姜紅 中國藥典2010版抗生素品種增修訂概況.ppt

1、中國藥典2010版抗生素品種增修訂概況,湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院 姜紅 2010年5月26日,抗生素品種收載概況 標(biāo)準(zhǔn)制定的思路特點 增修訂要點分類簡介 下版藥典的關(guān)注要點,抗生素品種收載概況,抗生素品種收載概況,臨床應(yīng)用廣、銷售額居前列 臨床不良反應(yīng)、不良事件比例高 穩(wěn)定性差 基于以上特點，對抗生素藥品的質(zhì)量控制尤為注重,標(biāo)準(zhǔn)制定的思路特點,雜質(zhì)控制理念的飛躍 對抗生素中微量毒性雜質(zhì)的控制水平顯著提高重視 對多組分抗生素中小組分和無效組分的控制 加強了對制劑中防腐劑的控制 實現(xiàn)了無菌檢查的各論化 抗生素效價測定杯碟法和濁度法并舉 對難溶藥物顆粒劑/干混懸劑的溶出度進行控制 最終落腳在保障

2、安全性、有效性、可控性上,1、雜質(zhì)控制理念的飛躍,純度控制 1986年以前 經(jīng)典化學(xué)法 雜質(zhì)控制 90年代初期 雜質(zhì)譜控制 90年代后期,對藥品雜質(zhì)譜的控制，系要求藥品中的雜質(zhì)種類和含量均不能有太大的改變，特別是那些可能與毒付反應(yīng)密切相關(guān)的雜質(zhì)。在藥品標(biāo)準(zhǔn)中主要體現(xiàn)在 要求采用的分析方法不僅能分離出樣品中實際存在的雜質(zhì)，而且能分離出各類潛在的雜質(zhì)； 對分離出的主要雜質(zhì)能進行定性，并根據(jù)其來源和生理活性制定不同的質(zhì)控限度。,修訂后的標(biāo)準(zhǔn)，不僅對幾乎所有的品種（包括原料和制劑）均采用HPLC方法，多數(shù)采用梯度洗脫實現(xiàn)了對有關(guān)物質(zhì)的控制；且對-內(nèi)酰胺抗生素、喹諾酮抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類和氨基糖苷類抗生素

3、等已經(jīng)報道的各類雜質(zhì)，采用雜質(zhì)對照品、混合雜質(zhì)對照品，結(jié)合相對保留時間、LC-MS等方法，在HPLC色譜圖中進行了歸屬，并制定了相應(yīng)的質(zhì)控限度，其中數(shù)十種雜質(zhì)已經(jīng)通過雜質(zhì)對照品等方法實現(xiàn)了單獨控制。,2005版藥典方法,2010版藥典方法,質(zhì)控方法的有效性_氨芐西林鈉/舒巴坦鈉有關(guān)物質(zhì)分析方法,有關(guān)物質(zhì)分析雜質(zhì)的定位與定量 充分利用文獻結(jié)果，采用色譜相關(guān)光譜法將文獻中雜質(zhì)結(jié)構(gòu)與質(zhì)控方法中的雜質(zhì)峰相關(guān)聯(lián)，確定雜質(zhì)峰的結(jié)構(gòu)； 建立混合雜質(zhì)對照品，并在常規(guī)分析中定位雜質(zhì)峰； 利用主成份對照法分析雜質(zhì)的相對含量 利用雜質(zhì)的響應(yīng)因子確定雜質(zhì)的絕對含量,2、對抗生素中微量毒性雜質(zhì)控制提升,高聚物檢查 中國

4、藥典2005版已經(jīng)對多個青霉素、頭孢菌素中的高分子雜質(zhì)的含量被控制。所采用的質(zhì)控方法均為葡聚糖凝膠Sephadex G10凝膠色譜系統(tǒng) 殘留溶劑檢查,高聚物檢查原方法的不足：Sephadex G-10凝膠色譜柱效低、分離效果差等缺點逐步暴露，主要表現(xiàn)為 不能有效分離不同聚合度的-內(nèi)酰胺抗生素聚合物，且易受開環(huán)物等小分子雜質(zhì)的干擾； 受制劑中輔料的干擾，無法測定-內(nèi)酰胺抗生素顆粒劑、干混懸劑中的高聚物； 常用的-內(nèi)酰胺酶抑制劑（克拉維酸鉀和舒巴坦鈉）的出峰未知與-內(nèi)酰胺抗生素聚合物系統(tǒng)，因此也無法測定-內(nèi)酰胺抗生素復(fù)方制劑中的聚合物； 對不溶解于水的-內(nèi)酰胺酯（如頭孢呋新酯、頭孢泊肟酯等）無法測

