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文檔簡介

第三節(jié) 細胞融合技術,一、實驗目的,了解細胞融合的原理 初步掌握聚乙二醇法誘導細胞融合的實驗 方法。,二、實驗內容,實驗原理 細胞融合是指在自然條件或利用人工方法（生物的、物理的，化學的），使兩個或兩個以上的細胞合并成一個具有雙核或多核細胞的過程。利用人工誘導方法，不僅可以使同種細胞發(fā)生融合，而且可以使不同種間細胞發(fā)生融合。 人工誘導的方法很多，如：聚乙二醇（PEG）法、滅活的仙臺病毒誘導法、電場融合法等。,聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）法的原理：PEG分子能改變各類細胞的膜結構，使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細胞接口處雙分子層質膜的相互親合以及彼此的表面張力作用，使細胞發(fā)生融合。,實驗方法 1. 處死蟾蜍。 2. 取血：注射器內吸取1ml Alsver液，再吸取1ml蛙血，加入已盛有8ml Alsver液的玻璃離心管。 3. 分別取1ml細胞懸液移入塑料離心管中，加入0.85%生理鹽水4ml混勻，1200r/min，離心5min。 4. 棄去上清液，再加入0.85%生理鹽水至5ml，混勻，離心。 5. 重復步驟4。,6收集最后一次離心沉淀的血細胞，加入1mlGKN液混勻。（按壓積紅細胞體積配成10%的紅細胞懸液） 7再加入0.5ml預熱的50%PEG混勻，室溫下分別于2min、15min取一滴該懸液于干凈的載玻片上，蓋上

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