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1、實(shí)驗(yàn)二總氮含量測(cè)定凱氏定氮法,一個(gè)目的:學(xué)習(xí)凱氏定氮法蛋白質(zhì)含量測(cè)定原理掌握蒸餾滴定操作技術(shù),二、原理、生物材料氮含量測(cè)定對(duì)生化研究具有一定意義,蛋白質(zhì)氮含量約為16,測(cè)定氮含量即可推測(cè)蛋白質(zhì)含量。 消化:有機(jī)物和濃硫酸供給熱量,把有機(jī)氮全部轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮硫酸銨。 為了加快反應(yīng),添加硫酸銅和硫酸鉀元素的混合物的前者為催化劑,后者能夠提高硫酸的沸點(diǎn)。 甘氨酸的消化過程為ch 2n H2 cooh 3h2so 42 co23so 24h2o0nh3n h3so4(nh4 ) 2so 4蒸餾:濃堿分解消化液中的硫酸銨,分離阿摩尼亞,然后將水蒸氣產(chǎn)生的阿摩尼亞蒸餾成一定量、一定濃度的硼酸溶液(NH4 )

2、 2 so 42 NaOH2NH 32h2ona 2so 42 NH 34h3bo3(NH4 )2b4o 75 H2O滴定:用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)酸進(jìn)行滴定,由最后使用的標(biāo)準(zhǔn)酸的摩爾數(shù)(相當(dāng)于測(cè)定對(duì)象物中的阿摩尼亞的摩爾數(shù))計(jì)算直到溶液中的原來的氫絡(luò)離子濃度恢復(fù)為止(NH4 )2b4o7h2so 44 3、試劑、1、濃硫酸2、粉末硫酸鉀元素硫酸銅混合物K2S04和CuS04.5H20以3:1的配比研磨混合3,30氫氧化納金屬釷溶液4、2硼酸溶液5、標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.0098 molL) 6。 酸性時(shí)為紫紅色,堿性時(shí)為綠色。 變色范圍狹窄敏銳。 7 .樣本小麥面粉1g、5、操作方法、1 .樣本處理后的一些固

3、態(tài)樣本:中的氮含量由該物質(zhì)(干重)中所包括的氮的g數(shù)100g表示()。 一般的樣品干燥的溫度采用105度。 因?yàn)闆]有游離的水在100以下不能干燥。 在稱量瓶中稱量一定量的細(xì)樣本(例如0.1 g左右的干燥小麥面粉),放入105的電烤箱中進(jìn)行4小時(shí)干燥。 用坩堝夾子把稱量瓶放入甩干機(jī)內(nèi),降低到室溫進(jìn)行稱量,用上述操作繼續(xù)進(jìn)行樣品的干燥。 每干燥1小時(shí),稱量2次,直到稱量值不變,即達(dá)到一定重量。 樣品是血清等液體,可以直接消化一定體積的樣品進(jìn)行測(cè)定。 2、消化、凱氏燒瓶取標(biāo)簽條。 加入各種玻璃珠在1和2號(hào)瓶中分別加入0.1g樣品、200 mg催化劑(k2s 04 cus 04.5 h2o )、5 m

4、L濃硫酸。 分別在3號(hào)瓶和4號(hào)瓶中加入相同量的催化劑和濃硫酸,作為對(duì)照測(cè)定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì)。 在各瓶口裝入漏斗,用通風(fēng)箱內(nèi)的電爐消化。 放樣品時(shí),請(qǐng)直接送到瓶底,以免沾到瓶口或瓶頸。 開始消化時(shí)控制火力,避免液體成為瓶頸。 瓶?jī)?nèi)的水蒸氣蒸發(fā)結(jié)束后,硫酸開始分解放出SO2白煙后,適當(dāng)加強(qiáng)火力,持續(xù)消化,直到消化液變成透明淡綠色。 定容:蒸發(fā)制冷后,加入約10 mL蒸餾水。 (請(qǐng)注意緩慢相加,相加后搖晃。) 然后,將瓶中的溶解物注入50或100 mL的容器中,用蒸餾將燒瓶清洗數(shù)次,將清掃液裝入容器中,用水稀釋至刻度,混合準(zhǔn)備。 蒸餾:將蒸汽發(fā)生器、蒸餾器和冷凝機(jī)一體化,以體積小、安裝方

