藥品檢驗--防腐劑.ppt

1、防腐劑測定方法的研究,青島市藥品檢驗所 二00八年10月,課題來源 根據(jù)國家藥典綜發(fā)200855號文及第九屆藥典 委員會微生物專業(yè)委員會第一次會議要求，由青島 所牽頭擬定了“防腐劑效力測定方法的研究”課題實 驗方案，參加單位有上海市食品藥品檢驗所、天津 市藥品檢驗所、深圳市藥品檢驗所，自2008年開展了工作至2008年10月完成了課題全部工作，課題對8個劑型27批供試品，進行了生長環(huán)境（培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間）等試驗通過試驗確立了正確的、科學的、簡便易行的檢驗方法。 1、供試品分類：根據(jù)藥品給藥途徑及用途分類。 2、試驗使用材料：培養(yǎng)基、陽性菌株、稀釋液。 3、檢驗方法：檢驗方法包括；方法

2、、培養(yǎng)環(huán)境、檢出率、鑒別方法（典型性）等。,一、研究目的,如果藥物本身不含有充分的抗菌力，在正常儲存和使用過程中可能發(fā)生細菌污染和大量繁殖；對患者引起污染或造成藥物變質。在生產過程中添加適合的防腐劑以保證藥品的質量。 所有防腐劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質量和用藥安全，添加防腐劑的量應根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量。 防腐劑效力的測定可為生產過程中添加防腐劑提供指導，隨著科學發(fā)展，新型防腐劑大量出現(xiàn)，防腐劑效力的測定更為重要；使生產者正確掌握產品中添加防腐劑的效力，有助于選擇合適的防腐劑，也可對防腐劑使用的正確性給予評價

3、。,二、目前國內外防腐劑效力測定的現(xiàn)狀,目前歐洲、美國、英國等國藥典均已在附錄中收載了防腐劑效力測定，雖然方法不同，但均采用了生物測定方法。我國藥典防腐劑效力測定目前還是空白，有必要經過研究，制訂出科學、簡便、易行的測試方法收載于藥典附錄中。防腐劑效力的測定，不但為生產者提供正確的使用防腐劑的指導，而且可對使用防腐劑的正確性給予評價。,三、研究目標,確立正確的、科學的、簡便易行的檢驗方法。 1、供試品分類：根據(jù)藥品給藥途徑及用途分類。 2、試驗使用材料：培養(yǎng)基、陽性菌株、稀釋液。 3、檢驗方法：檢驗方法包括；方法、培養(yǎng)環(huán)境、檢出率、鑒別方法（典型性）等。,防腐劑效力測定試驗方法的研究總結報告,

4、按課題試驗方案要求，根據(jù)藥品的劑型和給藥途徑對8個劑型27批供試品；新型防腐劑（作為對照品）、針劑（不含防腐劑）、口服液、混懸劑、陰道用藥、滴耳劑、滴眼劑、 抗酸劑，在供試品中接種定量活菌，采用經驗證的檢驗方法，在指定的時間間隔下，測定活菌數(shù)，根據(jù)測得的活菌對數(shù)值變化，判斷該產品添加的防腐劑的有效性。,1、試驗的材料供試品：對照 波斯特新型防腐劑其有效成分是聚氧烯烴基胍，取本品0.51ml加入1001ml蒸餾水中，制成每1ml含50PPM的溶液，作為試驗對照品。陰性對照（不含防腐劑）氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液、顛茄口服液供試品（含防腐劑） 抗病毒口服液、 呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴

5、眼液、鯨脂滴耳液、潔而陰洗液,培養(yǎng)基 大豆酪蛋白肉湯瓊脂培養(yǎng)基 大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 稀釋液 PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液,菌種 對試驗用菌種的要求同中國藥典2005版附 錄XJ細菌，霉菌及酵母菌計數(shù)；所用菌株傳代次數(shù)均為第3代。銅綠假單胞菌 CMCC(B)10104金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26003白色念球菌 CMCC(F)98001黑曲霉 CMCC(F)98003大腸埃希菌 CMCC(B)44102,菌液制備 同中國藥典2005版附錄XJ細菌，霉菌及酵母菌計數(shù)；銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌、白色念珠菌制成每1

6、ml含菌數(shù)為108cfu的菌懸液，黑曲霉制成每1ml含孢子數(shù)108cfu的孢子懸液。 菌液稀釋先用比濁管比濁，再用平板法確定含菌濃度cfu/ml。,試驗方法,供試液的制備：在無菌條件下進行，取供試品20ml(g)5份，分別加入5個帶蓋的試管中，抗酸劑加入上述制備的5種菌液0.1 ml（約含103104cfu），其余分別加入菌液0.1 ml（約含105106cfu ）搖勻。,供試品的分類 為了實驗結果的判斷,根據(jù)供試品的給藥途徑和用途,將被測試的供試品分為四類.見表1,放置：將上述接種后供試液，搖勻，立即取樣檢測，剩余供試液，置室內2025，陰涼處保存。 時間：分別在0、6h、24h、72 h、

