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1、,臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn),第一節(jié) 血液及骨髓標(biāo)本 一、血液標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 靜脈采血,應(yīng)嚴(yán)格消毒血培養(yǎng)瓶蓋和皮膚,用無(wú)菌采血裝置采血,不換針頭,直接將血液標(biāo)本注入血培養(yǎng)瓶中,注入血液后應(yīng)顛倒混勻以防凝固。采用真空采血裝置可降低污染。,1、采血時(shí)間 一般應(yīng)在抗菌藥物治療前,發(fā)熱初期或高峰時(shí)抽血。研究表明細(xì)菌通常在寒戰(zhàn)或發(fā)熱前1h入血,因?yàn)槌^(guò)發(fā)熱峰值后,病原菌的檢出率會(huì)隨之降低。對(duì)間歇性菌血癥應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前采集血培養(yǎng),因?yàn)榧?xì)菌流入血液與發(fā)熱通常間隔1h,實(shí)際上在發(fā)熱后由于細(xì)菌很快會(huì)從血液中清除,因此,應(yīng)盡快抽取血培養(yǎng)。,2、采血部位 以無(wú)菌操作在患者肘靜脈采血。兒童和嬰幼兒其采血的
2、部位多為頸部和腹股溝,這兩個(gè)部位皮膚皺褶多,易造成皮膚寄生菌污染,因此必須嚴(yán)格消毒。消毒過(guò)程同成人,但氯己定(洗必泰)不能用于2個(gè)月以下嬰兒。成人不建議采集動(dòng)脈血,不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口取血,因其常伴有高污染率。如果必須從留置導(dǎo)管內(nèi)采血,必須同時(shí)從外周靜脈采集另外一個(gè)血培養(yǎng)標(biāo)本,有助于對(duì)比和結(jié)果解釋。靜脈導(dǎo)管采血時(shí),不要棄去初段血,不要用抗凝劑沖洗。,3、采血量 成年患者推薦的采血量為每套不少于10ml,每瓶不少于5ml,最好為20ml血液,分注在2個(gè)血培養(yǎng)瓶(需氧瓶+厭氧瓶)內(nèi)。2套血培養(yǎng)(4個(gè)血培養(yǎng)瓶)應(yīng)至少接種20ml血液。當(dāng)培養(yǎng)的血量從2ml增加到20ml時(shí),血培養(yǎng)的陽(yáng)性率增加30
3、%50%,因?yàn)榕囵B(yǎng)的血液量每增加1ml,陽(yáng)性率增加3%5%,因此采血量與陽(yáng)性檢出率呈正比關(guān)系。 用靜脈穿刺獲得的血量,成人和兒童不同。兒童,特別是新生兒很難獲得大量的血液,對(duì)嬰幼兒和兒童,一般靜脈采血15ml,當(dāng)細(xì)菌濃度足夠高時(shí),血液少于1ml也足以檢測(cè)菌血癥。標(biāo)本量1ml,細(xì)菌量也增加,對(duì)于受感染的兒童每毫升血液的含菌量比成人多。,4、血培養(yǎng)套數(shù) 疑似菌血癥患者應(yīng)至少采集2套血培養(yǎng),最好為3套,每套血培養(yǎng)應(yīng)包括1個(gè)需氧培養(yǎng)瓶和1個(gè)厭氧培養(yǎng)瓶。一個(gè)靜脈穿刺點(diǎn)只能采集一套血培養(yǎng),采集2套血培養(yǎng)應(yīng)選擇第2個(gè)靜脈穿刺點(diǎn)。嬰幼兒患者,推薦在不同部位同時(shí)采集2套。對(duì)感染性心內(nèi)膜炎和真菌血癥患者則應(yīng)多次采
4、集。有研究表明:一套血培養(yǎng)的陽(yáng)性率為65%,兩套血培養(yǎng)的陽(yáng)性率為80%,三套血培養(yǎng)的陽(yáng)性率為96%。,二、骨髓標(biāo)本 正常人的骨髓是無(wú)菌的。若從患者骨髓中檢出細(xì)菌(排出污染),提示細(xì)菌性骨髓炎或菌血癥,敗血癥。常見(jiàn)病原菌同血液培養(yǎng)。 (一)標(biāo)本采集 1、標(biāo)本采集部位和時(shí)間 一般用骨髓穿刺針從髂骨采集骨髓標(biāo)本。最好在用藥前、寒戰(zhàn)前或寒戰(zhàn)后1h發(fā)熱初期或高熱期采樣,陽(yáng)性檢出率較高。 2、標(biāo)本采集注意事項(xiàng) 嚴(yán)格無(wú)菌操作 標(biāo)本采集后立即注入血培養(yǎng)瓶,送檢。,第二節(jié) 腦脊液標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 由臨床醫(yī)師以無(wú)菌操作作腰椎穿刺,抽取腦脊液23ml,盛于無(wú)菌容器中送檢。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶酶,迅速自溶