5、定； 無法分離碳青霉烯類-內(nèi)酰胺抗生素中的聚合物。 分析時間長。,在中國藥典2010版中，雖然有多個內(nèi)酰胺抗生素仍采用葡聚糖凝膠Sephadex G10色譜系統(tǒng)控制其聚合物含量，但高效凝膠TSK2000色譜系統(tǒng)已經(jīng)成功地用于控制頭孢地嗪鈉的聚合物控制，為高效凝膠色譜系統(tǒng)的應(yīng)用邁出了第一步。 中國藥典2010版中“利用指針性雜質(zhì)控制-內(nèi)酰胺抗生素聚合物”，通過對阿莫西林鈉、氨芐西林鈉、阿莫西林鈉/克拉維酸鉀、氨芐西林鈉/舒巴坦鈉及其制劑中二聚體的控制，也成功地解決了-內(nèi)酰胺抗生素復(fù)方制劑、部分阿莫西林顆粒劑等在Sephadex G10凝膠色譜系統(tǒng)中受嚴(yán)重干擾品種的聚合物控制問題。,殘留溶劑控制

6、ICH將藥品生產(chǎn)及純化過程中常用的69種有機溶劑按照對人體和環(huán)境的危害程度分為四類，并制定了限度標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)生產(chǎn)工藝中用到這些溶劑時應(yīng)對其殘留量進行控制，以符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其它基本的質(zhì)量要求。中國藥典2005版中，對殘留溶劑的分類及限度標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)與ICH的要求完全一致，但僅在附錄中作為原則性要求。 在中國藥典2010版中，幾乎所有的抗生素原料藥，在各論項下均按其生產(chǎn)工藝制定了嚴(yán)格的殘留溶劑檢查；,實際工作中常見的問題 方法的多樣性 相同的品種殘留溶劑變化大 基質(zhì)效應(yīng) 共出峰和降解峰,殘留溶劑檢測方法進行了相應(yīng)的調(diào)整： 改變了殘留溶劑測定的習(xí)慣步驟.首先對樣品中存在的殘留溶劑進行定性，再根據(jù)檢出

7、對象配制相應(yīng)當(dāng)對照品溶液，避免了配制對照品溶液的煩瑣，特別適合小批次、殘留溶劑種類較少的具體樣品的測定。例如頭孢曲松鈉，雖然標(biāo)準(zhǔn)中要求控制11種殘留溶劑，如實際測定中只檢測到丙酮一種溶劑，則只需配制含有丙酮的對照品溶液即可，無需再配制含11種有機溶劑的對照品溶液，大大簡化了殘留溶劑檢測過程中最為繁瑣的對照品溶液的配制過程，提高了檢測的效率。,殘留溶劑在檢測方法上也進行了相應(yīng)的調(diào)整： 采用RART對樣品中存在的殘留溶劑進行定性。雖然在沒有對照品的情況下利用相對保留時間（relative retention time，RRT）定性是氣相色譜分析中常用的定性方法，但此時要求色譜系統(tǒng)中的各種參數(shù)均要保

8、持穩(wěn)定。通過研究發(fā)現(xiàn)，利用甲烷測定色譜系統(tǒng)的t0，用溶質(zhì)峰的調(diào)整相對保留時間（RART）代替?zhèn)鹘y(tǒng)的相對保留時間（RRT）進行定性，由于調(diào)整相對保留時間只受柱溫和固定相性質(zhì)的影響，可以避免實驗中其它色譜參數(shù)如載氣流速、柱尺寸等的變化對定性的影響。故采用RART對樣品中存在的殘留溶劑進行定性。,殘留溶劑在檢測方法上也進行了相應(yīng)的調(diào)整： 采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測定。由于藥物結(jié)構(gòu)的多樣性和殘留溶劑與藥物相互作用的不可預(yù)見性，多數(shù)抗生素品種采用了標(biāo)準(zhǔn)加入法定量，不僅避免了樣品基質(zhì)效應(yīng)的影響，也回避了溶劑篩選的復(fù)雜過程，且可以得到更為準(zhǔn)確的定量結(jié)果。,規(guī)則1:如何排除共出峰的干擾,對殘留溶劑測定不符合規(guī)定的樣品，

