GB 26401-2011 食品安全國家標準 食品添加劑 花生四烯酸油脂（發(fā)酵法）

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GBGBGBGB26401-2011

中華人民共和國衛(wèi)生部中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布

2011-03-15發(fā)布2011-05-15實施

食品安全國家標準

食品添加劑花生四烯酸油脂（發(fā)酵法）

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1

食品安全國家標準

食品添加劑花生四烯酸油脂（發(fā)酵法）

1范圍

本標準適用于利用高山被孢霉（Mortierllaalpina）菌種，經(jīng)生物發(fā)酵制得的花生四烯酸（ARA)

油脂。

2結構式和相對分子質量

2.1結構式

2.2相對分子質量

304.5（按2007年國際相對原子質量）

3技術要求

3.1感官要求：應符合表1的規(guī)定。

表1感官要求

項目要求檢驗方法

色澤淺黃色取試樣10mL，置于試管中，于自然光線下采用目測的

方法觀察其色澤及外觀形態(tài)，采用鼻嗅的方法檢查氣

味。

氣味具有本產(chǎn)品特有的氣味

組織狀態(tài)油狀液體

3.2理化指標：應符合表2的規(guī)定。

表2理化指標

4其他要求

項目指標檢驗方法

含量(以C20H32O2甘油三酯計)，w/%≥38.0附錄A中A.3

不皂化物，w/%≤4.0GB/T5535.1乙醚提取法

水分，w/%≤0.1GB5009.3減壓干燥法

不溶性雜質，w/%≤0.2GB/T15688

溶劑殘留/（mg/Kg)≤1.0GB/T5009.37

酸價（以KOH計）/（mg/g）≤1.0GB/T5009.37

過氧化值/（meq/kg)≤5.0GB/T5009.37滴定法

反式脂肪酸，w/%≤1.0GB5413.36

黃曲霉毒素B1/（μg/kg)≤5.0GB/T5009.22

總砷(以As計)/（mg/kg)≤0.1GB/T5009.11氫化物原子熒光光度法

鉛(Pb)/（mg/kg)≤0.1GB5009.12石墨爐原子吸收光譜法

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2

產(chǎn)品應裝于適宜的避光容器中充氮或真空保存，產(chǎn)品的最佳保存溫度為-5℃以下。

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3

附錄A

檢驗方法

A.1安全要求

本檢驗方法中使用的部分試劑具有毒性和腐蝕性，操作時須小心謹慎。如濺到皮膚上應立即用

水沖洗，嚴重者應立即治療。使用易燃品時，嚴禁使用明火加熱。

A.2一般規(guī)定

除另有說明外，所用試劑均為分析純，檢驗用水符合GB/T6682—2008中規(guī)定的三級水。檢驗中

所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T601、

GB/T602和GB/T603的規(guī)定制備。

A.3花生四烯酸（ARA)甘油三酯的測定

A.3.1試劑和材料

A.3.1.1花生四烯酸（ARA)甘油三酯標準品：純度≥99%。

A.3.1.2十三碳烷酸甘油三酯標準品：純度≥99%。

A.3.1.3氫氧化鉀。

A.3.1.4無水甲醇。

A.3.1.5正庚烷，色譜純。

A.3.1.6石油醚,沸程，30℃～60℃。

A.3.1.7氫氧化鉀甲醇溶液（4mol/L）：稱取22.4g氫氧化鉀（A.3.1.3)于燒杯中，加入適量無水甲醇

（A.3.1.4)使溶解，并轉移至100mL的容量瓶中，當氫氧化鉀甲醇溶液冷卻至室溫后，用無水甲醇稀

釋至刻度，搖勻。

A.3.1.8花生四烯酸（ARA)甘油三酯儲備液（10mg/mL）：稱取250mg（精確至0.0001g）花生四

烯酸（ARA)甘油三酯（A.3.1.1）于25mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻

度，搖勻。

A.3.1.9十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標儲備液（10mg/mL）：稱取250mg（精確至0.0001g）十三碳烷

酸甘油三酯（A.3.1.2）于25mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。

A.3.1.10標準工作溶液的配制

按表A.1分別移取適量花生四烯酸（ARA)甘油三酯儲備液（A.3.1.8）于6個10mL容量瓶中，分別

移入2.0mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標儲備液（A.3.1.9），加入正庚烷(A.3.1.5)稀釋至刻度，搖勻。

表A.1標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯含量

編號

加入花生四烯酸（ARA)甘油三酯儲備液的體積

(mL)

