細(xì)胞因子分析檢測(cè).ppt

1、細(xì)胞因子及其生物活性檢測(cè),細(xì)胞因子的分類及生理功能 細(xì)胞因子在免疫功能檢測(cè)中的應(yīng)用 細(xì)胞因子的檢測(cè)方法,細(xì)胞因子簡(jiǎn)介,細(xì)胞因子是聯(lián)系細(xì)胞間相互作用的一種化學(xué)物質(zhì)，他們是蛋白或糖蛋白質(zhì)，由一組細(xì)胞分泌，同類細(xì)胞或其他細(xì)胞通過特殊受體來識(shí)別之細(xì)胞因子最早是從淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的，故曾被稱為淋巴因子或單核因子。以后發(fā)現(xiàn)有一大群細(xì)胞，具有分泌這些蛋白，對(duì)本身或其他細(xì)胞有抑制或激活等特殊反應(yīng)。細(xì)菌、病毒等微生物與物理或化學(xué)因素對(duì)機(jī)體的損傷都可以激發(fā)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，而細(xì)胞因子又能殺滅細(xì)菌和抑制病毒，達(dá)到保護(hù)機(jī)體的目的。一個(gè)細(xì)胞因子被激活通過連鎖反應(yīng)帶動(dòng)很多其他細(xì)胞和細(xì)胞因子參與機(jī)體的防御反應(yīng)。

2、一種細(xì)胞因子可有多種不同功能，不同的細(xì)胞因子可以產(chǎn)生相同的作用。,細(xì)胞因子的分類,細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子。 它們能通過受體介導(dǎo)，以旁分泌和(或)自分泌的方式參與體內(nèi)復(fù)雜的細(xì)胞-細(xì)胞調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。 在免疫調(diào)節(jié)、免疫效應(yīng)、細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化等方面具有重要的生物學(xué)功能。,幾類細(xì)胞因子的功能白細(xì)胞介素,白細(xì)胞介素(Interleukine，IL) 由淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和其它細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，在免疫調(diào)節(jié)、 造血及炎癥過程中起重要作用。目前報(bào)道的有IL-1IL-18。,干擾素,干擾素(Interferon，IFN) 因最初發(fā)現(xiàn)它是在病毒感染細(xì)胞后產(chǎn)生的

3、可干擾另一種病毒感染和復(fù)制的物質(zhì)而得名。 在免疫調(diào)節(jié)、抗病毒感染及抗腫瘤免疫中具有重要作用。,腫瘤壞死因子,腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF) 因它能使腫瘤細(xì)胞壞死而得名。具有免疫調(diào)節(jié)、腫瘤殺傷及參與炎癥和發(fā)熱反應(yīng)。,集落刺激因子,集落刺激因子(Colony Stimulating Factor，CSF) 根據(jù)不同細(xì)胞因子刺激造血干細(xì)胞或分化不同階段的造血細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基上形成的不同細(xì)胞集落而分別命名為：G-CSF、M-CSF、GM-CSF、Multi-CSF、SCF和EPO等。,趨化因子,趨化因子的生物學(xué)作用也是由其相應(yīng)的受體介導(dǎo)的，趨化因子受體為跨膜的多肽

4、蛋白，其信號(hào)傳遞分子為G蛋白， 此類受體也可根據(jù)其配基的不同分為CXC受體(CXCR)和CC受體(CCR)。其中有的受體不但能與趨化因子結(jié)合， 而且還是某些病毒的受體或共受體。因此，趨化因子受體的表達(dá)與某些疾病的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系。 最近的研究發(fā)現(xiàn)，某些趨化因子的受體為人免疫缺陷病毒(HIV)的共受體。,防御素,防御素(defensins)當(dāng)微生物入侵機(jī)體時(shí)，中性粒細(xì)胞在趨化因子的作用下迅速動(dòng)員起來，聚集在感染部位，開始其吞噬與殺菌過程。目前已知中性粒細(xì)胞有兩種殺菌機(jī)制和一種顆粒組分的殺菌作用,生長(zhǎng)因子,生長(zhǎng)因子是調(diào)節(jié)細(xì)胞增值和分化的一類物質(zhì)，其分子量從幾百到幾萬不等，習(xí)慣上稱多肽生長(zhǎng)因子。

5、與經(jīng)典的多肽和蛋白質(zhì)激素相比，多肽生長(zhǎng)因子沒有特定的內(nèi)分泌腺和內(nèi)分泌細(xì)胞，而是通過一些細(xì)胞的膀分泌和自分泌釋放并擴(kuò)散到靶細(xì)胞，從而協(xié)調(diào)機(jī)體自身的統(tǒng)一和對(duì)外界的反應(yīng)。 表皮生長(zhǎng)因子能促進(jìn)表皮細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，加速受傷表皮細(xì)胞的修復(fù)，還有抑制胃酸分泌等特殊的效果，在醫(yī)藥上有很廣的用途。表皮生長(zhǎng)因子也楞用于化妝品領(lǐng)域，它能起到延緩皮膚細(xì)胞衰老，使皮膚滋潤(rùn)光滑的作用。,細(xì)胞因子與感染,細(xì)菌或其他微生物侵入體內(nèi)，首先被巨噬細(xì)胞吞噬，巨噬細(xì)胞就釋放IL-1、IL-6、TNF和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，臨床出現(xiàn)發(fā)熱，G-CSF，GM-CSF由IL-1激活巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，促使中性粒細(xì)胞從骨

