衣原體,鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體。,衣原體,三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)
14、,3. 檢測(cè)方法 (1)尋找抗原 1)雞胚分離培養(yǎng); 2)細(xì)胞分離培養(yǎng); 3)涂片檢查包涵體; 4)ELISA或熒光法檢查衣原體抗原; 5)金標(biāo)法衣原體快速檢測(cè)。,衣原體包涵體,三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè),(2)尋找抗體 微量免疫熒光法 (3)尋找特異性核酸 1)連接酶鏈反應(yīng) 2)轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增試驗(yàn) 3)聚合酶鏈反應(yīng) 4)實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng),四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè),(一)生殖系腫瘤常用的免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo) 1. 血清糖蛋白腫瘤標(biāo)志物 (1)鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCCA):可作為宮頸癌的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子和預(yù)后指標(biāo)。 (2)CA-125 (3)CA15-3 (4)CA19-9 (5)癌胚抗原(CEA)
15、(6)前列腺特異性抗原(PSA),四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè),2. 胎兒-胎盤(pán)蛋白腫瘤標(biāo)記物 (1)甲胎蛋白(AFP) (2)人絨毛膜促性腺激素(HCG) -HCG用于早孕的診斷,對(duì)葡萄胎、絨毛膜癌等有重要的診斷和療效監(jiān)測(cè)價(jià)值。,四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè),3. 酶類(lèi)腫瘤標(biāo)記物 (1)堿性磷酸酶(ALP) 胎盤(pán)型ALP常作為宮頸癌和卵巢上皮性癌的腫瘤標(biāo)記物。 (2)乳酸脫氫酶(LDH) 用于卵巢上皮性和生殖細(xì)胞腫瘤的檢測(cè)。 (3)端粒酶 與細(xì)胞衰老,腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及分化程度具有相關(guān)性。,四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè),(二)生殖系腫瘤免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè) 1. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 2. 化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)(CLEIA) 3. 電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)(ECLIA) 4. 時(shí)間分辨熒光免疫試驗(yàn)(TRFIA) 5. 液相芯片技術(shù),五、生殖系內(nèi)分泌功能的免疫學(xué)檢測(cè),(一)激素 1.絨毛膜促性腺激素(HCG) 2. 雌三醇 3. 胎盤(pán)泌乳素(hPL) 4. 垂體催乳素(PRL) 5. 孕酮 6. 胎兒纖連蛋白(fFN) 7. 促卵泡激素(FSH)和黃體生成素(LH),五、生殖系內(nèi)分泌功能的免疫學(xué)檢測(cè),(二)激素受體 1.雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR) 2. LH-CG受體和FSH受體,本章小結(jié),抗精子抗體及抗透明帶抗體是免疫因素所致
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