脂蛋白及其代謝紊亂.ppt

1、五、膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）,結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 又稱(chēng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由肝、小腸、腎上腺和脂肪組織合成 為一疏水性的糖蛋白 基因位于16號(hào)染色體 包括16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子,膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）的生理功能,CETP是膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵蛋白質(zhì) 促進(jìn)HDL與LDL、VLDL之間的膽固醇酯（CE）的交換 CETP缺乏時(shí)，使HDL中的CE儲(chǔ)積，TG降低，無(wú)法交換給LDL和VLDL，出現(xiàn)高HDL血癥,第五節(jié) 脂蛋白的代謝,一、外源性脂質(zhì)代謝： 是指從食物中攝取的脂質(zhì)（主要為T(mén)G），在小腸內(nèi)被脂酶水解成脂肪酸（FFA）和甘油一脂后，由腸粘膜吸收入細(xì)胞內(nèi)，再重組為T(mén)G和磷脂，并與B48、A和少量的膽

2、固醇構(gòu)成大分子的CM，經(jīng)淋巴管進(jìn)入血液循環(huán)的過(guò)程。,外源性脂質(zhì)代謝過(guò)程,二、內(nèi)源性脂質(zhì)代謝,是指由機(jī)體內(nèi)通過(guò)脂質(zhì)循環(huán)在肝臟合成的TG、CE、游離膽固醇、磷脂和載脂蛋白進(jìn)入血液進(jìn)行的脂質(zhì)代謝過(guò)程 內(nèi)源性和外源性脂質(zhì)代謝包括以下脂質(zhì)的代謝過(guò)程： （1）CM的代謝 （2）LDL和VLDL的代謝 （3）HDL的代謝,一、CM的代謝過(guò)程,CM的代謝過(guò)程,(1)小腸從食物中吸收富含TG的脂蛋白 (2)小腸上皮合成CM,并分泌入淋巴管 (3)生成富含AAA和B48的新生CM入血 (4)結(jié)合從HDL來(lái)源的ApoC和E后，A移行到 HDL，形成成熟CM （5）LPL分解TG為脂肪酸和甘油脂肪酸，載脂蛋白在HDL

3、3移行，產(chǎn)生CM殘粒。被肝臟分解。,二、VLDL的代謝過(guò)程,VLDL代謝步驟,（1）VLDL在肝臟合成，其中Tc來(lái)源于CM殘粒，B100由肝合成，產(chǎn)生新生VLDL （2）在血中，接受來(lái)自HDL的C和E后，變成成熟VLDL （3）經(jīng)LPL分解，脫去C、E和甘油， （4）VLDL中膽固醇經(jīng)CETP與HDL交換，變成IDL（VLDL殘粒） （5）大部分經(jīng)肝分解，小部分轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)DL代謝。,三、LDL的代謝過(guò)程,LDL代謝步驟,（1）肝臟LDL受體識(shí)別外周血中LDL （2）內(nèi)吞后經(jīng)膜HATP作用，PH下降變酸 （3）被細(xì)胞內(nèi)溶酶體融合，經(jīng)酶水解 （4）使膽固醇脫脂分解為游離膽固醇 （5）游離膽固醇參與細(xì)

4、胞分解和代謝,四、HDL的代謝過(guò)程,HDL的代謝步驟,（1）HDL由肝合成，結(jié)合A和磷脂形成新生HDL （2）組織中膽固醇結(jié)合HDL上，在LCAT作用下，游離膽固醇脂化為膽固醇脂，變?yōu)镠DL3 （3）組織中的甘油結(jié)合到HDL上，在LPL作用下，HDL3變?yōu)镠DL2 （4）HDL2被肝臟HDL受體結(jié)合被肝臟分解,第六節(jié) 脂蛋白代謝紊亂,脂蛋白代謝紊亂是指血中TC或TG升高或各種脂蛋白組份水平發(fā)生變化，最主要的表現(xiàn)形式為高脂蛋白血（hyperlipoproteinemia） 包括原發(fā)性代謝紊亂和繼發(fā)性代謝紊亂兩類(lèi) 原發(fā)性是由遺傳缺陷引起，多表現(xiàn)為家族性和多基因性 繼發(fā)性是由原發(fā)疾病如糖尿病、腎病引

