Ⅱ 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶.ppt

1、 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶,一 生產(chǎn)工藝流程 1.收集篩選菌種: 2.菌種保藏： 3.細(xì)胞活化： 4.根據(jù)菌種選培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng): 5.發(fā)酵管理:發(fā)酵 工藝流程：收集篩選菌種菌種保藏細(xì)胞活化擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵管理,收集、篩選菌種,1.用錢購買菌種 2.收集土樣篩選菌種 收集土樣 初篩：單菌落培養(yǎng)，用透明圈法選出產(chǎn) 目的酶的微生物（使用鑒定培養(yǎng)基） 復(fù)篩：單菌落培養(yǎng)，選出符合優(yōu)良菌種 要求的菌落（使用選擇培養(yǎng)基）,菌種保藏,菌種保藏方法： (1)斜面培養(yǎng)法 (2) (3) (4) (5) (6),細(xì)胞活化,保藏的菌種通常以芽孢形式存在（保藏時 營養(yǎng)缺乏），需放入營養(yǎng)充足的營養(yǎng)環(huán)境中 活化：芽孢營養(yǎng)細(xì)胞,擴(kuò)大培養(yǎng),

2、1.定義：根據(jù)菌種特點配制培養(yǎng)基，使菌種 大量繁殖用于發(fā)酵 2.方法：種子罐培養(yǎng)；實驗室培養(yǎng) （工業(yè)生產(chǎn)） （實驗室） 3.目的：使菌種大量繁殖，用于發(fā)酵 培養(yǎng)基配制：碳源、氮源、生長因子、無 機(jī)鹽、水 CN：碳源：糖加碳源加C/N酸性利于菌種 保存（作保存培養(yǎng)基） 氮源：有機(jī)、無機(jī)加氮源減C/N堿性 利于酶制劑生產(chǎn)（產(chǎn)酶需N元素）, 產(chǎn)酶微生物,1.菌種要求：繁殖力強(qiáng)(繁殖周期短) 產(chǎn)酶穩(wěn)定，產(chǎn)酶能力強(qiáng) 安全(不用病菌) 利于發(fā)酵管理(易于發(fā)酵) 2.常用產(chǎn)酶微生物：略 單菌落培養(yǎng)法：稀釋涂平板，長單菌落，易 于分離 透明圈法：例如:明膠作培養(yǎng)基可鑒別出產(chǎn)蛋白酶 的菌落(明膠是蛋白質(zhì),蛋白酶

3、可分解明膠) CaCO3作培養(yǎng)基可鑒別出產(chǎn)酸菌落(產(chǎn)生 的酸可分解CaCO3,形成透明圈),發(fā)酵管理,1.溫度、PH：最適生長溫度、PH與最適產(chǎn)酶溫度、PH不同,要實時監(jiān)控、 調(diào)節(jié)溫度、PH 溫度：0-10oC;PH:酶活力范圍內(nèi)， 防酶變性 調(diào)PH方法：CaCO3（備用堿） 磷酸緩沖液：維持PH穩(wěn)定 調(diào)C/N：只工業(yè)上適用，C/N酸， C/N堿 2.增大溶氧量：(1)攪拌，使大氣泡變?yōu)楹芏嘈?泡 (2)加大通入氧氣量,3.氣泡：產(chǎn)生：攪拌發(fā)酵液增大溶氧量 危害：阻礙CO2排出，使PH減 小，使發(fā)酵液變酸，影 響微生物生長、產(chǎn)酶 氣泡過多會使菌液漫 出，造成菌種污染 消除方法：機(jī)械消泡、化學(xué)試劑 消泡、表面活性劑消 泡 4.濕度 開始：低 后來：高,5.提高酶產(chǎn)量的方法 加誘導(dǎo)物 減阻遏物 轉(zhuǎn)基因（獲得產(chǎn)酶能力強(qiáng)的微生物去產(chǎn)酶） 加表面活性劑 加產(chǎn)酶促進(jìn)劑,微生物生長與產(chǎn)酶模式,微生物生長模式：調(diào)整期、對數(shù)期、平衡期、衰亡期 產(chǎn)酶模式：1.同步合成型：調(diào)整期始產(chǎn)酶，平衡期始停產(chǎn) 2.中期合成型：對數(shù)期始產(chǎn)酶，平衡期始停產(chǎn) 3.滯后合成型：平衡期始產(chǎn)酶，衰退期始停產(chǎn) 4.延續(xù)合成型：調(diào)整期始產(chǎn)酶，衰退期始停產(chǎn) 提高產(chǎn)酶能力的方法（變?yōu)檠永m(xù)合成型） 1.非調(diào)整期始產(chǎn)酶（中