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文檔簡介

1、免疫標(biāo)記技術(shù),湖北科技學(xué)院免疫教研室,免疫標(biāo)記技術(shù)是用熒光素、酶、或者放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原，利用標(biāo)記技術(shù)的高度敏感性進(jìn)行的抗原抗體的反應(yīng)。,概 念,細(xì)胞1,細(xì)胞2,標(biāo)記物,分 類,熒光素,放色性核素,酶,放射免疫技術(shù),免疫熒光技術(shù),酶免疫技術(shù),酶免疫技術(shù),用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。 可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（OD）來反應(yīng)抗原或抗體含量，靈敏度可達(dá)到ng-pg/ml水平。,酶具有高效催化性：可以加快化學(xué)反應(yīng)的速度 ；在反應(yīng)前后，沒有質(zhì)和量的改變；微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用。,無色,有色,酶免疫技術(shù),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶免疫組化法,用于檢測可溶性抗原或抗體,用于檢測組織中或

2、細(xì)胞表面的抗原,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)-ELISA,間接法,雙抗體夾心法,雙抗原夾心法,此次試驗(yàn)用此法檢測乙肝表面抗體HBsAb,乙肝表面抗體ELISA檢測,檢測對象：乙肝表面抗體HBsAb 檢測試劑：乙肝表面抗原HBsAg、酶標(biāo)乙肝表面抗原HRP-HBsAg 酶促反應(yīng)：辣根過氧化物酶HRP催化四甲基聯(lián)苯胺TMB由無色顯藍(lán)色 定性：判斷有無顏色變化 定量：用酶標(biāo)儀檢測光密度值，靈敏度可達(dá)0.5ng/ml水平,實(shí)驗(yàn)原理,乙肝表面抗體ELISA檢測,操作步驟,1.從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘。 2.按如下方式加待測血清，每孔1滴。,待2,待3,待1,陽性,陰性,空白,3.每孔加酶結(jié)合物1滴（孔上方懸空滴加，無氣泡），混勻，空白孔不加，置37度溫箱30分鐘。,4.取出反應(yīng)板，棄液，拍干。 5.每孔注滿洗滌液，（不要溢出）靜置5秒后棄液，拍干，重復(fù)洗滌5次，拍干。 6.每孔加顯色劑A和B各1滴，置37度溫箱15分鐘。 7.每孔加終止液1滴混勻，觀察結(jié)果。,結(jié)果觀察,結(jié)果觀察,乙型肝炎病毒采用ELISA檢測法具有操作簡便、靈敏度高、試劑成本低、環(huán)保和適用于大批量人群抗原、抗體篩查等優(yōu)點(diǎn),目前

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