5、起的代謝紊亂,1970年WHO分型,型高脂蛋白血癥,表現(xiàn)：TG升高，TC正常，CM、VLDL含量增高，LDL和HDL降低，又稱(chēng)高CM血癥 原因：LPL活性降低和ApoC缺乏，使CM中的TG不能水解為CM殘粒，無(wú)法被LDL受體識(shí)別進(jìn)行代謝,a型高脂蛋白血癥,表現(xiàn)：血清TG、B、LDL和TC含量明顯增高，電泳可發(fā)現(xiàn)濃染的脂蛋白帶，又稱(chēng)高脂蛋白血癥 原因：LDL受體缺陷或活性降低，使LDL無(wú)法被識(shí)別和降解，導(dǎo)致血中LDL升高。,b型高脂蛋白血癥,表現(xiàn)：Tc和TG 增高， LDL和VLDl增高 電泳時(shí)除有高脂蛋白帶外，還有前脂蛋白帶，但二者不融合，稱(chēng)混合型高脂血癥 原因：LDL受體正常，但VLDL合成

6、旺盛，B合成旺盛，但VLDL代謝未加強(qiáng)。造成VLDL在血中儲(chǔ)積。,型高脂蛋白血癥,表現(xiàn)：TC和TG增高，C、C、E增高，電泳可發(fā)現(xiàn)闊脂蛋白帶，（ 脂蛋白帶和前脂蛋白帶融合），也稱(chēng)高VLDL血癥 原因： （1）ApoE異常，使IDL在血中的異化速度減慢，VLDL經(jīng)肝ApoE受體清除受阻 （2）肝從CM殘粒獲得外源性膽固醇減少，自身合成TC并分泌VLDL增多，使VLDL過(guò)渡生成 （3）ApoE異常，使LPL活性降低，VLDL無(wú)法轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)DL,型高脂蛋白血癥,表現(xiàn)：高TG，LDL正常，HDL降低，又稱(chēng)高TG血癥 原因：病因尚不完全清楚，為顯性遺傳疾病，VLDL合成亢進(jìn)，VLDL代謝速度減慢,型高脂蛋

7、白血癥,表現(xiàn)：TG增高，CM和VLDL增高，電泳表現(xiàn)為高CM和高前脂蛋白血癥共存的混合性高脂血癥，4放置血清可呈“奶油樣”。 原因：LPL活性低下，和ApoC減少所致，導(dǎo)致TG不能降解和VLDL生成過(guò)多，引起血中淤積。,第七節(jié)脂蛋白代謝與AS的關(guān)系,一、血脂與AS的關(guān)系 （1）血脂的異常增高是產(chǎn)生AS的重要因素 （2）血管內(nèi)皮炎癥、氧化型LDL在血管內(nèi)膜中淤積和產(chǎn)生泡沫細(xì)胞是形成As的主要原因 （3）高脂血癥引起的血粘度的改變，進(jìn)而改變凝血系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的各種因子的表達(dá)和功能，可促進(jìn)血栓的形成，加速As的形成和發(fā)展,高脂血癥對(duì)纖溶的影響,（1）血脂對(duì)血小板功能的影響（血小板聚集作用加強(qiáng)） （2

8、）血脂對(duì)纖溶的影響（VLDL是纖溶酶原的激活啟動(dòng)因子） （ 3）血脂對(duì)纖維蛋白原的影響（血漿纖維蛋白原的含量與LDL、Lp（a）、和TG正相關(guān)，與HDL負(fù)相關(guān)）,二、動(dòng)脈粥樣硬化（AS）概述,AS是動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的淤積和纖維蛋白的增生并伴有鈣化和壞死及炎癥病變的一類(lèi)慢性進(jìn)行性病理過(guò)程。目前是人類(lèi)第一發(fā)病率高的疾病，但對(duì)其發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，共同的觀點(diǎn)認(rèn)為：血脂的改變、纖溶系統(tǒng)亢進(jìn)、高血壓和血管內(nèi)膜炎癥是AS的重要病因,AS的發(fā)病機(jī)理假說(shuō),目前對(duì)AS研究的新觀點(diǎn),（1）脂蛋白的氧化 oxLDL的形成是炎癥分子強(qiáng)有力的誘導(dǎo)物 （2）血栓素和前列腺素平衡失常 血小板的聚集可釋放血栓素導(dǎo)致

