自身免疫病及免疫檢驗(yàn)

1、,免疫學(xué)檢驗(yàn),第二十五章 自身免疫病及免疫檢驗(yàn),目錄,1.自身耐受(self-tolerance) 正常情況下，免疫系統(tǒng)對(duì)宿主自身的組織和細(xì)胞不產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 2.自身免疫 (autoimmunity) 當(dāng)某種原因使自身耐受性破壞時(shí)，免疫系統(tǒng)就會(huì)對(duì)自身組織成分、細(xì)胞成分及其產(chǎn)物發(fā)生免疫應(yīng)答。,第一節(jié) 概述,一、基本知識(shí),3.自身免疫病(autoimmune disease，AID) 自身免疫應(yīng)答過(guò)強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過(guò)久，表現(xiàn)為質(zhì)和量的異常，所產(chǎn)生的自身抗體和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞對(duì)表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動(dòng)攻擊，導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙，并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀。,二、自身免疫病的分類(lèi),1.按病程分為急性和

2、慢性?xún)煞N 2.按病因清楚與否分為原發(fā)性與繼發(fā)性?xún)煞N 3.按受累的解剖系統(tǒng)分為結(jié)締組織病、神經(jīng)肌肉疾病、消化系統(tǒng)病和內(nèi)分泌疾病等 4.按自身抗原的分布范圍分為器官特異性和非器官特異性?xún)深?lèi),按發(fā)病部位的解剖系統(tǒng)分類(lèi),器官特異性自身免疫病,器官非特異性自身免疫病,患者的病變常局限于某一特定的器官，由對(duì)器官的特異性抗原的免疫應(yīng)答引起,全身性或系統(tǒng)性自身免疫性疾病；患者的病變可見(jiàn)于多種器官及結(jié)締組織（結(jié)締組織病或膠原病）,按自身抗原的分布范圍分類(lèi),三、自身免疫病的共同特點(diǎn),1. 血清中有自身抗體或自身反應(yīng)性致敏T淋巴細(xì)胞。自身抗體和（或）自身反應(yīng)性T細(xì)胞作用于靶抗原所在的組織細(xì)胞，導(dǎo)致組織損傷和功能障礙

3、。 2.可復(fù)制出與AID相似的動(dòng)物模型，并可通過(guò)血清或致敏的淋巴細(xì)胞使疾病被動(dòng)轉(zhuǎn)移。 3有一定的遺傳傾向。病情轉(zhuǎn)歸與自身免疫反應(yīng)的強(qiáng)度密切相關(guān)。 4部分自身免疫病好發(fā)于女性，且發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而上升。 5免疫抑制劑治療有效但不能根治。,一、自身抗原形成,第二節(jié) 自身免疫病的發(fā)病機(jī)制,1.隱蔽抗原的釋放,2.自身抗原改變,交感性眼炎,3.分子模擬,4表位擴(kuò)展,2.B細(xì)胞的多克隆激活,二、免疫細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)功能的異常,3.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能異常,1.T、B細(xì)胞的異?；罨?4. MHC-II類(lèi)分子異常表達(dá),三、遺傳因素,HLA 基因與自身免疫病相關(guān)性舉例,四、生理因素,五、環(huán)境因素,1.自身免疫病的

4、發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)； 2.自身免疫病的發(fā)病也具有明顯的性別差異，女性發(fā)病率較高,自身免疫病的發(fā)生與日曬、潮濕、寒冷等環(huán)境因素可能有關(guān)。,1.自身抗體介導(dǎo)細(xì)胞破壞,六、自身免疫病的病理?yè)p傷機(jī)制,病理機(jī)制：II型超敏反應(yīng),常見(jiàn)疾?。盒律鷥喝茇?、重癥肌無(wú)力、Graves病,自身免疫性溶血性貧血,重癥肌無(wú)力,Graves病,3.自身反應(yīng)性T細(xì)胞引發(fā)炎癥性損傷,2.循環(huán)免疫復(fù)合物介導(dǎo)組織損傷,病理機(jī)制：III型超敏反應(yīng),病理機(jī)制：IV型超敏反應(yīng),抗核抗體（antinuclear antibody，ANA) 是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱(chēng)；在某些因素作用下改變細(xì)胞核某些成分性質(zhì)，激發(fā)

