動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)-(2).ppt

1、動物細(xì)胞工程,其中，動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。,燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植。 但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？,思考？,取該患者的皮膚進行細(xì)胞培養(yǎng),獲得人造皮膚后再移植。,（一）、概念,是指從動物機體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。,（二）、原理,細(xì)胞分裂增殖,一、動物細(xì)胞培養(yǎng),(三)、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程,取動物組織塊,剪碎組織,胰蛋白酶處理,細(xì)胞培養(yǎng),單個細(xì)胞,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ),剪碎組織,及胰蛋白酶處理的目的？,剪碎組織及胰蛋白

2、酶處理的目的：將組織分散成單個細(xì)胞，有利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)。,制成細(xì)胞懸液,動物胚胎或幼齡動物器官,因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。,（四）動物細(xì)胞生長特性,1.細(xì)胞貼壁：細(xì)胞懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。 要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng) 皿的內(nèi)表面光滑 無毒、易于貼附。,2.接觸抑制,接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。,接觸抑制,（細(xì)胞為單層）,50代以后細(xì)胞失去接觸抑制,原代培養(yǎng)： 人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)： 貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)

3、培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。,培養(yǎng)過程：,動物胚胎或幼齡動物的細(xì)胞、組織或器官,細(xì)胞懸浮液,單個細(xì)胞,剪碎,細(xì)胞貼壁,剝離 分瓶,部分細(xì)胞的細(xì)胞核型發(fā)生變化,動物細(xì)胞培養(yǎng)最終不能培養(yǎng)成動物體,接觸抑制,培養(yǎng)器皿,超凈工作臺,實驗設(shè)備,細(xì)胞培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡,（五）、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件,1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素；定期更換培養(yǎng)液） 2、營養(yǎng) （葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等） 3、溫度和PH 溫度36.5+0.5度，pH7.27.4 4、氣體環(huán)境 O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,（使用合成培養(yǎng)基時，需加入血清、血漿等）,補充合

4、成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，如血清激素、氨基酸等。,CO2有調(diào)節(jié)PH的作用。,思考與討論,1、進行動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？ 2、胰蛋白酶真的不會把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？,主要是蛋白質(zhì)。 不行，因為動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜PH為7.27.4，而胃蛋白酶適宜PH為2.0，胃蛋白酶會失去活性。,長時間會消化細(xì)胞膜蛋白，對細(xì)胞有損傷作用。所以應(yīng)控制好胰蛋白酶的消化時間。,P44,3、動物細(xì)胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)基相比，有何獨特之處？,4、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？,動物細(xì)胞培養(yǎng)液的獨特之處有： 1、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動

5、物血清等,不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體,植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用,生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等 健康細(xì)胞培養(yǎng)：如獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。 用于檢測有毒物質(zhì) 用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù),P50,動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化過程嗎？為什么？ 不經(jīng)過。因為高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力。,二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物,1. 概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成

6、動物個體。,核移植,受體細(xì)胞：,細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易,用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。 2.原理：動物體細(xì)胞核的全能性。,（難度高）,M期的卵母細(xì)胞,選用去核卵母細(xì)胞的原因：卵母細(xì)胞比較大，容易操作；細(xì)胞質(zhì)多，營養(yǎng)豐富，含有促進細(xì)胞核全能性表達的物質(zhì)。,胚胎移植,動物細(xì)胞核移植,原理：動物細(xì)胞核具有全能性和細(xì)胞膜的流動性,討論：,1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？,為使遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物。,P49,2.用于核移植 的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？ 培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至1050代左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而 10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。,3.你認(rèn)為用上 述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進行了100%的復(fù)制嗎？為什么？ 不是。 克隆動物絕大部分DNA來自于供體細(xì)胞核， 少部分DNA