微生物的培養(yǎng).ppt

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),微生物,原核類:,真核類,非細(xì)胞類：,細(xì)菌、支原體、放線菌、藍(lán)藻,個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,酵母菌、霉菌、食用菌,真菌：,原生生物：,顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）,病毒、類病毒、朊病毒,微生物的共同特點(diǎn)：,微生物基礎(chǔ)知識(shí),了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。,一、課題目標(biāo)：,掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。,無菌技術(shù)的操作。,二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：,三、技能目標(biāo)：,一、培養(yǎng)基,不加凝固劑,加凝固劑，如瓊脂,工業(yè)生產(chǎn),觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分

2、類鑒定,微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種,含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì),工業(yè)生產(chǎn),培養(yǎng)基成分明確,分類、鑒定,在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng),培養(yǎng)、分離出特定微生物,在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物,鑒別不同種類微生物,選擇培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基,半固體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：,微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)及功能,1.碳源 2.氮源 3.生長(zhǎng)因子 4.無機(jī)鹽 5.水,：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。,無機(jī)碳源：CO2；NaHCO3等,有機(jī)碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等,構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)

3、和一些代謝產(chǎn)物 異養(yǎng)微生物的能源,.概念,.來源：,.作用：,1.微生物的碳源,無機(jī)氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。,有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等,凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營養(yǎng)物質(zhì)。,主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物。,2.微生物的氮源,.概念：,.來源：,.作用：,3.生長(zhǎng)因子,.常見的生長(zhǎng)因子：,.概念：,.作用：,微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。,酶和核酸的組成成分。,維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。,思考： 1. 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵？ 2. 無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？（P15旁欄思考）,無菌技術(shù)還能有效避免

4、操作者自身被微生物感染。,二.無菌技術(shù),防止外來雜菌的入侵,消毒與滅菌的比較,煮沸消毒法：100煮沸5-6min。 巴氏消毒法：70-75下煮30min或 80下煮15min。 化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒；氯氣消毒水源。 紫外線消毒。,.消毒的方法：,3.常用的消毒與滅菌的方法,（2）滅菌,a 灼燒滅菌 b 干熱滅菌 c 高壓蒸汽滅菌,灼燒滅菌,微生物的接種工具 (接種環(huán)、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒,注意適用范圍,干熱滅菌 160170 ；12h,能耐高溫的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿),高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30min,通

5、常用于培養(yǎng)基的滅菌,請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 玻棒、試管、燒瓶和吸管 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手,答：（1）、（2）需要滅菌； （3）需要消毒。,P16旁欄思考,二.實(shí)驗(yàn)操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例),.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,1.計(jì)算 2.稱量 3.溶化 4.滅菌: 將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121，滅菌1530min。 5.倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到50 左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。,倒平板操作,答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手

6、時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。,2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？,答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。,問題討論,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培

7、養(yǎng)微生物。,純化大腸桿菌,接種方法有： 平板劃線法和稀釋涂布平板法,劃線后 培養(yǎng)一段時(shí)間后,答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,問題討論,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)

8、行劃線？,答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。,問題討論,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？,應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。,四、課題成果評(píng)價(jià),（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后