5、機(jī)體產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體。,第三節(jié)自身免疫病檢驗(yàn),一、自身抗體的檢測(cè),（一）抗核抗體檢測(cè),ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE； ANA無(wú)器官特異性和種屬特異性； ANA主要存在于血清中； 將檢出ANA作為AID存在的依據(jù)。,抗DNA抗體：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗組蛋白抗體(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗體等 抗非組蛋白抗體：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗體、 AnuA、抗DNP、抗DM53抗體 抗RANA抗體、抗著絲點(diǎn)、抗Ku抗體等 抗核仁抗體：抗

6、PM-Scl抗體、抗Th/To抗體、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗體等,1.ANA的類(lèi)型和臨床意義,ANA譜,抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗體，又稱(chēng)抗雙鏈DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗體。,抗變性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗體，又稱(chēng)抗單鏈DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗體。,對(duì)SLE有高特異性;SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)之一,緩解期降低,70%90%SLE 活動(dòng)期增高,藥物療效,抗dsDNA抗體,抗DNA抗體,抗組蛋白抗體（anti-histonic antibody,AHA）： 由

7、H1、H2A、H2B、H3和H4五個(gè)亞單位，各自都 有特異性抗體；,AHA,檢 出 百 分 率,抗 dsDNA,50,70,90,100,藥物誘導(dǎo)性狼瘡只能檢出此,SLE,AHA,AHA,抗組蛋白抗體,可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen，ENA) 是鹽水可提取性核抗原的總稱(chēng)，是非組蛋白的核蛋白，屬酸性核蛋白抗原，由許多小分子量的RNA和多 肽組成。,抗ENA抗體,對(duì)類(lèi)風(fēng)濕有特異診斷價(jià)值的ENA： 抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗體； 抗Sm抗體； 抗SSA抗體； 抗SSB抗體； 抗Scl-70抗體； 抗Jo-1抗體； 抗核糖體抗體 。,核蛋

8、白(DNP) 由DNA和蛋白質(zhì)組成。DNP抗原有不溶性及可溶性?xún)煞N，分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。,檢出 百分 率,抗 DNP,20,40,60,80,SLE 非活動(dòng)期,SLE 活動(dòng)期,抗不溶性DNP抗體,抗 DNP,抗 DNP,100,RA滑 膜液中,抗 DNP,抗可溶性DNP抗體,（1）抗DNP抗體,抗核小體抗體（anti-nucleosome antibody，AnuA) 核小體是細(xì)胞核染色質(zhì)的基本組成單位; 細(xì)胞凋亡致核小體大量蓄積，并誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生AnuA AnuA是SLE特異的標(biāo)志性抗體。,抗dsDNA抗體,抗核小體抗體,抗dsDNA和抗Sm陰性的SLE陽(yáng)性 率為60%80%，特異性97%。

9、,（2）抗核小體抗體,2.ANA的檢測(cè)方法,稀釋患者血清可做定量檢測(cè)，1:80稀釋仍呈陽(yáng)性對(duì)診斷SLE有較大參考價(jià)值。,（1）間接熒光免疫法,均質(zhì)型,抗核抗體核型,著絲點(diǎn)型,核仁型,斑點(diǎn)型,用間接ELISA檢測(cè)抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體和抗核小體抗體。,（2）ELISA法,SDS-PAGE,加待檢血清,形成分子大小不同區(qū)帶,分離,電轉(zhuǎn)移,PVDF膜或NC膜,抗ENA與相應(yīng)抗原特異結(jié)合,抗人IgGHRP,ENA抗ENA抗人IgGHRP,（3） 免疫印跡法,顯色并判讀結(jié)果,類(lèi)風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF): 抗變性IgG的自身抗體，可為19S的IgM，也可為7S的IgG和

