動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)PPT幻燈片

1、第九章 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù),07.09.2020,1,07.09.2020,2,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備,引進(jìn)動(dòng)物,動(dòng)物抓取固定,動(dòng)物編號(hào)標(biāo)記,給藥途徑和方法,動(dòng)物麻醉,體液采集,實(shí)驗(yàn)外科技術(shù)操作,術(shù)前準(zhǔn)備,術(shù)中技術(shù),術(shù)后護(hù)理,動(dòng)物處死,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)流程,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法是各種各樣的，如常用模型復(fù)制法、切開和分離法、切除和注入法、離體組織器官法等，在不同的研究領(lǐng)域有其不同的目的和應(yīng)用，但是一些基本的操作技術(shù)方法是一樣的。 如動(dòng)物的抓取、固定、標(biāo)號(hào)、脫毛、麻醉、給藥、采血、采尿、處死等，對(duì)于實(shí)驗(yàn)研究者來說無論從事哪一類研究項(xiàng)目，都會(huì)不同程度的應(yīng)用這些技術(shù)。,07.09.2020,4,一、大

2、、小鼠的抓取固定,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定,固定盒,二、豚鼠的抓取固定法,三、家兔的抓取固定法,一、大、小鼠的性別鑒定,第二節(jié) 性別鑒定,Female,Male,二、兔的性別鑒定,一、大、小鼠 1. 根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）,第三節(jié) 年齡的大致判斷,2. 根據(jù)體重鑒定日齡 小鼠日齡與體重的對(duì)應(yīng), 大鼠日齡與體重的對(duì)應(yīng),二、豚鼠 老年豚鼠：牙齒和趾爪長(zhǎng)，被毛稀疏無光澤，眼神呆滯，行動(dòng)遲緩。 年輕豚鼠：牙齒短白，爪短軟，眼睛圓亮，行動(dòng)敏捷，被毛有光澤，且緊貼身體。同日齡雌性體重略高于雄性。,三、家兔 家兔的門齒和爪隨年齡增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，是年齡鑒別的重要標(biāo)志。 青年兔：門齒潔白，短小，

3、排列整齊； 老年兔：門齒暗黃,厚而長(zhǎng),排列不整齊,有破損。 1歲家兔趾：紅色與白色長(zhǎng)度相等； 1歲以下：紅多于白； 1歲以上：白多于紅。,五、犬 犬的年齡主要以牙齒的生長(zhǎng)情況、磨損程度、外形顏色等情況綜合判定。,第四節(jié) 妊娠檢查,妊娠診斷(pregnancy diagnosis)：在配種以后能及時(shí)掌握雌性動(dòng)物是否妊娠、妊娠的時(shí)間及胎兒和生殖器官的異常情況，采用臨床和實(shí)驗(yàn)室的方法進(jìn)行檢查。 通過妊娠檢查，可以及時(shí)地對(duì)雌性動(dòng)物加強(qiáng)護(hù)理或再次配種，以保護(hù)母體和胎兒的正常發(fā)育，避免胎兒早期死亡和流產(chǎn)及減少繁育時(shí)間的損失。,外部檢查法 摸胎法 陰道檢查法 直腸檢查法 超聲波檢查法 孕酮含量測(cè)定法 青蛙試

4、驗(yàn),妊娠檢查方法有,第五節(jié) 分組與編號(hào),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)分組和編號(hào)標(biāo)記 一、隨機(jī)分組：隨機(jī)數(shù)字表（隨機(jī)抽樣原理） （一） 為二組 例：設(shè)有雄性Wistar大鼠12只，按體重大小依次編為1，2，3，12號(hào)，試用完全隨機(jī)的方法，分為甲、乙兩組。 分組方法：隨機(jī)點(diǎn)落在是隨機(jī)數(shù)字表上第21行第31列的78，則從78開始，由上向下抄12個(gè)隨機(jī)數(shù)字，如下：,隨機(jī)數(shù)字：78 38 69 57 91 0 37 45 66 82 65 41 隨機(jī)數(shù)字的奇數(shù)代表甲組，偶數(shù)代表乙組： 動(dòng)物編號(hào)： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 組 別：乙 乙 甲 甲 甲 乙 甲 甲 乙 乙 甲 甲