5、,肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌離體后也易死亡。因此,腦脊液無(wú)論涂片或培養(yǎng),必須于采集后立即送檢,不宜將其置于冰箱保存,否則影響檢出率。,第三節(jié)呼吸系統(tǒng)標(biāo)本 一、痰標(biāo)本 (一)送檢指征 1、咳嗽 咳出的是膿性痰或鐵銹樣的痰。 2、咯血 獻(xiàn)血和痰中帶血等。 3、呼吸困難 呼吸急促或哮喘,常伴有胸痛。 4、發(fā)熱 伴有白細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞升高或C反應(yīng)蛋白(CRP)明顯增高。,(二)標(biāo)本采集 、采集時(shí)間 一般以晨痰為好;支氣管擴(kuò)張癥患者清晨起床后進(jìn)行體位引流,可采集大量痰標(biāo)本。 2、標(biāo)本采集方法 (1)自然咳痰法 在留取痰之前,用清水反復(fù)漱口,以減少常居菌的污染,應(yīng)從氣管深部咳出痰,吐入無(wú)菌容器內(nèi)。 (2)
6、氣管鏡下采集法:在病灶附近用導(dǎo)管吸或用支氣管刷直接取得標(biāo)本。 (3)氣管穿刺法:在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液,收集標(biāo)本。,二、咽拭標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 用無(wú)菌棉試子輕輕擦拭患者鼻咽部粘膜,留取標(biāo)本,置無(wú)菌試管內(nèi)送檢。,第四節(jié) 穿刺也標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 采用無(wú)菌方法,用注射器抽取體內(nèi)可疑感染部位的液體(胸腔積液、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液或鞘膜液等)注無(wú)菌試管立即送檢。如懷疑厭氧菌感染,應(yīng)做床邊接種。,第五節(jié) 泌尿、生殖道標(biāo)本 一、尿液標(biāo)本 (一)尿培養(yǎng)的臨床指征 以下任何一種情況時(shí)建議采集尿標(biāo)本,進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。 尿痛、尿急、尿頻等典型的尿路感染癥狀。 出現(xiàn)血尿和膿尿。 膀胱排空功能受損。 泌尿系統(tǒng)疾病手
7、術(shù)前。 留置導(dǎo)尿管時(shí)間太長(zhǎng),患者出現(xiàn)發(fā)熱。 尿常規(guī)中白細(xì)胞高或(或)亞硝酸鹽陽(yáng)性。,(二)標(biāo)本采集與運(yùn)送 (1)女性:成年女性外陰部先以肥皂水清洗,再以無(wú)菌水沖洗,用無(wú)菌紗布擦拭,以手指將陰唇分開(kāi)排尿,棄去前段尿,留取中段尿57ml于無(wú)菌試管內(nèi)。 (2)男性:翻轉(zhuǎn)包皮,用肥皂水清洗尿道口,用清水沖洗,留取中段尿。,(3)兒童、嬰兒:先以無(wú)菌生理鹽水棉球洗凈其外陰部或外生殖器,將無(wú)菌試管或瓶對(duì)準(zhǔn)尿道口,以膠布固定于皮膚上,待尿排出后送檢。 (4)兩側(cè)腎盂尿:由專(zhuān)科醫(yī)師采集,必須標(biāo)明左右側(cè)標(biāo)本,避免混淆而誤診。 (5)膀胱穿刺:此法用于厭氧菌培養(yǎng)。恥骨上皮膚經(jīng)碘酊消毒后,再以75%乙醇擦拭,用無(wú)菌
8、注射器作膀胱穿刺,吸取尿液后排去注射器內(nèi)的空氣,針頭插于無(wú)菌橡皮塞上送檢。 (6)尿標(biāo)本采集應(yīng)及時(shí)送檢,2h內(nèi)進(jìn)行接種,否則應(yīng)置48冰箱保存,冷卻保存標(biāo)本時(shí)間不得超過(guò)8h。,二、生殖道標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 1、女性生殖道標(biāo)本 由婦產(chǎn)科醫(yī)師用無(wú)菌棉拭采集陰道,宮頸分泌物。懷疑盆腔厭氧菌感染時(shí),由婦產(chǎn)科醫(yī)師用注射器從陰道后穹處穿刺抽取標(biāo)本,立即床邊接種于厭氧平板。 2、男性生殖道標(biāo)本 翻轉(zhuǎn)包皮,用肥皂水清洗尿道口,清水沖洗,采集尿道口分泌物。采集前列腺液時(shí),先沖洗尿道和膀胱,用手指從肛門(mén)內(nèi)按摩前列腺,使前列腺液溢出。,第六節(jié) 糞便標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 1、自然排便 采集自然排便后,挑取其膿血、粘液部分23g,液體糞便取絮狀物23ml,盛于滅菌容器內(nèi)或置于保存液(運(yùn)送培養(yǎng)基)、增菌培養(yǎng)基中送檢。 2、直腸試子 對(duì)排便困難患者及嬰兒,可用直腸試子采取,即以無(wú)菌棉拭用保存液或生理鹽水濕潤(rùn)后,插入肛門(mén)內(nèi)45cm(幼兒23cm)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)取出,插入卡布運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)或無(wú)菌試管內(nèi)送檢。,第七節(jié) 膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本 (一)標(biāo)本采集 1、開(kāi)放性膿腫和膿性分泌物 先以無(wú)菌鹽水沖洗潰瘍表面,用2支滅菌棉試取潰瘍深處的分泌物后插入斯式運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。一支為涂片檢查
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