10、IgA。 可與人變性IgG結(jié)合，但不與正常IgG發(fā)生凝集。 RF可在RA患者檢出，約70%90%的血清、約60%的滑膜液可檢出IgG類(lèi)的RF；,（二）類(lèi)風(fēng)濕因子測(cè)定,IgG類(lèi)抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后發(fā)生變性； 炎癥過(guò)程亦可發(fā)生IgG變性，構(gòu)成自身抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生各種抗IgG抗體； 滑膜液中的IgG類(lèi)RF與變性IgG結(jié)合可形成中等大小的免疫復(fù)合物，相比血清中的IgM類(lèi)RF更易致病。,RF檢測(cè)方法,最常采用的檢測(cè)方法。 以吸附在聚苯乙烯膠乳顆粒上的IgG作診斷試劑，與待檢血清中的RF結(jié)合后，出現(xiàn)膠乳凝集顆粒。此法的靈敏度和特異性不高，且只能檢出血清中的IgM類(lèi)的RF。,1.間接膠乳凝集試驗(yàn),稀釋待檢

11、血清至一定濃度后，加入定量的變性IgG診斷試劑，即用透射比濁或速率散射比濁儀，檢測(cè)血清中的RF。此法快速、敏感性高、精密度高、穩(wěn)定性好、可定量分析，但仍只能檢測(cè)IgM類(lèi)RF。,2.免疫比濁法,IgM、IgG和IgA類(lèi)RF可用ELISA檢測(cè)，臨床上多采用雙抗原夾心法或間接ELISA進(jìn)行測(cè)定。,3. ELISA法,（三）其他自身抗體測(cè)定,二、細(xì)胞檢查,（一）淋巴細(xì)胞檢測(cè),1特異性致敏淋巴細(xì)胞,2淋巴細(xì)胞數(shù)量和比例,如淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)或吞噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn),檢測(cè)淋巴細(xì)胞的總數(shù)、T、B細(xì)胞分類(lèi)與計(jì)數(shù)、CD4/CD8亞群比例等進(jìn)行,（二）狼瘡（lupus erythmatosus，LE）細(xì)胞試驗(yàn),LE細(xì)

12、胞為胞漿內(nèi)含有大塊狀聚合DNA的中性粒細(xì)胞。 有7580的SLE病人LE呈陽(yáng)性，RA、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎、多發(fā)性硬化癥、硬皮病、部分肝炎、皮肌炎和變態(tài)反應(yīng)病等偶爾亦可呈陽(yáng)性反應(yīng)。,三、免疫復(fù)合物和補(bǔ)體檢測(cè),四、細(xì)胞因子檢測(cè),1.CK在自身免疫病的免疫病理?yè)p傷中有重要作用。 2.檢測(cè)CK，對(duì)研究疾病的發(fā)生機(jī)制、了解病情、指導(dǎo)治療均有意義。,對(duì)診斷部分自身免疫病和判斷疾病的活動(dòng)情況有一定的意義。,1.篩選試驗(yàn)與確診性試驗(yàn)的合理組合。 2.結(jié)合臨床癥狀選擇性檢測(cè)相關(guān)的自身抗體。 3.切忌盲目的全面檢測(cè)自身抗體。 4.通常以抗核抗體作為篩選試驗(yàn)，ANA在許多AID中 可呈陽(yáng)性。 5.ANA陽(yáng)性時(shí)，再進(jìn)行針對(duì)特異性靶抗原成分的自身 抗體的檢測(cè)，達(dá)到明確診斷的目的。,第四節(jié) 自身抗體的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)選擇的原則,一、自身抗體檢測(cè)的一般原則,二、實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn),IIF法,篩選試驗(yàn),ANA,抗dsDNA,IB法 ELISA法 IFA法,特異性實(shí)驗(yàn),抗原基質(zhì)片(如Hep-2、小鼠肝印片/切片)，加入自身抗體后與抗原相結(jié)合，再與