5、 乙組5個(gè)，甲組7個(gè)，兩組數(shù)字不等 繼續(xù)用隨機(jī)方法將甲組多余的一只調(diào)整給乙組，從上面最后一隨機(jī)數(shù)字41，接下去抄一個(gè)數(shù)為62，以7除之(因甲組原分配7只)得6，即把原分配在甲組的第6個(gè)甲(即11號(hào)大鼠)調(diào)入乙組。,如果甲組多兩個(gè)，則接下去抄兩個(gè)數(shù)。分別以8，7除之，余數(shù)即指要調(diào)入乙組的第幾個(gè)甲，余此類推。最后各組的鼠數(shù)就相等了。調(diào)整后各組鼠的編號(hào)為： 組別 鼠的編號(hào) 甲組 3 4 5 7 8 12 乙組 1 2 6 9 10 11,(二) 為三組：A組、B組、C組 分組方法：落點(diǎn)是隨機(jī)數(shù)字表第40行17列的08，則從08開始，自左到右抄12個(gè)隨機(jī)數(shù)字， 以3除各隨機(jī)數(shù)字，若余數(shù)為l，即該鼠歸A

6、組；余數(shù)為2，歸人B組；余數(shù)為3，歸入C組。 動(dòng)物編號(hào)： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 隨機(jī)數(shù)字：08 27 01 50 15 29 39 39 43 79 69 10 除 3 余數(shù)： 2 0 1 2 0 2 0 0 1 1 0 1 組 別： B C A B C B C C A A C A 調(diào)整組別：B,（三） 每個(gè)動(dòng)物為一組： 例：設(shè)有A，B，C，D，E，F(xiàn)代表的6只家兔，試用完全隨機(jī)法將其每只分為一組。 分組方法：從隨機(jī)數(shù)字表上用鉛筆任指一點(diǎn)，若為第21行第17列的33，則從33向左抄用6個(gè)數(shù)字，然后分別以6，5，4，3，2，l除之。凡除不盡的，即將余數(shù)寫下。 隨機(jī)

7、數(shù)字 33 46 9 52 68 7 除 數(shù) 6 5 4 3 2 1 余 數(shù) 3 1 1 1 2 1 隨機(jī)排列 C A B D F E,二、編號(hào)標(biāo)記方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組后，為了區(qū)分、觀察并記錄每個(gè)個(gè)體的反應(yīng)情況，必須給每只動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)標(biāo)記。 1體表顏料著色法 一般對(duì)短期試驗(yàn)的白色動(dòng)物可用顏料涂搽被毛的方法標(biāo)記。常用的涂染化學(xué)藥品有： 紅色：0.5中性紅或品紅溶液； 黃色：35苦味酸溶液或8090苦味酸酒精飽和液； 咖啡色：2硝酸銀溶液； 黑色：煤焦油酒精溶液。,左前腿上部為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，,右側(cè)從前至后依次為7、8、9。用黃色表示個(gè)位數(shù)，紅色表示十位數(shù)

8、。,2個(gè)體耳號(hào)標(biāo)記法 3. 個(gè)體斷趾標(biāo)記法 4. 耳號(hào)鉗標(biāo)記法 5. 掛牌法,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被毛的去除方法 除毛的方法有剪毛、拔毛和脫毛三種。 剪毛：固定動(dòng)物后，用粗剪刀剪去所需部位的被毛。剪毛時(shí)需注意以下幾點(diǎn)： 把剪刀貼緊皮膚剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮膚； 依次剪毛，不要亂剪； 剪下的毛集中放在一個(gè)容器內(nèi)，勿遺留在手術(shù)野和兔臺(tái)周圍，以保證手術(shù)野的清潔和防止注射器等夾毛。,07.09.2020,40,拔毛：兔耳緣靜脈注射或取血時(shí)以及給大、小白鼠作尾靜脈注射時(shí)，需用拇指、食指將局部被毛拔去，以利操作。 脫毛：脫毛系指用化學(xué)藥品脫去動(dòng)物的被毛，適用于無菌手術(shù)野的準(zhǔn)備以及觀察動(dòng)物局部皮膚血液循環(huán)

9、和病理變化。,07.09.2020,41,常用脫毛劑的配方： 硫化鈉3g、肥皂粉1g，淀粉7g，加水適量調(diào)成糊狀。 硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、甘油5g、硼砂1g，加水75ml。 硫化鈉8g，溶于100ml水中。 以上脫毛劑適用于家兔、大白鼠、小白鼠等小動(dòng)物的脫毛。 硫化鈉10g、生石灰15g，溶于100ml水 此配方適用于狗等大動(dòng)物的脫毛。,07.09.2020,42,07.09.2020,43,07.09.2020,44,07.09.2020,45,第六節(jié) 常規(guī)采血方法,一、大、小鼠的采血方法 1頸靜脈或頸動(dòng)脈采血 2股靜脈或股動(dòng)脈采血 3心臟采血 4尾部采血 5眼眶采血 6斷頭取血,眼

