2012(2009級中藥學本科)中藥藥理(方劑配伍規(guī)律研究思路與實踐).ppt

1、,方劑配伍規(guī)律研究 思路與實踐,配伍是中醫(yī)用藥的特色和優(yōu)勢所在，開展方劑配伍規(guī)律的現(xiàn)代研究是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的重要組成部分，對于繼承和發(fā)展中藥配伍理論、更有效地指導臨床和中藥新產品研創(chuàng)具有重要意義，近年國家自然基金曾將中藥配伍規(guī)律的基礎研究列為重點項目。然而，方劑配伍規(guī)律研究也是中醫(yī)藥現(xiàn)代研究的難點，其研究思路與方法尚在探索之中。,第一部分 方劑配伍規(guī)律研究思路,研究現(xiàn)狀 存在問題 原因分析 我們的認識 研究思路 研究步驟,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,研究現(xiàn)狀,理論研究 “（藥）有單行者，有相須者，有相使者，有相畏者，有相殺者，有相惡者，有相反者。凡此七情，合和視之” 神農本草經(jīng)序例 “

2、七情合和”是中藥配伍理論總綱，也是組方用藥的基礎。,配伍用藥的規(guī)律性認識： 相須相使配伍，能夠增強藥效 相畏相殺配伍，可以制約毒性 相惡相反配伍，可能增毒減效,實驗研究,用藥理方法觀察配伍與藥理效應變化間關系 通過拆方研究證實方劑中各藥有“七情”關系 各藥在方中有“君臣佐使”不同地位 驗證了方劑組成的合理性和中藥配伍應用的優(yōu)越性,用化學方法觀察配伍與化學成分變化間關系 中藥沉淀性配伍研究（黃芩甙與小檗堿） 配伍對有效成分的溶出率的影響 配伍后產生新物質（如生脈散、四逆湯）,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,存在問題,用藥理方法研究拆方配伍較多，從物質基 礎角度研究配伍明顯滯后 從方劑配伍化學成

3、分變化藥理效應 三者變化相互關系研究尚不多見,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,原因分析,方劑物質基礎不需知論 認為方劑是在中醫(yī)藥理論指導下，按君臣佐使、七情和合等配伍原則組成的，已在數(shù)千年的臨床實踐中證實其療效，沒必要非得讓“小白鼠點頭”才算數(shù)；方中各藥的四氣五味就是產生療效的物質基礎，并非用“皂甙、生物堿”說明才科學。 對方劑物質基礎研究的意義認識不足,方劑物質基礎不可知論 認為方劑的組成少則數(shù)味，多者幾十味，化學成分少則幾十種，多則幾百種，既有無機物、小分子有機化合物，又有生物大分子物質，而且這么多的物質在炮制、制劑過程中又可能發(fā)生新的變化，產生新的物質。方劑的物質基礎如此復雜，無從下手

4、，所謂“丸丹膏散，神仙難辨”。 對方劑物質基礎研究信心不足,方劑物質基礎唯成分論 基于世界是物質性的哲學思想，采用還原論的研究思路和現(xiàn)代化學成分研究的方法與技術，引入西醫(yī)生理學、病理學及藥理學等理論和手段，以西醫(yī)的藥理作用作為評價指標，逐步提取、分離、追蹤方劑的化學成分，力圖最終以某種或某些“有效成分”來說明一切。這種以化合物和單體為目標的唯成分論研究方法，基本上脫離了中醫(yī)理論指導，完全走上了“中藥西化”的道路。 對方劑物質基礎研究方法失當,方劑配伍規(guī)律研究應以物質基礎為核心？,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,我們的認識,方劑物質基礎研究是需要的、必然的 方劑若仍停留在僅以宏觀概念表述其基本

5、內容，既不利于繼承，更不利于發(fā)展。復方制劑難以進入國際市場，其重要原因是未能在微觀層次上表達其性質、功效，難以被接受、被應用。因而，開展方劑物質基礎研究是繼承和發(fā)展的需要，是走向現(xiàn)代化、產業(yè)化和國際化的需要，是時代發(fā)展的必然。,方劑物質基礎研究是可行的、漸進的 方劑的物質基礎是一個異常復雜的體系，想短期內完全弄清是不現(xiàn)實的。然而，人類認識自然是一個漸進的過程，對方劑物質基礎的闡明也是漸進的、不斷深入的。隨著科技的進步，研究技術、手段的提高，方劑的物質基礎將會不斷地被揭示。,方劑物質基礎研究的原則 以中醫(yī)藥理論為指導 最大限度運用現(xiàn)代相關技術 以揭示方劑作用原理、配伍內涵為導向 以提高臨床療效、