9、血栓發(fā)生 （3）內(nèi)皮細(xì)胞損傷和鈣化 內(nèi)皮細(xì)胞損傷激活纖維蛋白激活劑如組織因子，血小板激活因子，IL1等促血凝物質(zhì)，導(dǎo)致血管鈣化，加劇血栓形成。,AS的病理特征,（1）局灶性病變易發(fā)生于動(dòng)脈分叉處 （2）病變始發(fā)于內(nèi)皮細(xì)胞功能性改變 （3）病變的主要細(xì)胞為平滑肌細(xì)胞 （4）病灶隨嚴(yán)重程度不同在細(xì)胞內(nèi)外有不同的脂質(zhì)，其中多為T(mén)C,三、脂質(zhì)異常與AS的發(fā)生心血管疾病血脂危險(xiǎn)水平的分類(lèi)(mmol/L),四、引起動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白,（一）脂蛋白殘粒 富含TG的CM和VLDL經(jīng)LPL水解生成脂蛋白殘粒，包含CM殘粒和IDL（VLDL殘粒） 高TG血癥可使大量的CM殘粒和IDL淤積在外周血中。如型高脂血癥

10、中VLDL殘粒，因肝臟的ApoE受體結(jié)合率降低使血中的膽固醇酯和ApoE顆粒沉積于血管壁，引發(fā)AS,（二）變性的LDL與AS,變性的LDL包括：LDL的氧化、乙酰化和糖化，目前對(duì)氧化的LDL研究的較多 ox-LDL參與AS的機(jī)制： （1）趨化作用 ox-LDL可使循環(huán)中的白細(xì)胞粘附血管內(nèi)皮 （2）抑制AS病灶中巨噬細(xì)胞游走 （3）增加巨噬細(xì)胞攝取LDL的速度，形成泡沫細(xì)胞 （4）細(xì)胞毒作用 使內(nèi)皮細(xì)胞功能改變，通透性增加，功能下降，最終變性沉積于血管壁,（三）LP（a）與AS, LP（a）留存于內(nèi)皮細(xì)胞，造成抗纖溶環(huán)境，促進(jìn)泡沫細(xì)胞脂肪斑塊形成 LP（a）作用于內(nèi)皮細(xì)胞造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷，刺激粘

11、附因子表達(dá)，使白細(xì)胞和單核細(xì)胞粘附于血管壁 LP（a）的自身氧化與ox-LDL一起被清道夫受體結(jié)合，誘導(dǎo)刺激單核細(xì)胞分化，使巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化 LP（a）通過(guò)活化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子刺激平滑肌細(xì)胞增殖，抑制平滑肌細(xì)胞的遷徙,我國(guó)高脂血癥開(kāi)始治療標(biāo)準(zhǔn)和目標(biāo)（1997年）,五 高脂血癥的防治,合理飲食 加強(qiáng)鍛煉 控制體重 食療和藥物治療相結(jié)合,第九節(jié) 血脂測(cè)定的方法學(xué)評(píng)價(jià),一、血脂測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題 標(biāo)準(zhǔn)化內(nèi)容： 準(zhǔn)確度 精密度 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可比性 實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的可移植性,二、國(guó)外血脂標(biāo)準(zhǔn)化工作的回顧和現(xiàn)狀,70年代中期，血脂與冠心病關(guān)系確立后，血脂測(cè)定工作和質(zhì)量控制日益受到重視，美國(guó)西北臨床脂質(zhì)研究中心（