9、采用極性不同的色譜系統(tǒng)進行驗證，可有效的排除共出峰的干擾。,如何排除熱降解峰的干擾,規(guī)則2: 改變頂空溫度可以確定頂空條件下樣品是否可能產(chǎn)生熱降解干擾物。 規(guī)則3: 分子結(jié)構(gòu)中有烷氧基的藥品可能熱解產(chǎn)生相應(yīng)的醇。,如何排除基質(zhì)效應(yīng)的影響,規(guī)則4: 標(biāo)準(zhǔn)加入法可以有效地排除基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果與內(nèi)標(biāo)法結(jié)果系統(tǒng)偏差約10%（通常偏低）時，可以認為方法存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)。,如何選擇定量方式,規(guī)則5:藥物中有機溶劑殘留量的測定通常屬于微量或痕量分析，定量時通常不采用外標(biāo)法，而采用定量精度更高的內(nèi)標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)加入法。當(dāng)內(nèi)標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)加入法的測定結(jié)果不一致時，以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn)。,藥品溶解性的

10、影響,規(guī)則6: 當(dāng)樣品在溶解介質(zhì)中未溶解時，測定結(jié)果通常偏低且精密度差。,規(guī)則7: 當(dāng)方法的回收率超出80-120%時，提示溶解介質(zhì)不宜作為該藥品殘留溶劑測定的溶劑，應(yīng)改換其它介質(zhì)重新實驗。,溶劑介質(zhì)的影響,總結(jié)：,目前中國不僅接受了ICH對化學(xué)藥品中殘留溶劑控制的理念，而且結(jié)合中國國情，建立了適合于中國國情的殘留溶劑控制方法。,3、多組分抗生素中小組分和無效組分的控制從嚴(yán),慶大霉素及其制劑，不僅要求控制C組分的含量，且對其中的小諾霉素、西索米星和其它未知組分的含量均分別加以控制 對麥白霉素不僅要求控制麥迪霉素A1應(yīng)不低于48%，吉他霉素A6應(yīng)不低于12%，且要求麥迪霉素及吉他霉素A系列組分（

11、A1、A2、A4、A6、A8）之和應(yīng)不低于70%，進而對未知和無效組分實現(xiàn)控制； 對大環(huán)內(nèi)酯、氨基糖苷類抗生素品種中的主組分、無效、未知組分也均分別實現(xiàn)了控制。對其中諸組分的定位，均采用混合標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)圖譜加以實現(xiàn)。,4、加強了對制劑中防腐劑的控制,對藥物本身不具有充分抗菌活性的水溶液制劑，通常需要添加適宜的抑菌劑（防腐劑），以防止制劑在正常貯藏和使用過程中可能發(fā)生的微生物污染，尤其是對多劑量包裝的制劑，避免因藥物微生物污染及變質(zhì)而對患者造成傷害。對抗生素滴眼劑，雖然其本身具有一定的抗菌作用，但由于抗菌譜的限值，通常也需要添加防腐劑。但所有的抑菌劑都具有一定的毒性，制劑中抑菌劑的量應(yīng)為最低的

12、有效劑量。且最終包裝容器中的抑菌劑有效濃度應(yīng)低于對人體的有害濃度。,中國藥典2010版首次在附錄中收載了“抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則”，用于測定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評價最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時也用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段進行抑菌劑的篩選。為保證添加到制劑中的抑菌劑的量在規(guī)定范圍，抗生素專業(yè)委員會要求，對處方中含防腐劑等輔料的滴眼劑應(yīng)控制其種類及含量，并參照USP等國外藥典將其含量控制為其處方量的80120。新修訂的抗生素滴眼劑如氯霉素滴眼劑、妥布霉素滴眼劑等品種中，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯和苯扎溴銨等抑菌劑均采用HPLC法加以了控制。,（d） 各防腐

13、劑及雜質(zhì)對照和防腐劑混合溶液的色譜圖 （1：對羥基苯甲酸甲酯；2：對羥基苯甲酸乙酯；3：對羥基苯甲酸丙酯；4：氯霉素二醇物； 5：對硝基苯甲醛；6：氯霉素）,5、實現(xiàn)了無菌檢查的各論化,個性化的重要性 藥品無菌檢查是注射劑質(zhì)量控制的重要部分之一，注射劑一旦受到微生物的污染，將對患者造成感染，甚至威脅到生命安全。為保證臨床應(yīng)用的安全性，目前各國藥典對藥品注射劑的無菌性均有具體的要求，抗生素注射劑亦應(yīng)符合藥典無菌檢查法的一般規(guī)定。 對具有抗菌活性的藥品注射劑進行無菌檢查，通常要利用薄膜過濾法去除藥物的抗菌活性，并通過驗證實驗確證抗菌活性去除的是否徹底，以保證檢驗結(jié)果的有效性。,中國藥典2010版無