6、髓釋放，以致臨床上有細(xì)菌感染后白細(xì)胞升高，IL-1和IL-6共同激活CD4與CD8淋巴細(xì)胞，并使之增殖分化，CD4細(xì)胞受IL-1刺激產(chǎn)生IL-2和IFN；IFN反過來再刺激巨噬細(xì)胞造成循環(huán)，IL-2又再刺激CD4淋巴細(xì)胞亦形成循環(huán)；CD4細(xì)胞使B淋巴細(xì)胞增生轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，分泌更多的抗體，抗體又可與中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞相結(jié)合加強(qiáng)殺傷細(xì)菌的作用。經(jīng)微生物致敏的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF，如系少量則有利于免疫功能和機(jī)體恢復(fù)，大量則免疫反應(yīng)加劇，組織損傷嚴(yán)重，臨床病情危重，常出現(xiàn)休克、DIC等，即使積極搶救，病死率也很高。一次感染后對(duì)抗原的特異性能通過CD4和CD8細(xì)胞將信息傳給記憶細(xì)胞永久存在，再

7、次感染時(shí)它會(huì)將信息傳給CD4和CD8細(xì)胞使抗體很快上升，免疫反應(yīng)亦能增強(qiáng)。,細(xì)胞因子水平的檢測(cè),目前檢測(cè)細(xì)胞因子水平主要包括： 一、生物學(xué)活性的檢測(cè)，這類方法是利用細(xì)胞因子某一特定的生物學(xué)作用所設(shè)計(jì)的檢測(cè)方法，如IL-2維持活化T細(xì)胞的增殖，IFN能保護(hù)病毒對(duì)正常細(xì)胞的感染， TNF-選擇性殺某些腫瘤細(xì)胞等，因此敏感性也較高； 二、定量的檢測(cè)，常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)， 如多克隆抗體與單克隆抗體，識(shí)別不同表位兩種單克隆抗體的雙抗體夾心法，生物學(xué)和定量的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)， 在必要時(shí)可同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。 三、最近又有人用RT-PCR定量的方法檢測(cè)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)水平 四、流式細(xì)胞儀免

8、疫熒光抗體檢測(cè),細(xì)胞因子檢測(cè)的意義,當(dāng)今大部分疾病都與免疫學(xué)相關(guān)，因此研究免疫系統(tǒng)細(xì)胞作用方式及其相互聯(lián)系是非常重要的，而細(xì)胞因子在免疫系統(tǒng)中的中心地位已得到公認(rèn)，細(xì)胞因子水平成為衡量機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要標(biāo)志,在AIDS病人中測(cè)量細(xì)胞因子進(jìn)一步了解病人的免疫狀態(tài)對(duì)了解病情，掌握病程，確定治療的效果是極有用的，因此美國(guó)AIDS臨床試驗(yàn)計(jì)劃(Aids Clinicatrial Group)要求所有實(shí)驗(yàn)室在試用抗AIDC藥物時(shí)檢測(cè)TNF一1,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎研究已清楚地表明TNF一，ILl和IL-6水平在此類病人中有明顯的相關(guān)性，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎SIL-2R水平明顯增加，這一結(jié)果有助于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診

9、斷和療效的判定，因此許多國(guó)外有抗風(fēng)濕類藥物因子試劑盒檢測(cè)其效果。,肝病病人血清中IL-2及淋巴細(xì)胞分泌IL-2的能力，提示肝硬化，慢活肝及急性肝炎患者的細(xì)胞免疫功能低下。 慢性肝炎(CH)患者IL-6，INF一水平最高，恢復(fù)期或穩(wěn)定期TNF一和IL-6水平低于急性期或活動(dòng)期，提示IL-6和丁NF一是肝臟損害重要的炎癥介質(zhì)。,肝癌、肺癌、乳腺癌患者干擾素水平顯著。鼻咽癌患者急性期、口腔額面部惡性腫瘤患者血清SIL-2R水平顯著。膀胱癌患者血清SIL-2R顯著高于正常人，與腫瘤分期與預(yù)后有關(guān)。,總之，在當(dāng)代醫(yī)學(xué)中，細(xì)胞因子在腫瘤，感染，自身免疫炎癥反應(yīng)，血液病，傷口愈合，胚胎發(fā)生等方面均起重要作用，目前的工作僅僅是開端，更多的機(jī)理，相互影響和毒創(chuàng)