纖維素分解菌

1、分解纖維素的微生物的分離,1、纖維素在生物圈的分布狀況？,2、纖維素酶的組成及作用？,纖維素是地球上含量最豐富的多糖類(lèi)物質(zhì)。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。,纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。,基礎(chǔ)知識(shí)：纖維素和纖維素酶,纖維素分解菌的篩選,1、纖維素分解菌的篩選方法,2、纖維素分解菌的篩選方法的原理,剛果紅染色法：這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接 對(duì)微生物進(jìn)行篩選,剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡

2、萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中心的 。這樣我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌,透明圈,實(shí)驗(yàn)操作,選擇培養(yǎng),梯度稀釋,將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上,挑選產(chǎn)生透明圈的菌落,土壤取樣,土壤取樣,取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這種選擇的理由是什么？,選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。 生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境,選擇培養(yǎng),1、選擇培養(yǎng)的目的：,增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠

3、從樣品中分離到所需要的微生物,2、制備選擇培養(yǎng)基,3、操作方法：,將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)12天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng),為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？,在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用,梯度稀釋,按照課題1 的稀釋操作方法，將選擇培 養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋?zhuān)♂屪畲蟊稊?shù) 到106,將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上,1、制備培養(yǎng)基: 2、涂布平板： 將稀釋度為104106的菌懸液各取0.1ml

4、涂布在培養(yǎng)基上，30倒置培養(yǎng),挑選產(chǎn)生透明圈的菌落,剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落,剛果紅染色法,方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng),方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅,這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足?,方法一 缺點(diǎn)是操作煩瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用 方法二 優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題；缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類(lèi)物質(zhì)，可以使能產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)；缺點(diǎn)二有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分,1、下列

5、關(guān)于纖維素酶的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是,A、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種 B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖 C、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖,2、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是,A、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物 B、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物 C、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物 D、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說(shuō)明已篩選出了纖維素分解菌,D,B,3、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學(xué)觀點(diǎn)？（ ） A、生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn) B、生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn) C、生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn) D、生物發(fā)展進(jìn)化的觀

6、點(diǎn),4、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（ ） 土壤取樣 梯度稀釋 選擇培養(yǎng) 菌懸液涂布平板 挑選出單個(gè)菌落 A、 B、 C、 D、,C,B,5、有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是（ ）,A、可以增加纖維素分解菌的濃度 B、可以減少纖維素分解菌的濃度 C、所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基 D、所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基,A,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),（一）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落,（二）分離的結(jié)果是否一致,設(shè)置對(duì)照，若對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)菌落生長(zhǎng)則說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說(shuō)明可能獲得了分解纖維素的微生物。,尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程： 將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一 氮源的選擇培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落； 纖維素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程： 通過(guò)選擇培養(yǎng)先使細(xì)菌增殖后，再將菌液涂布 在鑒別培養(yǎng)基上。其他操作基本相同。,兩個(gè)實(shí)驗(yàn)流程的異同,將細(xì)菌涂布在只有 尿素做氮源的選擇 培養(yǎng)基上,將細(xì)菌涂布在只有 纖維素粉做碳源的 選擇培養(yǎng)基上,固體培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基,篩選菌株,選擇培養(yǎng),在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng) 中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素 分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基 的堿性增強(qiáng)，pH升高。在培 養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如 果pH升高指示劑會(huì)變紅,剛果紅可以與纖維素形成 紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被