實驗二 微量凱氏定氮法測定總氮量.ppt

1、實驗二總氮含量測定凱氏定氮法，一個目的：學(xué)習(xí)凱氏定氮法蛋白質(zhì)含量測定原理掌握蒸餾滴定操作技術(shù)，二、原理、生物材料氮含量測定對生化研究具有一定意義，蛋白質(zhì)氮含量約為16，測定氮含量即可推測蛋白質(zhì)含量。 消化：有機(jī)物和濃硫酸供給熱量，把有機(jī)氮全部轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮硫酸銨。 為了加快反應(yīng)，添加硫酸銅和硫酸鉀元素的混合物的前者為催化劑，后者能夠提高硫酸的沸點。 甘氨酸的消化過程為ch 2n H2 cooh 3h2so 42 co23so 24h2o0nh3n h3so4(nh4 ) 2so 4蒸餾：濃堿分解消化液中的硫酸銨，分離阿摩尼亞，然后將水蒸氣產(chǎn)生的阿摩尼亞蒸餾成一定量、一定濃度的硼酸溶液(NH4 )

2、 2 so 42 NaOH2NH 32h2ona 2so 42 NH 34h3bo3(NH4 )2b4o 75 H2O滴定：用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)酸進(jìn)行滴定，由最后使用的標(biāo)準(zhǔn)酸的摩爾數(shù)(相當(dāng)于測定對象物中的阿摩尼亞的摩爾數(shù))計算直到溶液中的原來的氫絡(luò)離子濃度恢復(fù)為止(NH4 )2b4o7h2so 44 3、試劑、1、濃硫酸2、粉末硫酸鉀元素硫酸銅混合物K2S04和CuS04.5H20以3:1的配比研磨混合3，30氫氧化納金屬釷溶液4、2硼酸溶液5、標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.0098 molL) 6。 酸性時為紫紅色，堿性時為綠色。 變色范圍狹窄敏銳。 7 .樣本小麥面粉1g、5、操作方法、1 .樣本處理后的一些固

3、態(tài)樣本：中的氮含量由該物質(zhì)(干重)中所包括的氮的g數(shù)100g表示()。 一般的樣品干燥的溫度采用105度。 因為沒有游離的水在100以下不能干燥。 在稱量瓶中稱量一定量的細(xì)樣本(例如0.1 g左右的干燥小麥面粉)，放入105的電烤箱中進(jìn)行4小時干燥。 用坩堝夾子把稱量瓶放入甩干機(jī)內(nèi)，降低到室溫進(jìn)行稱量，用上述操作繼續(xù)進(jìn)行樣品的干燥。 每干燥1小時，稱量2次，直到稱量值不變，即達(dá)到一定重量。 樣品是血清等液體，可以直接消化一定體積的樣品進(jìn)行測定。 2、消化、凱氏燒瓶取標(biāo)簽條。 加入各種玻璃珠在1和2號瓶中分別加入0.1g樣品、200 mg催化劑(k2s 04 cus 04.5 h2o )、5 m

4、L濃硫酸。 分別在3號瓶和4號瓶中加入相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照測定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì)。 在各瓶口裝入漏斗，用通風(fēng)箱內(nèi)的電爐消化。 放樣品時，請直接送到瓶底，以免沾到瓶口或瓶頸。 開始消化時控制火力，避免液體成為瓶頸。 瓶內(nèi)的水蒸氣蒸發(fā)結(jié)束后，硫酸開始分解放出SO2白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，持續(xù)消化，直到消化液變成透明淡綠色。 定容：蒸發(fā)制冷后，加入約10 mL蒸餾水。 (請注意緩慢相加，相加后搖晃。) 然后，將瓶中的溶解物注入50或100 mL的容器中，用蒸餾將燒瓶清洗數(shù)次，將清掃液裝入容器中，用水稀釋至刻度，混合準(zhǔn)備。 蒸餾：將蒸汽發(fā)生器、蒸餾器和冷凝機(jī)一體化，以體積小、安裝方

5、便、操作簡單為特征，改良了改良型籠氮訂正的結(jié)構(gòu)。 (1)水蒸氣發(fā)生器和反應(yīng)室(2)冷凝機(jī)和通氣室(3)排水柱牛鼻子：清水管系統(tǒng)、蒸餾器的清洗、冷凝水投入，首先在水蒸氣發(fā)生器中加入一定量的水(排水口高度好)。 水的自動噴出：將蒸餾水從采樣室注入反應(yīng)室，加入口水密封，用酒精燈加熱燒水使酒精燈有會兒分離，反應(yīng)室內(nèi)的水自動噴出到蒸汽發(fā)生器上，打開蒸汽發(fā)生器的出水口，放水。 像這樣反復(fù)進(jìn)行35次清洗。 清洗后，在冷凝管下端加入5 mL、2硼酸溶液和12滴指示劑的混合液。 加入冷凝水進(jìn)行蒸餾，如果不變色3-5min則表示蒸餾設(shè)備內(nèi)部已被漂亮地清洗。3蒸餾過程：準(zhǔn)備：取50 mL的3瓶玉米，分別加入2硼酸溶

6、液5ml和指示劑12滴，溶液呈青蓮色，用表面皿復(fù)蓋。 打開冷凝水，換成冷水。 將裝有硼酸和指示劑溶液的玉米瓶放置在冷凝機(jī)下，將冷凝機(jī)下端浸泡在液體內(nèi)。 樣品：用移液器采集消化液(空白對照液和消化液分別制作)5 mL，仔細(xì)裝入反應(yīng)室，然后用小量筒裝入30NaOH溶液5 mL，關(guān)閉自由回形針，在采樣漏斗中裝入少量的水進(jìn)行封口。 蒸餾：關(guān)閉自由回形針，打開冷凝水(注意不要過急，以免水溢出。 實驗中，冷凝水一直打開)。 點燃酒精燈，開始蒸餾，觀察錐形瓶中的溶液從青蓮色變?yōu)榫G色時(約23分鐘)，開始更正時，蒸餾3分鐘，取下錐形瓶，冷凝機(jī)的下端離開液面約1cm，云同步，用少量的蒸餾水洗凈蒸發(fā)制冷管口的外側(cè)

7、，繼續(xù)蒸餾1分鐘，取下錐形瓶，表方法如前所述。 像這樣三十五次。 最后將自由回形針打開到云同步，更換蒸汽發(fā)生器內(nèi)的所有廢水，繼續(xù)進(jìn)行下一次蒸餾。 樣品和空白對照消化液一起蒸餾，對云同步進(jìn)行滴定。 4 .滴定，全部蒸餾結(jié)束后，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液對收集到的各個玉米瓶中的阿摩尼亞量進(jìn)行滴定，硼酸指示劑溶液從綠色變成青蓮色作為滴定終點。 注意：使用前請檢查酸性滴下管有無泄漏如有泄漏，涂抹白凡士林滴定時邊滴下邊振動滴定不要過多！ 及時的記錄讀取要求：空白消化液1次、樣品消化液2次、5 .修正計算、總氮量(%)=C(V1-V2)0.014 100消化液量(ml) /滴定消耗用液量(ml ) w c是標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液V1是為了滴定樣品消化液而除去的鹽酸溶液的平均mL數(shù)V2是為了滴定空白對照消化液而除去的鹽酸溶液的平均mL數(shù)w是樣品重量(1g )、消化液量500ml、滴定消耗液量5ml。 14是氮的相對原子質(zhì)量。 樣品蛋白質(zhì)含量()=總氮量6.