第六章 食品安全檢測(cè)技術(shù).ppt

1、食品安全檢測(cè)技術(shù),食品中不安全因素的確定,定性分析 毒性檢測(cè)通常是大鼠或小鼠作為“動(dòng)物模型”來進(jìn)行驗(yàn)證驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。首先要將食物分成不同的組分，并監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)每一種組分的毒性。具有毒性的組分被進(jìn)一步分離檢驗(yàn)，直到純的毒物被分離出來。毒物的化學(xué)結(jié)構(gòu)可以通過各種光譜分析進(jìn)行確認(rèn)。,定量分析 一、樣品采集 二、樣品的萃取和凈化 三、各種定量分析技術(shù) （色譜分析技術(shù)、PCR技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、傳感器技術(shù)等等）,食品安全檢測(cè)技術(shù),色譜技術(shù) PCR技術(shù) 生物芯片 酶聯(lián)免疫技術(shù) 傳感器技術(shù),色譜技術(shù),色譜技術(shù)發(fā)展史,茨維特實(shí)驗(yàn),1906年，茨維特利用不同色素在活性碳酸鈣與石油醚的共同作用之下在玻璃柱中呈現(xiàn)出不同

2、的運(yùn)行速度，能使其達(dá)到彼此分離。,在柱中出現(xiàn)的有顏色的色帶叫做色譜圖（chromatogram）。,填充CaCO3的玻璃柱管叫做色譜柱（column）,具有大表面積的CaCO3固體顆粒稱為固定相(stationary phase)，,推動(dòng)被分離的組分（色素）流過固定相的惰性流體（上述實(shí)驗(yàn)用的是石油醚）稱為流動(dòng)相（mobile phase）,茨維特在他的原始論文中，把上述分離方法叫做色譜法（chromatography）,色譜法的分類1,按固定相和流動(dòng)相所處的狀態(tài)分類,色譜法的分類2,按固定相性質(zhì)和操作方式分類,色譜法的分類3,按色譜分離過程的物理化學(xué)原理分類,目前，應(yīng)用最廣泛的是氣相色譜法（g

3、as chromatography，GC）和高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）。,氣相色譜,氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）,質(zhì)譜技術(shù),Name: Glycine Formula: C2H5NO2 MW: 75 CAS#: 56-40-6 NIST#: 229287 NIST#: 810 DB: mainlib Other DBs: Fine, TSCA, RTECS, USP, HODOC, NIH, EINECS Contributor: Japan AIST/NIMC Database- Spectrum MS-N

4、W- 601 10 largest peaks: 30 999 |28 80 |18 77 |44 57 |29 45 | 75 36 |27 32 |45 27 |31 20 |17 17 |,Data from NIST/EPA/NIH質(zhì)譜庫,GC-MS,氣相色譜在食品安全中的應(yīng)用,農(nóng)藥殘留的檢測(cè) GC/FPD-檢測(cè)有機(jī)磷和有機(jī)硫農(nóng)藥殘留 GC/ECD-檢測(cè)有機(jī)氯 GC/NPD-檢測(cè)有機(jī)氯和有機(jī)磷 GC/MS-通用的高靈敏度，高選擇性農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法（NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫）,液相色譜,液相色譜在食品安全中的應(yīng)用,食品添加劑及農(nóng)藥殘留的檢測(cè)（蘇丹I號(hào)、擬除蟲菊酯等） 食品中獸藥殘留的檢測(cè)（瘦肉精

5、、磺胺類藥物等） 食品加工過程中的毒素殘留（黃曲霉素等）,PCR技術(shù),PCR 原理,PCR技術(shù)在食品安全中的應(yīng)用,食品中有害微生物的檢測(cè)（沙門菌、大腸桿菌O157、金黃色葡萄球菌等） 轉(zhuǎn)基因食品,杜邦Qualicon,RiboPrinter 全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng),BAX系統(tǒng)目前可檢測(cè)： 沙門氏菌， 大腸桿菌O157:H7, 單增李斯特菌， 李斯特菌， 板歧腸桿菌,可鑒定到菌株。開放式的數(shù)據(jù)庫（菌庫）內(nèi)有5700多種基因指紋模式，歸屬180余屬，1200余種。包括腐敗菌、病原菌、有益菌及環(huán)境微生物。另外，用戶可自建菌庫。,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (ELISA),ELISA的種類和變化,（一）雙抗體夾

6、心法 （二）間接法 （三）競(jìng)爭(zhēng)法 （四）雙位點(diǎn)一步法 （五）捕獲法測(cè)IgM抗體 （六）應(yīng)用親和素和生物素的ELISA,雙抗體夾心法,間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。,此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體 。,ELISA原理,它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。 測(cè)量時(shí)，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標(biāo)記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的

7、抗原（抗體）反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。,ELISA在食品安全中的應(yīng)用,食品中農(nóng)藥、獸藥的測(cè)定 食品中毒素的測(cè)定（主要包括黃曲霉毒素， 簡(jiǎn)曲霉毒素 ） 食品中有害微生物的快速篩檢 （如沙門氏菌 ）,生物芯片技術(shù),Different DNA probes (各種 DNA 探針 ),Clinical DNA Samples (臨床樣本),Microarray (微陣列過程),Hybridization (雜交過程),Scanning (掃描過程),Glass slide (玻片),Image analysis (芯片圖象分析),基因芯片的制造與檢測(cè)技術(shù),Lu

8、minescence or electrochemical detection,Gene Expression,(1) Identification of all common variants,(2) Simultaneous monitoring of the expression of all genes,(3) Generic tools for manipulating cell circuitry,(4) Re-sequencing of megabase regions,(5) Monitoring the levels and modification state of all

9、 proteins,(6) Systematic catalogues of protein interactions,(7) Identification of all basic protein shapes,SYT13,Mutation detection SNP: Single Nucleotide Polymorphysm,-gtacatcaggatcgatacgtagctagctagctaaaatcgatcatccacatccgtac -cgtagctaactagctaaaatcgatcatccaca- -cgtagctagctagctagaatcgatcatccaca- -cgt

10、agctagctagctaaaatcgattatccaca-,cgtagctagctagctaa,labeling hybridization,cgtagctaactagctaa,Wild: Mutant 1: Mutant 2: Mutant 3:,aatcgatcatccaca,aatcgattatccaca,tagctaaaatcga,tagctagaatcga,Fabrication of DNA Microarray(DNA芯片制作技術(shù)類型),In situ DNA probe synthesis on chip surface -Photolithography (光 刻 技 術(shù)) Direct deposition of DNA probes on chip surface -Microspotting/ink-jet printing (打印技術(shù)),Light directed DNA probe synthesis,(光導(dǎo)向探針合成技術(shù))-Photolithography,Microspotting Technology (探針打印技術(shù)),Chemically-treated glass slide or silicon wafer,高密度點(diǎn)樣機(jī),D