藥品檢驗(yàn)--防腐劑.ppt

1、防腐劑測(cè)定方法的研究,青島市藥品檢驗(yàn)所 二00八年10月,課題來源 根據(jù)國家藥典綜發(fā)200855號(hào)文及第九屆藥典 委員會(huì)微生物專業(yè)委員會(huì)第一次會(huì)議要求，由青島 所牽頭擬定了“防腐劑效力測(cè)定方法的研究”課題實(shí) 驗(yàn)方案，參加單位有上海市食品藥品檢驗(yàn)所、天津 市藥品檢驗(yàn)所、深圳市藥品檢驗(yàn)所，自2008年開展了工作至2008年10月完成了課題全部工作，課題對(duì)8個(gè)劑型27批供試品，進(jìn)行了生長環(huán)境（培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間）等試驗(yàn)通過試驗(yàn)確立了正確的、科學(xué)的、簡便易行的檢驗(yàn)方法。 1、供試品分類：根據(jù)藥品給藥途徑及用途分類。 2、試驗(yàn)使用材料：培養(yǎng)基、陽性菌株、稀釋液。 3、檢驗(yàn)方法：檢驗(yàn)方法包括；方法

2、、培養(yǎng)環(huán)境、檢出率、鑒別方法（典型性）等。,一、研究目的,如果藥物本身不含有充分的抗菌力，在正常儲(chǔ)存和使用過程中可能發(fā)生細(xì)菌污染和大量繁殖；對(duì)患者引起污染或造成藥物變質(zhì)。在生產(chǎn)過程中添加適合的防腐劑以保證藥品的質(zhì)量。 所有防腐劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質(zhì)量和用藥安全，添加防腐劑的量應(yīng)根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量。 防腐劑效力的測(cè)定可為生產(chǎn)過程中添加防腐劑提供指導(dǎo)，隨著科學(xué)發(fā)展，新型防腐劑大量出現(xiàn)，防腐劑效力的測(cè)定更為重要；使生產(chǎn)者正確掌握產(chǎn)品中添加防腐劑的效力，有助于選擇合適的防腐劑，也可對(duì)防腐劑使用的正確性給予評(píng)價(jià)

3、。,二、目前國內(nèi)外防腐劑效力測(cè)定的現(xiàn)狀,目前歐洲、美國、英國等國藥典均已在附錄中收載了防腐劑效力測(cè)定，雖然方法不同，但均采用了生物測(cè)定方法。我國藥典防腐劑效力測(cè)定目前還是空白，有必要經(jīng)過研究，制訂出科學(xué)、簡便、易行的測(cè)試方法收載于藥典附錄中。防腐劑效力的測(cè)定，不但為生產(chǎn)者提供正確的使用防腐劑的指導(dǎo)，而且可對(duì)使用防腐劑的正確性給予評(píng)價(jià)。,三、研究目標(biāo),確立正確的、科學(xué)的、簡便易行的檢驗(yàn)方法。 1、供試品分類：根據(jù)藥品給藥途徑及用途分類。 2、試驗(yàn)使用材料：培養(yǎng)基、陽性菌株、稀釋液。 3、檢驗(yàn)方法：檢驗(yàn)方法包括；方法、培養(yǎng)環(huán)境、檢出率、鑒別方法（典型性）等。,防腐劑效力測(cè)定試驗(yàn)方法的研究總結(jié)報(bào)告,

4、按課題試驗(yàn)方案要求，根據(jù)藥品的劑型和給藥途徑對(duì)8個(gè)劑型27批供試品；新型防腐劑（作為對(duì)照品）、針劑（不含防腐劑）、口服液、混懸劑、陰道用藥、滴耳劑、滴眼劑、 抗酸劑，在供試品中接種定量活菌，采用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，在指定的時(shí)間間隔下，測(cè)定活菌數(shù)，根據(jù)測(cè)得的活菌對(duì)數(shù)值變化，判斷該產(chǎn)品添加的防腐劑的有效性。,1、試驗(yàn)的材料供試品：對(duì)照 波斯特新型防腐劑其有效成分是聚氧烯烴基胍，取本品0.51ml加入1001ml蒸餾水中，制成每1ml含50PPM的溶液，作為試驗(yàn)對(duì)照品。陰性對(duì)照（不含防腐劑）氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液、顛茄口服液供試品（含防腐劑） 抗病毒口服液、 呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴

