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文檔簡介
1、 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶,一 生產(chǎn)工藝流程 1.收集篩選菌種: 2.菌種保藏: 3.細(xì)胞活化: 4.根據(jù)菌種選培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng): 5.發(fā)酵管理:發(fā)酵 工藝流程:收集篩選菌種菌種保藏細(xì)胞活化擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵管理,收集、篩選菌種,1.用錢購買菌種 2.收集土樣篩選菌種 收集土樣 初篩:單菌落培養(yǎng),用透明圈法選出產(chǎn) 目的酶的微生物(使用鑒定培養(yǎng)基) 復(fù)篩:單菌落培養(yǎng),選出符合優(yōu)良菌種 要求的菌落(使用選擇培養(yǎng)基),菌種保藏,菌種保藏方法: (1)斜面培養(yǎng)法 (2) (3) (4) (5) (6),細(xì)胞活化,保藏的菌種通常以芽孢形式存在(保藏時 營養(yǎng)缺乏),需放入營養(yǎng)充足的營養(yǎng)環(huán)境中 活化:芽孢營養(yǎng)細(xì)胞,擴(kuò)大培養(yǎng),
2、1.定義:根據(jù)菌種特點配制培養(yǎng)基,使菌種 大量繁殖用于發(fā)酵 2.方法:種子罐培養(yǎng);實驗室培養(yǎng) (工業(yè)生產(chǎn)) (實驗室) 3.目的:使菌種大量繁殖,用于發(fā)酵 培養(yǎng)基配制:碳源、氮源、生長因子、無 機(jī)鹽、水 CN:碳源:糖加碳源加C/N酸性利于菌種 保存(作保存培養(yǎng)基) 氮源:有機(jī)、無機(jī)加氮源減C/N堿性 利于酶制劑生產(chǎn)(產(chǎn)酶需N元素), 產(chǎn)酶微生物,1.菌種要求:繁殖力強(qiáng)(繁殖周期短) 產(chǎn)酶穩(wěn)定,產(chǎn)酶能力強(qiáng) 安全(不用病菌) 利于發(fā)酵管理(易于發(fā)酵) 2.常用產(chǎn)酶微生物:略 單菌落培養(yǎng)法:稀釋涂平板,長單菌落,易 于分離 透明圈法:例如:明膠作培養(yǎng)基可鑒別出產(chǎn)蛋白酶 的菌落(明膠是蛋白質(zhì),蛋白酶
3、可分解明膠) CaCO3作培養(yǎng)基可鑒別出產(chǎn)酸菌落(產(chǎn)生 的酸可分解CaCO3,形成透明圈),發(fā)酵管理,1.溫度、PH:最適生長溫度、PH與最適產(chǎn)酶溫度、PH不同,要實時監(jiān)控、 調(diào)節(jié)溫度、PH 溫度:0-10oC;PH:酶活力范圍內(nèi), 防酶變性 調(diào)PH方法:CaCO3(備用堿) 磷酸緩沖液:維持PH穩(wěn)定 調(diào)C/N:只工業(yè)上適用,C/N酸, C/N堿 2.增大溶氧量:(1)攪拌,使大氣泡變?yōu)楹芏嘈?泡 (2)加大通入氧氣量,3.氣泡:產(chǎn)生:攪拌發(fā)酵液增大溶氧量 危害:阻礙CO2排出,使PH減 小,使發(fā)酵液變酸,影 響微生物生長、產(chǎn)酶 氣泡過多會使菌液漫 出,造成菌種污染 消除方法:機(jī)械消泡、化學(xué)試劑 消泡、表面活性劑消 泡 4.濕度 開始:低 后來:高,5.提高酶產(chǎn)量的方法 加誘導(dǎo)物 減阻遏物 轉(zhuǎn)基因(獲得產(chǎn)酶能力強(qiáng)的微生物去產(chǎn)酶) 加表面活性劑 加產(chǎn)酶促進(jìn)劑,微生物生長與產(chǎn)酶模式,微生物生長模式:調(diào)整期、對數(shù)期、平衡期、衰亡期 產(chǎn)酶模式:1.同步合成型:調(diào)整期始產(chǎn)酶,平衡期始停產(chǎn) 2.中期合成型:對數(shù)期始產(chǎn)酶,平衡期始停產(chǎn) 3.滯后合成型:平衡期始產(chǎn)酶,衰退期始停產(chǎn) 4.延續(xù)合成型:調(diào)整期始產(chǎn)酶,衰退期始停產(chǎn) 提高產(chǎn)酶能力的方法(變?yōu)檠永m(xù)合成型) 1.非調(diào)整期始產(chǎn)酶(中
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