6、指導新藥研創(chuàng)為目的,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,研究思路,一個核心：以方劑物質基礎研究為核心 兩個結合：方劑配伍理論交互作用理論 物質基礎分析藥理效應觀察 三個層次：單味藥有效部分化學成分 四個水平：整體動物器官組織細胞亞 細胞分子,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,研究步驟,第一步 選方 遵循中醫(yī)藥理論組方 按理法方藥配伍精當 相關現(xiàn)代研究較充分 療效上具有明顯優(yōu)勢,第二步 單味藥層次研究 根據(jù)方劑的主治病證，針對其主要病因病機設計藥理指標，重點在整體水平上觀察藥理作用，分析其配伍規(guī)律。,第三步 有效部分層次研究 根據(jù)現(xiàn)代研究結果，結合該方君臣佐使組成原則，有目的地分離出若干有效部分，

7、對各有效部分進行“四個水平”的藥理作用及作用機理研究，在有效部分層次探討其配伍規(guī)律。,第四步 化學成分層次研究 在上述研究基礎上，對有效部分再分離成若干單一化學成分，對化學成分進行“四個水平”的藥理作用及作用機理分析，在化學成分層次探討其配伍規(guī)律。,第五步 綜合分析 根據(jù)以上結果，綜合分析該方產生療效的物質基礎，探討物質基礎的變化與配伍、藥理效應間的內在關系,第二部分方劑配伍規(guī)律研究實踐,葛根芩連湯配伍規(guī)律研究 （國家自然科學基金資助項目編號39970886）,選方依據(jù) 假說 研究目標 技術路線 研究結果,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,選方依據(jù),仲景名方，療效卓著 配伍具有較強的代表性 “

8、 七情”之中相須、相使配伍最為多見 含多個藥對，均為相須相使配伍，其中，黃連 黃芩、黃連 黃芩甘草配伍在傷寒論含黃 連方中分別占58.33%和25%； 甘草在各類方中使用頻率最高 現(xiàn)代相關研究充分,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,假說,“七情合和”的實質在于“化學成分合和” 性能功效相似的成分在數(shù)量上產生變化(量變)，功效上產生協(xié)同； 產生與全方功效相一致的新的有效成分(質變)； 各成分在歸經(jīng)上相互誘導，使全方作用定位、定向(歸經(jīng))上趨向一致，從而獲得對主治證的最佳綜 合治療效應。,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,研究目標,以中藥配伍理論為指導，用現(xiàn)代分析手段，觀察配伍對葛根芩連湯化學成分

9、數(shù)、量及“歸經(jīng)”的影響，綜合分析配伍化學成分變化藥理效應三者之間的聯(lián)系，闡明其配伍內涵，為更有效地指導臨床和新藥研究提供依據(jù)，為廣泛開展方劑配伍規(guī)律研究探索新途徑。,(1)葛根芩連湯正交設計組方(15種),(2)各組方煎液,(3)四類化學成分定性 定量 (量變、質變),(5)藥效學實驗,(6)藥代動力學實驗,抑菌實驗,抗病毒實驗,(4)協(xié)熱下利模型,菌痢模型,含藥血清,藥理效應觀察,組織器官,血清,(3)化學成分分析 (量變、質變),(3)化學成分分析,(7)歸經(jīng)變化研究,(8)綜合分析,新組方,(9)臨床藥 理研究,課題總結,技術路線,(1)葛根;(2)黃芩;(3)黃連;(4)甘草;(5)葛

10、根、黃芩;(6)葛根、黃連; (7)葛根、甘草;(8)黃芩、黃連;(9)黃芩、甘草;(10)黃連、甘草; (11)葛根、黃芩、黃連;(12)葛根、黃連、甘草;(13)葛根、黃芩、 甘草;(14)黃芩、黃連、甘草;(15)葛根、黃芩、黃連、甘草,(1) 對葛根芩連湯正交設計分組,按L16(215)正交表具體分為如下15種配伍組合：,(2) 葛根芩連湯及各配伍組合煎劑制備,(3) 葛根芩連湯的化學成分分析(煎液、人血清、兔血清),四種成分的含量測定 (指標成分) 在藥材中煎液中血清中的轉移率 (量變) 新的化學成分的發(fā)現(xiàn) (配伍前后指紋圖譜對比尋 找新成分)(質變) 煎液中新的化合物 (其中包括復