12、LRC）進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室間的血脂評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)CV值差距相當(dāng)大。 1985年，美國(guó)CDC提出TC和TG測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃，并與WHO合作，當(dāng)時(shí)有800多實(shí)驗(yàn)室參加，由CDC提供標(biāo)準(zhǔn)血清，目的摸清實(shí)驗(yàn)室間TC和TG測(cè)定的準(zhǔn)確度和精密性，提高血脂測(cè)定水平。, 1985年，美國(guó)衛(wèi)生研究院（NIH）提出膽固醇教育計(jì)劃（NCEP），成立NCEP委員會(huì)，并投入大量資金，動(dòng)員所有相關(guān)組織，成立了四個(gè)專(zhuān)家組（LSP），領(lǐng)導(dǎo)TC標(biāo)準(zhǔn)化工作。1990年，NCEP提出了膽固醇測(cè)定的方法學(xué)建議，并在1995年又提出了LDL、HDL和TG測(cè)定的建議，并對(duì)幾項(xiàng)脂類(lèi)測(cè)定的現(xiàn)狀、變異來(lái)源、分析目標(biāo)、醫(yī)學(xué)決定水平及方法學(xué)、制造商和機(jī)構(gòu)提

13、出了具體的建議，被稱(chēng)為美國(guó)脂類(lèi)測(cè)定的綱領(lǐng)性文件,1981年，國(guó)際免疫學(xué)會(huì)聯(lián)盟的脂類(lèi)載脂蛋白委員會(huì)和美國(guó)CDC提供了有ApoA和B的質(zhì)控血清，分別在83年和87年進(jìn)行了室間質(zhì)量控制。 1989年，國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC）召開(kāi)了載脂蛋白免疫化學(xué)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化會(huì)議，整理了一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃，并提出了一個(gè)草案，于1989年7月討論實(shí)施。,目前國(guó)際脂類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)化體系和組成（美國(guó)）,美國(guó)脂類(lèi)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化體系,1.對(duì)各項(xiàng)脂類(lèi)測(cè)定提出分析目標(biāo) 脂類(lèi)測(cè)定分析目標(biāo)(NCEP 1994),美國(guó)脂類(lèi)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化體系,建立了脂質(zhì)研究的實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)和國(guó)家膽固醇參考方法實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò) 有專(zhuān)門(mén)的機(jī)構(gòu)提供標(biāo)準(zhǔn)化血清和標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)服務(wù)

14、,(包括優(yōu)秀方法的研究和推薦,參考材料和質(zhì)控材料的研究和提供),并定期做質(zhì)量調(diào)查,三、我國(guó)脂類(lèi)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀,至今，我國(guó)尚無(wú)全國(guó)性的脂類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)化體系，但有區(qū)域性的調(diào)查和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化，已做了大量的基礎(chǔ)性工作。 （1）調(diào)查摸底 1987年江浙和1992年京津滬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室Tc測(cè)定調(diào)查 （2）參考物的研制 老年所研制了膽固醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW092030）和血清膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物（GBW09138），1994年國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)作為國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到了美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物同等水平，純度99.8，最近又制備了APOA和B的定值血清，得到WHO的認(rèn)可,我國(guó)脂類(lèi)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀,（3）參考方法的研究 老年所提出了HLPC法

15、為T(mén)C的參考方法其各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)達(dá)到了美國(guó)ALBK法的要求 （4）推薦常規(guī)測(cè)定方法 1994年全國(guó)脂類(lèi)測(cè)定研討會(huì)提出了TC、TG、HDL和LDL的推薦方法，2003年又發(fā)表了臨床血脂測(cè)定建議,四、血清脂質(zhì)的測(cè)定,血漿中的脂質(zhì)隨年齡增長(zhǎng)而變化，并與多種因素有關(guān)系，因此，研究分析前的變異是血脂標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)定的基礎(chǔ)，也是必要的考慮因素。,（一）分析前變異對(duì)血脂的影響,生物學(xué)因素 個(gè)體、性別、年齡和種族 行為因素 飲食、肥胖、吸煙、緊張、飲酒 臨床因素 繼發(fā)代謝性疾病、腎病、糖尿病 標(biāo)本收集及處理 禁食狀態(tài)、血液濃縮、抗凝劑 關(guān)于血清和血漿 建議用血清，如用血漿，則乘于1.03,（二）血脂測(cè)定的方法學(xué),1.

