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1、課題2月系的花藥培養(yǎng),專題3植物的組織培養(yǎng)技術(shù),專題3植物的組織培養(yǎng),生物選擇1,基礎(chǔ)知識,實驗操作,被子植物的花粉發(fā)育,影響因素,月季的花藥培養(yǎng),生成途徑,結(jié)果分析和評價,課題背景,花的結(jié)構(gòu),縮短1育種周期,為新品種的栽培提供新的,第二,基礎(chǔ)知識,(1)被子植物的花粉發(fā)育,花粉:花線,花藥,雄性,囊型結(jié)構(gòu),里面有很多花粉粒,雄性,花粉囊,花粉囊,花粉粒是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的,因此花粉粒,被子植物花粉的發(fā)育,必須經(jīng)過四分體期、單核期、雙年期等階段?;ǚ郯l(fā)育過程,小孢子母細(xì)胞花粉母細(xì)胞,小孢子,減數(shù)分裂,有絲分裂,花粉管核,生殖細(xì)胞核,分裂,精子,1,營養(yǎng)細(xì)胞,生殖細(xì)胞,4個,單核前
2、的火藥原因不選擇:火藥是軟的,易碎的未選擇單核期后火藥原因:花瓣開始松動,給材料消毒帶來困難。選擇單核火藥方法:選擇未完全打開的花蕾。菌少,易于消毒。(3)影響火藥培養(yǎng)的因素,1,材料選擇:不同種類植物的柔道成功率不同。同一植物親本植物的生理狀態(tài)直接影響誘導(dǎo)成功率。適當(dāng)?shù)幕ǚ郯l(fā)育時期:花期初期火藥最好。選擇最合適的花粉發(fā)育時期,花藥培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基各成分中植物生長調(diào)節(jié)劑的水平和配方優(yōu)于結(jié)晶作用。誘導(dǎo)愈傷組織或胚胎體生成的培養(yǎng)基:2,4-D,IAA廣泛使用。誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基經(jīng)常去除2,4-D,用IBA代替。親本植物的生長條件、材料的低溫預(yù)處理、接種密度、培養(yǎng)的環(huán)境條件等對誘導(dǎo)成功率有一定的影響
3、。2,培養(yǎng)基的組成:3,其他因素:花瓣松動會導(dǎo)致微生物滲入火藥,導(dǎo)致材料消毒困難?;ò晁蓜雍螅瑸槭裁床牧舷居欣щy?1 .火藥選擇通常通過經(jīng)檢查確認(rèn)花粉是否處于適當(dāng)?shù)陌l(fā)育時期。2 .最常用的方法:有些植物的花粉核不易著色,必須采用能把花粉核染成藍(lán)色的區(qū)塊羅姆法。三,實驗操作,(1)材料選擇,醋酸紫法,花塊法。1 .花蕾在體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中30s 2。無菌水清洗3。無菌吸水紙干花蕾表面的水分4。質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中,24min(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和表百分溶液也可用)5。無菌水清洗35次,剝火藥時,要防止火藥(否則接種后受傷部位容易產(chǎn)生二倍體的愈傷組織)受損,并徹底
4、清除花絲。因為連接在花藥上的火藥不利于愈合組織或胚胎體的形成。(c)接種和培養(yǎng),20-30天培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)花藥開裂、愈傷組織生長或胚狀體釋放。及時將愈合組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基,使再生植物進(jìn)一步分化。每瓶7 10個火藥,溫度調(diào)節(jié)25左右,不需要光。幼植物形成后才需要光?;鹚幜验_,胚胎體釋放,火藥內(nèi)產(chǎn)生大量幼植物,火藥裂開后,應(yīng)盡快分離幼植物,分別移植到新的培養(yǎng)基中。否則,牙齒植物將難以分離。進(jìn)一步鑒定和篩選培養(yǎng)的植物。因為在花藥培養(yǎng)中,特別是通過愈傷組織形成的花粉植物,染色體倍性的變化頻繁。第四,結(jié)果分析和評價,第一,選材是否得當(dāng),選材是否成功是火藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。要學(xué)會通過顯微鏡觀察適合發(fā)育時期的
5、花粉。2,說明無菌技術(shù)是否通過了關(guān)口,如果發(fā)生污染現(xiàn)象,培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒、接種等部分操作階段存在問題。3,接種是否成功,接種的火藥培養(yǎng)愈合組織或釋放胚胎體,火藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要及時切換培養(yǎng)基,以便愈合組織或胚胎體進(jìn)一步分化為再生植物?;A(chǔ),實驗操作,被子植物的花粉發(fā)育,花粉,其他因素,影響因素,花粉發(fā)育經(jīng)歷的時期,月季的花藥培養(yǎng),材料和培養(yǎng)基,材料選擇,生成途徑,結(jié)果分析和評價,消毒,接種花粉的時候,通常要確?;ǚ厶幱谶m當(dāng)?shù)陌l(fā)育時期(2)上圖中,火藥脫分化后是否產(chǎn)生胚胎體,愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基。(3)胚胎和愈傷組織結(jié)構(gòu)上的主要差異是愈傷組織的細(xì)胞排列松散、不規(guī)則。是高度的薄壁細(xì)胞。胚胎具有與發(fā)育形成的胚胎相似的結(jié)構(gòu):胚胎、胚軸和胚根。(4)無菌技術(shù)也是成功誘導(dǎo)花粉植物的重要因素。請說明以下項目需要消毒,需要滅菌。培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿盤子,接種環(huán),花蕾,實驗操
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