線粒體超活染色.ppt

1、實驗5:線粒體的超微結(jié)構(gòu)染色和顯微觀察。首先，實驗的目的是掌握活體動植物細(xì)胞的原理和相關(guān)技術(shù)。第二，實驗原理：活體染色是一種對活體細(xì)胞或組織無害的染色方法。它的目的是展示活細(xì)胞的一些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動，也不產(chǎn)生任何導(dǎo)致細(xì)胞死亡的物理和化學(xué)變化。B(駿利綠B是一種毒性較小的堿性染料，它能特異性地過度染色線粒體。這是因為線粒體中的細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)使染料保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，并且是藍(lán)綠色的。在線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原成無色的堿基(即無色狀態(tài))，第三，實驗儀器顯微鏡、解剖盤、剪刀、吸管、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙。實驗材料洋蔥球，兔v .實驗試劑1，林格氏溶液氯化鈉0.85克

2、KCl 0.25克氯化鈣0.03克蒸餾水100毫升2，1%，1/5000駿利綠B溶液稱取50毫克駿利綠B并將其溶解在5毫升林格氏溶液中。向49毫升林格氏溶液中加入1毫升1%的儲備溶液，即將1/5000的工作溶液放入棕色瓶中備用。六.實驗步驟1。兔肝線粒體超微結(jié)構(gòu)染色觀察。(1)通過空氣注射殺死兔子，將其放入解剖盤中，迅速打開腹部，取一小塊肝邊緣較薄的肝組織，將其放入含有林格氏溶液的觀察鏡中，洗去血液(2)，并取另一個干凈的觀察鏡。滴1/5000 Janus Green B溶液，然后將肝組織塊轉(zhuǎn)移到染料溶液中，但不要完全浸沒組織塊，使組織的上部暴露，這樣細(xì)胞中的線粒體酶系統(tǒng)可以被充分氧化并容易染

3、色，當(dāng)組織塊的邊緣被染成藍(lán)綠色時(一般為20分鐘)(3)，吸掉染料溶液，滴Ringer溶液， 用剪刀剪開組織塊的有色部分，制成細(xì)胞。然后，用吸管吸取分離的細(xì)胞懸液，將其放在載玻片上，用蓋玻片覆蓋，在低功率鏡下選擇不重疊的肝細(xì)胞，在高功率鏡或油鏡下觀察。 2.用超活性染色法觀察洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒體。(1)用吸管吸取1/5000 Janus Green B染料溶液，滴在干凈的載玻片上，然后撕下一小塊洋蔥球內(nèi)表皮，放入染色機(jī)中；(2)用吸管吸取染料溶液，加入一滴Ringer溶液，注意壓平內(nèi)表皮，用蓋玻片覆蓋觀察。(3)高倍鏡下，可見洋蔥表皮細(xì)胞的中心被一個大液泡占據(jù)，細(xì)胞核被擠向一側(cè)，緊貼細(xì)胞壁。仔細(xì)觀察線粒體在