5、眼液、鯨脂滴耳液、潔而陰洗液,培養(yǎng)基 大豆酪蛋白肉湯瓊脂培養(yǎng)基 大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 稀釋液 PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液,菌種 對(duì)試驗(yàn)用菌種的要求同中國藥典2005版附 錄XJ細(xì)菌，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)；所用菌株傳代次數(shù)均為第3代。銅綠假單胞菌 CMCC(B)10104金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26003白色念球菌 CMCC(F)98001黑曲霉 CMCC(F)98003大腸埃希菌 CMCC(B)44102,菌液制備 同中國藥典2005版附錄XJ細(xì)菌，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)；銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌、白色念珠菌制成每1

6、ml含菌數(shù)為108cfu的菌懸液，黑曲霉制成每1ml含孢子數(shù)108cfu的孢子懸液。 菌液稀釋先用比濁管比濁，再用平板法確定含菌濃度cfu/ml。,試驗(yàn)方法,供試液的制備：在無菌條件下進(jìn)行，取供試品20ml(g)5份，分別加入5個(gè)帶蓋的試管中，抗酸劑加入上述制備的5種菌液0.1 ml（約含103104cfu），其余分別加入菌液0.1 ml（約含105106cfu ）搖勻。,供試品的分類 為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷,根據(jù)供試品的給藥途徑和用途,將被測(cè)試的供試品分為四類.見表1,放置：將上述接種后供試液，搖勻，立即取樣檢測(cè)，剩余供試液，置室內(nèi)2025，陰涼處保存。 時(shí)間：分別在0、6h、24h、72 h、

7、7d、14d、21d、28d按下述方法測(cè)定存活的細(xì)菌數(shù)。供試品中加入試驗(yàn)菌立即進(jìn)行試驗(yàn)為0時(shí)。,方法： 采用經(jīng)驗(yàn)證的試驗(yàn)方法，驗(yàn)證方法同中國藥典2005版附錄XI J細(xì)菌，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證方法。結(jié)果見表1 銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌接種大豆-酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，于3035培養(yǎng)1824小時(shí)、白色念球菌接種沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，于2025培養(yǎng)2448小時(shí)、黑曲霉接種改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平板上，于2025培養(yǎng)57天，取出計(jì)數(shù)。 分別在0、6h、24h、72 h 7d、14d、21d、28d按下述方法測(cè)定活菌數(shù)。,氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液 、顛茄口服液采用常規(guī)法進(jìn)行檢驗(yàn)；在規(guī)定時(shí)間取

8、制備（加入菌）的供試液1ml，加入培養(yǎng)基，檢驗(yàn)方法同中國藥典2005版附錄 XI J微生物限度檢查；細(xì)菌，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)。結(jié)果見表2,抗病毒口服液 、詰而陰洗液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液 、阿昔洛韋滴眼液、用采用培養(yǎng)基稀釋法，進(jìn)行檢驗(yàn)；在規(guī)定時(shí)間取制備（加入菌）的供試液0.2ml，加入培養(yǎng)基，檢驗(yàn)方法同中國藥典2005版附錄XI J微生物限度檢查；細(xì)菌，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)。結(jié)果見表3,波斯特防腐劑、鯨脂滴耳液采用濾膜過濾法，進(jìn)行檢驗(yàn)；在規(guī)定時(shí)間取制備（加入菌）的供試液1ml，加入濾器中濾過，用PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液少量多次沖洗，檢驗(yàn)方法同中國藥典2005版附錄XI J微生物限度檢查；細(xì)菌