5、便、操作簡(jiǎn)單為特征,改良了改良型籠氮訂正的結(jié)構(gòu)。 (1)水蒸氣發(fā)生器和反應(yīng)室(2)冷凝機(jī)和通氣室(3)排水柱牛鼻子:清水管系統(tǒng)、蒸餾器的清洗、冷凝水投入,首先在水蒸氣發(fā)生器中加入一定量的水(排水口高度好)。 水的自動(dòng)噴出:將蒸餾水從采樣室注入反應(yīng)室,加入口水密封,用酒精燈加熱燒水使酒精燈有會(huì)兒分離,反應(yīng)室內(nèi)的水自動(dòng)噴出到蒸汽發(fā)生器上,打開蒸汽發(fā)生器的出水口,放水。 像這樣反復(fù)進(jìn)行35次清洗。 清洗后,在冷凝管下端加入5 mL、2硼酸溶液和12滴指示劑的混合液。 加入冷凝水進(jìn)行蒸餾,如果不變色3-5min則表示蒸餾設(shè)備內(nèi)部已被漂亮地清洗。3蒸餾過程:準(zhǔn)備:取50 mL的3瓶玉米,分別加入2硼酸溶

6、液5ml和指示劑12滴,溶液呈青蓮色,用表面皿復(fù)蓋。 打開冷凝水,換成冷水。 將裝有硼酸和指示劑溶液的玉米瓶放置在冷凝機(jī)下,將冷凝機(jī)下端浸泡在液體內(nèi)。 樣品:用移液器采集消化液(空白對(duì)照液和消化液分別制作)5 mL,仔細(xì)裝入反應(yīng)室,然后用小量筒裝入30NaOH溶液5 mL,關(guān)閉自由回形針,在采樣漏斗中裝入少量的水進(jìn)行封口。 蒸餾:關(guān)閉自由回形針,打開冷凝水(注意不要過急,以免水溢出。 實(shí)驗(yàn)中,冷凝水一直打開)。 點(diǎn)燃酒精燈,開始蒸餾,觀察錐形瓶中的溶液從青蓮色變?yōu)榫G色時(shí)(約23分鐘),開始更正時(shí),蒸餾3分鐘,取下錐形瓶,冷凝機(jī)的下端離開液面約1cm,云同步,用少量的蒸餾水洗凈蒸發(fā)制冷管口的外側(cè)

7、,繼續(xù)蒸餾1分鐘,取下錐形瓶,表方法如前所述。 像這樣三十五次。 最后將自由回形針打開到云同步,更換蒸汽發(fā)生器內(nèi)的所有廢水,繼續(xù)進(jìn)行下一次蒸餾。 樣品和空白對(duì)照消化液一起蒸餾,對(duì)云同步進(jìn)行滴定。 4 .滴定,全部蒸餾結(jié)束后,用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液對(duì)收集到的各個(gè)玉米瓶中的阿摩尼亞量進(jìn)行滴定,硼酸指示劑溶液從綠色變成青蓮色作為滴定終點(diǎn)。 注意:使用前請(qǐng)檢查酸性滴下管有無泄漏如有泄漏,涂抹白凡士林滴定時(shí)邊滴下邊振動(dòng)滴定不要過多! 及時(shí)的記錄讀取要求:空白消化液1次、樣品消化液2次、5 .修正計(jì)算、總氮量(%)=C(V1-V2)0.014 100消化液量(ml) /滴定消耗用液量(ml ) w c是標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液V1是為了滴定樣品消化液而除去的鹽酸溶液的平均mL數(shù)V2是為了滴定空白對(duì)照消化液而除去的鹽酸溶液的平均mL數(shù)w是樣品重量(1g )、消化液量500ml、滴定消耗液量5ml。 14是氮的相對(duì)原子質(zhì)量。 樣品蛋白質(zhì)含量()=總氮量6.

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