11、合物、鹽等) 血清中新的化合物 (次生、代謝產物如甘草次酸、 黃芩 素等),(4) 建立家兔葛根芩連湯證“協(xié)熱下利” 證及急性 菌痢病理模型,“協(xié)熱下利”證模型依據(jù)： 傷寒論,葛根芩連湯,風寒刺激 白細胞致熱源(iv) 生大黃水煎液,止瀉、退熱,泄瀉發(fā)熱,(5) 葛根芩連湯化學成分變化(化學成分合和)與 藥效的關系,家兔“協(xié)熱下利”證模型 家兔急性菌痢病理模型 體外抗菌 體外抗病毒實驗,(6) 葛根芩連湯(指標成分)人體藥代動力學研究,通過血清藥時曲線的測定，考察各種配伍對主要成分體內吸收、分布、代謝的影響,通過藥效實驗結果，反證配伍藥物進入藥效指標相關的經(jīng)絡 (肺、脾、腸)與單味藥的藥效結果

12、、歸經(jīng)比較，證實誘導歸經(jīng)的假說。 通過藥物 3H 指標成分在組織器官的分布，以直接證明配伍對誘導歸經(jīng)定向、定位的影響 通過人體藥代動力學研究、指標成分吸收、分布代謝參數(shù)，佐證誘導歸經(jīng)。,(7) 葛根芩連湯歸經(jīng)變化研究(誘導歸經(jīng)),(8) 葛根芩連湯配伍分析和規(guī)律的闡述,對正交實驗設計結果采用多元回歸綜合分析方法，確定葛根芩連湯的最佳配伍組合；通過對藥理效應與相應煎液和血清中多種化學成分變化（量變、質變及歸經(jīng)變化）的相關研究，揭示葛根芩連湯 “相須、相使”的配伍內涵，闡明“七情合和”的實質在于“化學成分合和” 。,(9) 比較優(yōu)選方與葛根芩連湯原方對“協(xié)熱下利” 證病人的療效,各30例病人，隨機

13、對照盲法觀察。,南方醫(yī)科大學中醫(yī)系藥理藥化教研室,研究結果,方法：HPLC、HPCD法 結果： 黃芩苷、小檗堿、甘草酸含量以各單味藥煎液含量最高，全方的含量分別占單煎液67%、59%、70%。 各配伍的葛根素含量變化無顯著性差異。 葛根、黃連對黃芩苷，葛根、黃芩、甘草對小檗堿 ，黃連對甘草酸的含量均有降低作用。 含黃連、黃芩的配伍煎液中產生的沉淀中含有大量 的黃芩苷。,配伍對葛根芩連湯主要成分含量影響,配伍對葛根芩連湯藥理作用影響,配伍對葛根芩連湯體外抑菌作用影響,方法：試管二倍稀釋法、平皿打孔法。 結果： 各配伍組合中，以黃連的體外抑菌活性最強，不同的菌株強度有差異，其次是黃芩，炙甘草對金黃

14、葡萄球菌與志賀氏有弱的抑菌活性，葛根對金黃色葡萄球菌有弱的抑菌活性。 在與黃連配伍中，其余三藥均能起拮抗作用。,配伍對葛根芩連湯抗腹瀉作用影響,方法：小鼠番瀉葉致瀉試驗，小鼠小腸推進試驗。 結果： 在抗腹瀉藥效中，其最佳組合為黃連炙甘草。 葛根與黃芩能拮抗黃連作用，炙甘草增強黃連作用。,配伍對葛根芩連湯解熱作用影響,方法：大鼠皮下注射埃希氏大腸桿菌懸浮液致 發(fā)熱試驗 。 結果： 黃芩有明顯的解熱作用。 黃連、炙甘草對其黃芩有明顯的拮抗作用。 葛根對黃芩有增強的作用 。,方法：家兔福氏2a志賀氏菌實驗性菌痢模型 。 結果： 黃連、黃芩均能明顯減少結腸內容物和結腸組織內細菌定量計數(shù)，葛根與甘草則作用不明顯。 炙甘草則可以明顯降低結腸炎指數(shù)，而葛根 、黃芩、黃連則作用不明顯，它們對炙甘草的作用也無明顯影響。,配伍對葛根芩連湯抗實驗性菌痢的影響,綜合分析,葛根與