16、血清膽固醇測(cè)定,（1）化學(xué)法 （ALBK法）皂化、提取、顯色、比色。美國(guó)參考方法 （2）高效液相法 我國(guó)的參考方法 （3）酶法 臨床常規(guī)測(cè)定方法,酶法測(cè)定血脂的原理,膽固醇酯酶（CEH） 脂性膽固醇 游離膽固醇 脂肪酸 膽固醇氧化酶（COD） 游離膽固醇 4 膽甾烯酮 H2O2 H2O2酶 H2O2 4氨基安替吡啉 萘酚 紅色醌亞胺 H2O,（二）TG的測(cè)定,目前尚無(wú)統(tǒng)一的參考方法，美國(guó)CDC的參考方法為二氯甲烷硫酸變色酸法，衛(wèi)生部老年所擬推我國(guó)的TG參考方法為HLPC法 TG又稱(chēng)中性脂肪，由于其甘油骨架上分別結(jié)合了3分子脂肪酸，2分子脂肪酸和1分子脂肪酸,TG的測(cè)定方法,（1）化學(xué)法 提取、

17、分離、皂化、甘油糖的氧化和顯色 （2）酶法 氧化酶法推薦常規(guī)方法,酶氧化法測(cè)定TG的原理,脂肪酶（LPC） 甘油三酯 甘油 游離 脂肪酸 甘油激酶（GK） 甘油 ATP 甘油3磷酸 ADP 甘油3磷酸氧化酶 甘油3磷酸 磷酸二羥丙酮 H2O2 H2O2酶 H2O2 4氨基安替吡啉 萘酚 紅色醌亞胺 H2O,（三）HDL的測(cè)定,1.超速離心法 美國(guó)參考方法 要求： a .離心率4000r/min,18.5h,去除富含TG的脂蛋白（CM、HDL） B.下層懸浮液用肝素MnCL2 離心沉淀（1500g,30min） C .用CDC參考方法測(cè)定血脂的含量,2.化學(xué)沉淀法,多用磷鎢酸鎂沉淀法 衛(wèi)生部推薦

18、法 原理：一些陰離子（如磷鎢酸）與非離子多聚體或某些二價(jià)陽(yáng)離子合用可使除HDL外的含ApoB的脂蛋白都沉淀，然后在行血脂的測(cè)定 優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)、適用于普通實(shí)驗(yàn)室 缺點(diǎn)：易受高TG的干擾，使沉淀后的上清液呈混濁狀，且鎂離子可抑制酶法測(cè)TC的酶活性。,3直接測(cè)定法,（1）PEG修飾法 PEG修飾酶對(duì)不同的脂蛋白中的膽固醇有選擇性，其催化次序LDLVLDLCMHDL （2）選擇抑制法應(yīng)用兩種不同的表面活性劑及多聚陰離子根據(jù)酶反應(yīng)的選擇性直接測(cè)定HDL （3）免疫分離法 用PEG和抗B，C抗體包裹非HDL的脂蛋白然后分析HDL的方法,（四）LDL測(cè)定方法,（1）friedewald計(jì)算法 1972年friedewald發(fā)明的經(jīng)驗(yàn)公式 LDLTCHDL TG5 條件： 空腹上清液中不含CM不是乳糜血 TG濃度低于4.6mmol/L 型高脂血癥（IDL增加）除外。,（2）免疫分離法,1993年leary報(bào)道：用PEG使抗E、A多克隆抗體的膠化株結(jié)合血清中，使HDL（A/E）IDL（E）VLDL（E）和CM（AE）與分離試劑中的抗體反應(yīng)結(jié)合然后分離沉淀。取上清液酶法測(cè)定LDL含量 代表試劑：美國(guó)sigma公司試劑,（3）均項(xiàng)測(cè)定法,（1）表面活性劑法使