實(shí)驗(yàn)5 葉綠素a與葉綠素b含量的測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)六 葉綠素含量的測(cè)定,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、熟悉在未經(jīng)分離的葉綠體色素溶液中測(cè)定葉綠素a、b和類胡蘿卜素的方法及計(jì)算； 2、測(cè)定葉綠素含量a與葉綠素b含量的意義。,二、實(shí)驗(yàn)原理,葉綠素提取液中同時(shí)含有葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素，三者的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離他們的情況下同時(shí)測(cè)定葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素的濃度，可分別測(cè)定在663nm、645nm、470 nm （分別是葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素在紅光區(qū)的吸收峰）的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計(jì)算出提取液中葉綠素a、葉綠素b、和類胡蘿卜素的濃度。,Ca=12.21A663-2.81A645（1

2、） Cb=20.13A645-5.03A663（2） CT=Ca+Cb=8.05A663+20.29A645 （3） Cx.c=(1000D470-3.27Ca-104Cb)/229 （4） Ca葉綠素a的濃度（單位為mg/L） Cb葉綠素b濃度（單位為mg/L） CT葉綠素的總濃度（單位為mg/L） Cx.c類胡蘿卜素濃度（單位為mg/L） 82.04和9.27葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù) 16.75和45.60葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù),三、實(shí)驗(yàn)器料,1、材料： 菠菜或其它綠色植物葉片 2、試劑： 80%丙酮或96%乙醇；石英砂；CaCO3； 3、儀器：分

3、光光度計(jì)（分光光度計(jì)的使用）、高速離心機(jī),四、實(shí)驗(yàn)步驟,1、提取葉綠素 選取有代表性的植物葉片，稱取0.2g剪碎后置 于研缽中，加入5ml 80%丙酮，少許CaCO3和石英 砂。充分研磨（組織變白），再加10ml80%丙 酮，靜止3-5分鐘，沖洗研缽后轉(zhuǎn)至離心管，定 容至15ml,3000轉(zhuǎn)、15分鐘，取上清液用80%丙酮 定容至25ml。,測(cè)定OD值： 取上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙酮 作空白對(duì)照，用分光光度計(jì)分別測(cè)定葉綠 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸光度。 3.計(jì)算： 把測(cè)出的吸光值帶入(1)(2)(3)(4)式計(jì)算葉 綠素a、b、a+b和類胡蘿卜素的濃度。 根據(jù)下式求出植物組織中葉綠素的含量： 葉綠素的含量（mg/g)=cvn/m C葉綠素的濃度（mg/L)；v提取液體積(ml)； n稀釋倍數(shù)；m