7、7d、14d、21d、28d按下述方法測定存活的細菌數(shù)。供試品中加入試驗菌立即進行試驗為0時。,方法： 采用經驗證的試驗方法，驗證方法同中國藥典2005版附錄XI J細菌，霉菌及酵母菌計數(shù)驗證方法。結果見表1 銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌接種大豆-酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，于3035培養(yǎng)1824小時、白色念球菌接種沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，于2025培養(yǎng)2448小時、黑曲霉接種改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平板上，于2025培養(yǎng)57天，取出計數(shù)。 分別在0、6h、24h、72 h 7d、14d、21d、28d按下述方法測定活菌數(shù)。,氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液 、顛茄口服液采用常規(guī)法進行檢驗；在規(guī)定時間取

8、制備（加入菌）的供試液1ml，加入培養(yǎng)基，檢驗方法同中國藥典2005版附錄 XI J微生物限度檢查；細菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。結果見表2,抗病毒口服液 、詰而陰洗液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液 、阿昔洛韋滴眼液、用采用培養(yǎng)基稀釋法，進行檢驗；在規(guī)定時間取制備（加入菌）的供試液0.2ml，加入培養(yǎng)基，檢驗方法同中國藥典2005版附錄XI J微生物限度檢查；細菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。結果見表3,波斯特防腐劑、鯨脂滴耳液采用濾膜過濾法，進行檢驗；在規(guī)定時間取制備（加入菌）的供試液1ml，加入濾器中濾過，用PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液少量多次沖洗，檢驗方法同中國藥典2005版附錄XI J微生物限度檢查；細菌

9、，霉菌及酵母菌計數(shù)。結果見表3,計數(shù)： 按上述方法接入試驗菌后，搖勻，立即檢測，此時細菌生長數(shù)量為0時結果，以后間隔6h，24h，、72h、7d，14d，21d、28d，測定每個供試液每1ml(g)活菌數(shù)。見表2、3 計數(shù)方法同中國藥典2005版附錄XI J細菌，霉菌及酵母菌計數(shù)。,對數(shù)值： 對測得的細菌數(shù)計算其對數(shù)值并計算出每個時間間隔測得的細菌數(shù)與0時測得的細菌數(shù)（初試值）的降低值。見表4,結果判斷： 根據(jù)接種后供試液在指定的時間間隔下測得的對數(shù)值變化，參照表5防腐劑抗菌效力標準進行結果判斷。,總 結,按課題試驗方案對以上8個劑型、九個供試品在指定的時間間隔下，測得的活菌數(shù)，計算活菌對數(shù)值

10、變化，根據(jù)表5判斷供試品防腐劑的有效性。,一、試驗方法的確立：,對試驗用供試品采用的方法進行了驗證試驗，根據(jù)試驗結果；氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液 、顛茄口服液采用常規(guī)法進行檢驗，抗病毒口服液 、詰而陰洗液、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液 、阿昔洛韋滴眼液、用采用了培養(yǎng)基稀釋法進行檢驗，波斯特、鯨脂滴耳液采用濾膜過濾法，進行檢驗，驗證試驗5株菌回收率均在80%以上，符合中國藥典2005版規(guī)定。,二、防腐劑效力的判斷：,根據(jù)接種后供試液在指定的時間間隔下測得的細菌數(shù)計算其平均對數(shù)值與0時測得的細菌數(shù)（初試值）的降低值見表4,氯化鈉注射液、 碳酸氫鈉注射液不含防腐劑加入菌從6h就開始無限增加，不具防腐力

11、，抗病毒口服液從初始到24 h對數(shù)值無變化，72h后明顯降低，具一定的防腐力，呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、鯨脂滴耳液、潔爾陰洗液從初始值到7天后計算值大于于1.0log降低量，從初始值到14天后計算值大于3.0log,，具較強的防腐效力，抗病毒口服液和呋麻滴鼻液對真菌防腐效力較差7天.0log降低量大于3.0log波斯特是特效防腐劑具極強的防腐效力，72h防腐效力達100%。,表1方法驗證,注：平均加入菌數(shù)：兩次測定菌數(shù)的平均值 平均檢出菌數(shù)：兩次測定菌數(shù)的平均值,表2 供試品（含防腐劑）放置不同時間細菌計數(shù),表3 供試品（不含防腐劑）放置不同時間細菌計數(shù),表4 供試品（含防腐劑

12、）放置不同時間細菌對數(shù)值,表5 供試品（含防腐劑）放置不同時間細菌對數(shù)值,表6 平均對數(shù)降低值,注: 1. 平均對數(shù)值：兩次不同間隔時間測得的存活細菌數(shù)的對數(shù)平均值. 2. 初試值：0時測得的存活細菌數(shù)為初試值. 3. 降低值：每個間隔時間測得的存活細菌數(shù)與初試值減少的差為降低值. 4. 0未檢出存活菌. 5. 測得的存活細菌數(shù)對數(shù)值超過0時測得的存活細菌數(shù)對數(shù)值.,表7防腐劑抗菌效力標準,注：初始值是指試驗0時細菌，真菌生長數(shù).,表7防腐劑抗菌效力標準 1類 供 試 品 細 菌從初始值到7天后計算值不少于1.0log降低量，從初始值到14天后計算值不少于3.0log,從第14天到第28天不增長.真 菌從初始值到7、14、28天都不增