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1、08級(jí)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)考試試題解答ppt,ppt制作人: 36號(hào) 龔鵬 解說(shuō)人 : 35號(hào) 張青 36號(hào) 龔鵬 37號(hào) 曾澤文,第八組,問(wèn)題:,某細(xì)菌肥料是由相關(guān)的不同 組成的一個(gè)菌群并通過(guò)混合培養(yǎng)得到的一種產(chǎn)品。 的多少是質(zhì)量好壞的一個(gè)重要標(biāo)志之一,請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案來(lái)檢測(cè)該細(xì)菌肥料的質(zhì)量?在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為減少實(shí)驗(yàn)誤差提高數(shù)據(jù)的可靠性,應(yīng)該注意那些操作步驟?,微生物,活菌數(shù),我們的思路,一、題目分析 二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 三、解題總結(jié),一、題目分析,某細(xì)菌肥料是由相關(guān)的 組成的一個(gè)菌群并通過(guò)混合培養(yǎng)得到的一種產(chǎn)品。 的多少是質(zhì)量好壞的一個(gè)重要標(biāo)志之一,請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案來(lái)檢測(cè)該細(xì)菌肥料的質(zhì)量?在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中
2、為減少實(shí)驗(yàn)誤差提高數(shù)據(jù)的可靠性,應(yīng)該注意那些操作步驟? 從題目我們可以看出該題目的要求是 ; 因此,必須考慮以下幾個(gè)問(wèn)題:,不同微生物,活菌數(shù),檢測(cè)單位質(zhì)量細(xì)菌肥料中的活菌數(shù),減少實(shí)驗(yàn)誤差,1、該細(xì)菌肥料中的不同微生物,通過(guò)查找資料我們了解到細(xì)菌肥料,一般有 、 、 、 和 等分成。由此,我們推斷該細(xì)菌肥料中大概有 、 和 。,瘤菌劑,固氮菌劑,磷細(xì)菌劑,抗生菌劑,復(fù)合菌劑,細(xì)菌,真菌,放線菌,有哪幾種?,2、如何 這些微生物?,選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng); 用平板分離法分離。,分離純培養(yǎng),3、怎樣,采用平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法要求操作熟練、準(zhǔn)確,否則難以得到正確結(jié)果。 要求樣品成分混勻,保證每個(gè)活細(xì)胞都能分別形
3、成菌落;盡可能選用選擇性培養(yǎng)基,保證計(jì)數(shù)菌落圍有效菌落。,減少實(shí)驗(yàn)誤差?,解決方法:,思考之后,鑒于,以上幾點(diǎn)我們綜合考慮,最終決定采 用 分離純化微生物并測(cè)定樣品中活菌數(shù)。,稀釋涂布平板法,二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?2、實(shí)驗(yàn)原理 3、實(shí)驗(yàn)過(guò)程,1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢測(cè)單位質(zhì)量樣品細(xì)菌肥料中的 。,活菌數(shù),2、實(shí)驗(yàn)原理,,分離培養(yǎng)樣品中的不同微生物。不同的培養(yǎng)基,由于營(yíng)養(yǎng)成分不同,因此具有選擇性,適合改培養(yǎng)基的微生物就可以生長(zhǎng);反之,則不能生長(zhǎng),根據(jù)不同的選擇培養(yǎng)基,我們可以分離出樣品中的不同微生物。 ,是種統(tǒng)計(jì)物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下:將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)
4、胞,取一定量的稀釋樣液涂布到平板上,經(jīng)過(guò)培養(yǎng),由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落,即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞;統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。,利用選擇培養(yǎng)基,平板菌落計(jì)數(shù)法,3、實(shí)驗(yàn)過(guò)程,(一)樣品的處理和稀釋 (二)培養(yǎng)基的配置及倒平板 (三)涂布 (四)培養(yǎng) (五)計(jì)數(shù)和報(bào)告,(一)樣品的處理和稀釋,1.以無(wú)菌操作取檢樣10g,放于盛有90ml滅菌蒸餾水的滅菌三角瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠),經(jīng)充分研磨、搖床震蕩制成1:10的均勻稀釋液。 2.用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌蒸餾水稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混
5、合均勻,制成1:100的稀釋液。 3.另取1ml滅菌吸管,按上項(xiàng)操作順序,制10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。,操作示意圖:,【注意1:樣品稀釋誤差】,1、為減少樣品稀釋誤差,在連續(xù)遞次稀釋時(shí),每一稀釋液應(yīng)充分振搖,使其均勻,同時(shí)每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管。 2、在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí),應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入稀釋液內(nèi),以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。 3、為減少稀釋誤差,最好采用取10ml稀釋液,注入90ml緩沖液中。,(二)培養(yǎng)基的配置及倒平板,1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(培養(yǎng)細(xì)菌用) 2、高氏i號(hào)培養(yǎng)基(培養(yǎng)放線菌用) 3、馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基(分離真菌用)
6、,倒36個(gè)培養(yǎng)皿,操作圖,【注意2:倒平板誤差】,1. 倒平板時(shí)傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,從1220ml不等,一般以15ml較為適宜,平板過(guò)厚可影響觀察,太薄又易于干裂。傾注時(shí),培基底部如有沉淀物,應(yīng)將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計(jì)數(shù)觀察。 2.為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿后,應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn),檢樣從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過(guò)20min,以防止細(xì)菌有所死亡或繁殖。,(三)涂布,操作方法: 選擇個(gè) 4個(gè)稀釋度,以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液放在無(wú)菌的已經(jīng)凝固的培養(yǎng)基平板上,然后用無(wú)菌的玻璃涂棒把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上,每個(gè)稀
7、釋度做3個(gè)平皿。,(四)培養(yǎng),待瓊脂凝固后,將含高氏i號(hào)培養(yǎng)基和馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基的平板倒置與28溫室中培養(yǎng)3-5d,牛肉膏蛋白胨平板倒置與37溫室中培養(yǎng)1-2d。,【注意3】,1、無(wú)菌操作:操作中必須有“無(wú)菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝,應(yīng)用75%乙醇在包裝開(kāi)口處擦拭后取樣。 2、操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺(tái)或經(jīng)過(guò)消毒處理的無(wú)菌室進(jìn)行。,(五)計(jì)數(shù)和報(bào)告,操作方法: 培養(yǎng)到時(shí)間后,取出培養(yǎng)皿,計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目。計(jì)數(shù)時(shí)可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù),計(jì)算出每克樣品中的菌落數(shù)。 計(jì)算方法: 每克樣品中的菌落數(shù)(個(gè))=同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)(個(gè))稀釋倍數(shù),結(jié)果統(tǒng)計(jì),將計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表,【注意4:計(jì)數(shù)誤差】,1. 到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間,應(yīng)立即計(jì)數(shù)。 2計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)在30300之間的平板 3不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比。 4當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí),要仔細(xì)觀察 清楚再計(jì)數(shù)。,三、解題總結(jié),首先,看到這個(gè)題目時(shí),我們覺(jué)得最難的就是,不
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