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1、實(shí)驗(yàn)六 葉綠素含量的測(cè)定,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、熟悉在未經(jīng)分離的葉綠體色素溶液中測(cè)定葉綠素a、b和類胡蘿卜素的方法及計(jì)算; 2、測(cè)定葉綠素含量a與葉綠素b含量的意義。,二、實(shí)驗(yàn)原理,葉綠素提取液中同時(shí)含有葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素,三者的吸收光譜雖有不同,但又存在著明顯的重疊,在不分離他們的情況下同時(shí)測(cè)定葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素的濃度,可分別測(cè)定在663nm、645nm、470 nm (分別是葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素在紅光區(qū)的吸收峰)的光吸收,然后根據(jù)Lambert-Beer定律,計(jì)算出提取液中葉綠素a、葉綠素b、和類胡蘿卜素的濃度。,Ca=12.21A663-2.81A645(1
2、) Cb=20.13A645-5.03A663(2) CT=Ca+Cb=8.05A663+20.29A645 (3) Cx.c=(1000D470-3.27Ca-104Cb)/229 (4) Ca葉綠素a的濃度(單位為mg/L) Cb葉綠素b濃度(單位為mg/L) CT葉綠素的總濃度(單位為mg/L) Cx.c類胡蘿卜素濃度(單位為mg/L) 82.04和9.27葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù) 16.75和45.60葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù),三、實(shí)驗(yàn)器料,1、材料: 菠菜或其它綠色植物葉片 2、試劑: 80%丙酮或96%乙醇;石英砂;CaCO3; 3、儀器:分
3、光光度計(jì)(分光光度計(jì)的使用)、高速離心機(jī),四、實(shí)驗(yàn)步驟,1、提取葉綠素 選取有代表性的植物葉片,稱取0.2g剪碎后置 于研缽中,加入5ml 80%丙酮,少許CaCO3和石英 砂。充分研磨(組織變白),再加10ml80%丙 酮,靜止3-5分鐘,沖洗研缽后轉(zhuǎn)至離心管,定 容至15ml,3000轉(zhuǎn)、15分鐘,取上清液用80%丙酮 定容至25ml。,測(cè)定OD值: 取上清液1ml,加80%丙酮4ml, 以80%丙酮 作空白對(duì)照,用分光光度計(jì)分別測(cè)定葉綠 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸光度。 3.計(jì)算: 把測(cè)出的吸光值帶入(1)(2)(3)(4)式計(jì)算葉 綠素a、b、a+b和類胡蘿卜素的濃度。 根據(jù)下式求出植物組織中葉綠素的含量: 葉綠素的含量(mg/g)=cvn/m C葉綠素的濃度(mg/L);v提取液體積(ml); n稀釋倍數(shù);m
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