9、，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)。結(jié)果見表3,計(jì)數(shù)： 按上述方法接入試驗(yàn)菌后，搖勻，立即檢測(cè)，此時(shí)細(xì)菌生長數(shù)量為0時(shí)結(jié)果，以后間隔6h，24h，、72h、7d，14d，21d、28d，測(cè)定每個(gè)供試液每1ml(g)活菌數(shù)。見表2、3 計(jì)數(shù)方法同中國藥典2005版附錄XI J細(xì)菌，霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)。,對(duì)數(shù)值： 對(duì)測(cè)得的細(xì)菌數(shù)計(jì)算其對(duì)數(shù)值并計(jì)算出每個(gè)時(shí)間間隔測(cè)得的細(xì)菌數(shù)與0時(shí)測(cè)得的細(xì)菌數(shù)（初試值）的降低值。見表4,結(jié)果判斷： 根據(jù)接種后供試液在指定的時(shí)間間隔下測(cè)得的對(duì)數(shù)值變化，參照表5防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷。,總 結(jié),按課題試驗(yàn)方案對(duì)以上8個(gè)劑型、九個(gè)供試品在指定的時(shí)間間隔下，測(cè)得的活菌數(shù)，計(jì)算活菌對(duì)數(shù)值

10、變化，根據(jù)表5判斷供試品防腐劑的有效性。,一、試驗(yàn)方法的確立：,對(duì)試驗(yàn)用供試品采用的方法進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果；氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液 、顛茄口服液采用常規(guī)法進(jìn)行檢驗(yàn)，抗病毒口服液 、詰而陰洗液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液 、阿昔洛韋滴眼液、用采用了培養(yǎng)基稀釋法進(jìn)行檢驗(yàn)，波斯特、鯨脂滴耳液采用濾膜過濾法，進(jìn)行檢驗(yàn)，驗(yàn)證試驗(yàn)5株菌回收率均在80%以上，符合中國藥典2005版規(guī)定。,二、防腐劑效力的判斷：,根據(jù)接種后供試液在指定的時(shí)間間隔下測(cè)得的細(xì)菌數(shù)計(jì)算其平均對(duì)數(shù)值與0時(shí)測(cè)得的細(xì)菌數(shù)（初試值）的降低值見表4,氯化鈉注射液、 碳酸氫鈉注射液不含防腐劑加入菌從6h就開始無限增加，不具防腐力

11、，抗病毒口服液從初始到24 h對(duì)數(shù)值無變化，72h后明顯降低，具一定的防腐力，呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、鯨脂滴耳液、潔爾陰洗液從初始值到7天后計(jì)算值大于于1.0log降低量，從初始值到14天后計(jì)算值大于3.0log,，具較強(qiáng)的防腐效力，抗病毒口服液和呋麻滴鼻液對(duì)真菌防腐效力較差7天.0log降低量大于3.0log波斯特是特效防腐劑具極強(qiáng)的防腐效力，72h防腐效力達(dá)100%。,表1方法驗(yàn)證,注：平均加入菌數(shù)：兩次測(cè)定菌數(shù)的平均值 平均檢出菌數(shù)：兩次測(cè)定菌數(shù)的平均值,表2 供試品（含防腐劑）放置不同時(shí)間細(xì)菌計(jì)數(shù),表3 供試品（不含防腐劑）放置不同時(shí)間細(xì)菌計(jì)數(shù),表4 供試品（含防腐劑

12、）放置不同時(shí)間細(xì)菌對(duì)數(shù)值,表5 供試品（含防腐劑）放置不同時(shí)間細(xì)菌對(duì)數(shù)值,表6 平均對(duì)數(shù)降低值,注: 1. 平均對(duì)數(shù)值：兩次不同間隔時(shí)間測(cè)得的存活細(xì)菌數(shù)的對(duì)數(shù)平均值. 2. 初試值：0時(shí)測(cè)得的存活細(xì)菌數(shù)為初試值. 3. 降低值：每個(gè)間隔時(shí)間測(cè)得的存活細(xì)菌數(shù)與初試值減少的差為降低值. 4. 0未檢出存活菌. 5. 測(cè)得的存活細(xì)菌數(shù)對(duì)數(shù)值超過0時(shí)測(cè)得的存活細(xì)菌數(shù)對(duì)數(shù)值.,表7防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn),注：初始值是指試驗(yàn)0時(shí)細(xì)菌，真菌生長數(shù).,表7防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn) 1類 供 試 品 細(xì) 菌從初始值到7天后計(jì)算值不少于1.0log降低量，從初始值到14天后計(jì)算值不少于3.0log,從第14天到第28天不增長.真 菌從初始值到7、14、28天都不增