標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度

（mg/mL）

100

20.10.1

30.50.5

41.01.0

52.02.0

63.03.0

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4

A.3.1.11氮氣，純度≥99.999%。

A.3.1.12氦氣，純度≥99.9999%。

A.3.2儀器和設備

A.3.2.1氣相色譜-質譜儀。

A.3.2.2氣相色譜儀，配氫火焰離子化檢測器。

A.3.2.3分析天平：感量為0.01g、0.1mg。

A.3.2.4離心機。

A.3.2.5振搖器。

A.3.3定性分析

A.3.3.1花生四烯酸（ARA)油脂

稱取0.25g（精確至0.01g）試樣于50mL容量瓶中，加入適量正庚烷（A.3.1.5）使溶解，并稀釋

至刻度，搖勻。準確吸取2mL正庚烷溶解液于10mL帶蓋離心管中，加入0.2mL氫氧化鉀甲醇溶液

（A.3.1.7），劇烈振蕩1min以上，放置10min（甲基化反應）。如有機層渾濁，可離心使之澄清。

取上層有機相溶液備用。

A.3.3.2測定

A.氣相色譜條件

a)色譜柱：DB-5ms（30.0m×0.25mm×0.25μm）石英毛細管柱，或相當者；

b)柱溫程序：100℃保持3min，以10℃/min升至260℃，保持8min；

c)載氣：氦氣（A.3.1.12）；

d)流速：1.0mL/min；

e)進樣口溫度：250℃；

f)進樣模式：分流進樣（分流比為1：10）；

g)進樣量：1μL。

A.質譜條件

a)離子源：EI源，70eV；

b)接口溫度：280℃；

c)離子源溫度：230℃；

d)四極桿溫度：150℃；

e)數(shù)據(jù)采集模式：全掃描；

f)質量掃描范圍：20m/z～330m/z；

g)溶劑延遲3.5min。

A.3.3.3結果判定

試樣的質譜圖應與花生四烯酸（ARA)甲酯標準品的質譜圖（附錄B中圖B.1）一致。

A.3.4定量分析

A.3.4.1原理

試樣中花生四烯酸（ARA)在氫氧化鉀甲醇作用下，生成花生四烯酸（ARA)甲酯，用配有氫火焰

離子化檢測器的氣相色譜儀進行測定，以內(nèi)標法定量，結果以花生四烯酸（ARA)甘油三酯計。

A.3.4.2試液的制備

A.花生四烯酸（ARA)油脂試樣溶液的制備

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稱取0.04g試樣（精確至0.0001g）于10mL容量瓶中，加入2.0mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標儲

備液（A.3.1.9），以下按A.3.3.1“加入適量正庚烷（A.3.1.5）……取上層有機相溶液備用”操作。每

份試液至少做兩個平行樣。

A.空白溶液的制備

除不加試樣外按A.所述方法進行處理。

A.3.4.3標準工作溶液甲酯化處理

分別準確吸取A.3.1.10中系列標準工作溶液2mL于10mL帶蓋離心管中，以下按A.3.3.1自“加入

0.2mL氫氧化鉀甲醇溶液（A.3.1.7）……取上層有機相溶液備用”操作。

A.3.4.4測定

A.氣相色譜條件

a)色譜柱：DB-23（30.0m×0.25mm×0.25μm）石英毛細管柱，或相當者；

b)柱溫程序：90℃保持5min，9℃/min升至240℃，保持5min，3℃/min升至250℃；

c)載氣：氮氣（A.3.1.11）；

d)流速：1.33mL/min；

e)進樣口溫度：250℃；

f）進樣模式：分流進樣（分流比為1：100）；

g）檢測器溫度：300℃；

i）進樣量：1μL。

A.標準曲線的繪制

按A.所列測定條件，將甲酯化后的標準工作溶液依次進樣，測量花生四烯酸（ARA)甲酯和

十三碳烷酸甲酯的峰面積?；ㄉ南┧幔ˋRA)甲酯的峰面積與標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘

油三酯的濃度成正比。以標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度（mg/mL）為橫坐標，

以花生四烯酸（ARA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線。花生四烯酸（ARA)

甲酯和十三碳烷酸甲酯的色譜圖參見附錄C中圖C.1。

按公式（A.1）計算回歸參數(shù)：

()yaxb=×+……………(A.1)

式中：

y——花生四烯酸（ARA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；

a——回歸曲線的斜率；

x——標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；

b——回歸曲線的截距。

A.試液的測定

將空白溶液（A.）和試樣溶液（A.）依次進樣，扣除空白值，獲得花生四烯酸（ARA)

甲酯/十三碳烷酸甲酯的峰面積比。

A.3.4.5結果計算

試樣中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的含量X1按式（A.2）計算：

%

m

V

a

b-y

X1100×

1

××=……………(A.2)

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式中：

X1——試樣中花生四烯酸（ARA)甘油三酯含量，%；

y——試液甲酯化后花生四烯酸（ARA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；

a——回歸曲線的斜率；

b—回歸曲線的截距；

V——試液最終定容體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣的質量，單位為毫克（mg）。

如含量以花生四烯酸（ARA)計，乘以換算系數(shù)0.9597。

計算結果以平行測定值的算術平均值表示，保留小數(shù)點后兩位。

A.3.4.6重復性

在重復性條件下獲得的兩次獨立