14、菌項起草要求 針對具體抗菌藥物抗菌譜和抗菌活性的差異，結(jié)合中國藥典中規(guī)定的常用驗證菌株，選擇最敏感菌株作為陽性對照；如針對頭孢菌素的抗菌譜，第一代注射用頭孢菌素選擇金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) 26 003，第三代頭孢菌素選擇大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC(F) 44102，第二代和第四代頭孢菌素選擇金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌作為陽性對照菌。,利用陽性對照菌建立該品種SOP，確定樣品的最佳溶解方式、最佳沖洗液、沖洗方式等操作關(guān)鍵點；并將上述內(nèi)容按統(tǒng)一要求寫入到每一個具體各論中，以方便今后的檢驗工作。中國藥典2010版中抗生

15、素注射劑的無菌檢查已經(jīng)全部實現(xiàn)了各論化。 避免了由于方法而導(dǎo)致的假陽性和假陰性現(xiàn)象,6、抗生素效價測定杯碟法和濁度法并舉,在中國藥典2005版中，僅有慶大霉素一個品種同時收載了杯碟法和濁度法，但在中國藥典2010版中，幾乎所有的抗生素效價測定法，均同時收載了杯碟法和濁度法兩種方法。隨著大量單組分抗生素采用HPLC法測定含量，比濁法將成為多組分抗生素效價測定的主流。雖然目前2010版各論中未明確要求采用何種方法實驗，但當(dāng)遇到仲裁樣品，特別是多組分抗生素的仲裁樣品時，顯然濁度法的結(jié)果更為可靠。,7、對難溶藥物顆粒劑/干混懸劑的溶出度進行控制,在中國藥典2010版的增修訂過程中，各起草單位對各類抗生

16、素顆粒劑、干混懸劑的溶出度與片劑、膠囊劑的溶出度進行了比較。 對難溶藥物如羅紅霉素、頭孢泊肟酯等品種的顆粒劑、干混懸劑均設(shè)立了溶出度檢查； 對部分在片劑、膠囊劑溶出介質(zhì)中極易溶（10min內(nèi)溶出度大于80）的品種，如阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸鉀等顆粒劑、干混懸劑，認為不必專門對其溶出度進行控制。既有效地控制了藥品的質(zhì)量，有最大程度的簡化了質(zhì)控項目。,增修訂要點分類簡介,. -內(nèi)酰胺類抗生素增修訂要點 有關(guān)物質(zhì)檢查方法與國外藥典基本一致，在分離度試驗中根據(jù)實際情況進行修改，更有利方法的可操作性。 有很多品種采用HPLC梯度洗脫法測定有關(guān)物質(zhì)，如：頭孢地尼，頭孢唑林鈉，拉氧頭孢鈉, 阿莫西林及其

17、復(fù)方制劑，氨芐西林等。,大環(huán)內(nèi)酯類增修訂要點 經(jīng)對幾種HPLC方法比較后，采用同一HPLC法檢查紅霉素與其衍生物以及制劑中紅霉素A、B、C及有關(guān)物質(zhì)。有利于同類品種間質(zhì)量的比較。,四環(huán)素類增修訂要點 統(tǒng)一了該品種有關(guān)物質(zhì)與含量測定的HPLC法色譜條件，與2005年版方法比較有較大改進。檢出的雜質(zhì)與EP6.0規(guī)定的雜質(zhì)有相關(guān)性。并根據(jù)國內(nèi)產(chǎn)品實際情況，制定合理的限度。,氨基糖苷類增修訂要點 用HPLC-ELSD替代TLC檢查有關(guān)物質(zhì)與組分，提高檢測靈敏度；同時可用該方法測定硫酸鹽（SO4）的含量。,喹諾酮類抗生素的增修訂要點 有關(guān)物質(zhì)檢查，EP、BP、USP均采用TLC、HPLC兩種方法進行控制。 本版藥典提出用HPLC在主峰洗脫后梯度洗脫的方法，將EP用TLC、HPLC兩種方法檢測的雜質(zhì)在同一HPLC系統(tǒng)中檢測. 同時根據(jù)各雜質(zhì)最大吸收波長的不同，用雙波長檢測 對照品外標(biāo)法與自身對照加校正因子與不加校正因子法同時并列。雜質(zhì)A用HPLC檢測,靈敏度與正確性均優(yōu)于TLC法。使該類品種標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)含量高于國外藥典標(biāo)準(zhǔn)。,下版藥典的關(guān)注要點,下一版藥典抗生素擬開展的研究性工作 2010年全國評價性抽驗抗生素品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 克林霉素磷酸酯、鏈霉素、派拉西林、氟康唑、磷霉素（鈉）、諾氟沙星、阿莫西林克拉維酸、利福平、青霉素、阿米卡星、苯唑西林、紅霉素、頭孢他定、慶大霉素、甲磺酸帕珠沙星