10、窩靜脈叢采血,尾部采血,07.09.2020,47,心臟采血,07.09.2020,48,二、豚鼠的采血方法 1耳緣剪口采血 2心臟采血方法同大、小鼠。 3股動(dòng)脈采血方法同大、小鼠。 4后肢背中足靜脈采血,三、家兔的采血方法 1.心臟采血 2.耳中央動(dòng)脈采血 3.耳靜脈采血 4.頸總動(dòng)脈,四、狗、貓的采血方法 1后肢外側(cè)跗外靜脈、內(nèi)側(cè)隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血 2股動(dòng)脈采血 3. 心臟采血同大、小鼠心臟采血。 4耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血。,采血方法的選擇，決定于實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃柩恳约皠?dòng)物種類。凡用血量較少的檢驗(yàn)如紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白的測(cè)定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取

11、毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時(shí)可作靜脈采血。靜脈采血時(shí)，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。而研究毒物對(duì)肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動(dòng)、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及 K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動(dòng)脈血液。,1）采血場(chǎng)所有充足的光線；室溫夏季最好保持在2528，冬季，1520為宜； 2）采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒； 3）采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥； 4）若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。,采血時(shí)要注意,取少量血,取中量血,取大量血,4. 最大安全采血量與最小致死采血量,第七節(jié) 麻醉方法,一、實(shí)驗(yàn)

12、動(dòng)物的麻醉方法,全身麻醉法：吸入法，注射法 局部麻醉法：浸潤(rùn)麻醉，表面麻醉,07.09.2020,62,（一）全身麻醉法,1、吸入法,麻醉藥： 乙醚 氯仿 三氟乙烷,07.09.2020,63,2、注射法 靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射 麻醉藥： 巴比妥類藥物、 氯胺酮、 烏拉坦、 水合氯醛,（一）全身麻醉法,07.09.2020,64,（二） 局部麻醉法,注射部位：皮膚、肌下組織、深層組織 1% 鹽酸普魯卡因 局部浸潤(rùn)麻醉 0.022鹽酸可卡因 表面麻醉,07.09.2020,65,麻醉藥物應(yīng)用原則： 依據(jù)動(dòng)物體重計(jì)算麻醉藥物的劑量； 依據(jù)動(dòng)物生命體征變化控制給藥速度； 掌握寧少勿多、分階段給

13、藥的方式； 麻醉時(shí)需注意保溫。,針對(duì)不同的動(dòng)物，選擇不同的麻醉藥物、實(shí)施不同的麻醉方法。,07.09.2020,66,麻醉具體操作：,家兔全身麻醉,麻醉劑：3%戊巴比妥鈉，1ml/kg（30mg/Kg ）,前1/2快速推入，使動(dòng)物能順利、快速地渡過興奮期；后1/2速度宜慢，且邊注射邊注意觀察動(dòng)物的生命體征變化，當(dāng)確定已達(dá)到麻醉效果時(shí)，即停止給藥，不必急于將剩余的麻醉藥物全部推入。,給藥方法：耳緣靜脈注射,07.09.2020,67,麻醉成功標(biāo)志,角膜反射遲鈍 或消失,肢體肌肉松弛,疼痛反射消失,呼吸變深變慢,07.09.2020,68,第八節(jié) 給藥途徑與方法,注射法分為：皮下注射、皮內(nèi)注射、肌

14、肉注射 腹腔注射、靜脈注射 腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射 投入法 經(jīng)消化道投入：口腔、胃腔或腸管 經(jīng)呼吸道投入：鼻腔或氣管,（一）皮下注射 注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。 注射部位：狗、貓大腿外側(cè) 兔背部/耳根部 豚鼠后大腿內(nèi)側(cè)/小腹部；大白鼠側(cè)下腹部 （二）皮內(nèi)注射 局部脫毛消毒繃緊皮膚30度進(jìn)針 挑起針頭稍刺入可注射皮膚表面鼓起一小皮丘。,（三）肌肉注射,選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位，一般多選臀部,（四）腹腔注射 用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使

15、針頭向前推0.30.5cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，,為避免傷及內(nèi)臟，可使動(dòng)物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。,（五）靜脈注射注射時(shí)盡量使血管充盈 1兔：兔耳緣靜脈 先拔毛，手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈 固定：左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無名指及小指墊在下面 進(jìn)針：6號(hào)針頭從靜脈的遠(yuǎn)端進(jìn)針，移動(dòng)拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入 結(jié)束：然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻,07.09.2020,76,2小白鼠和大白鼠尾靜脈注射 固定動(dòng)物（鼠筒或燒杯），露出尾巴，4550溫水浸潤(rùn)半分鐘或酒

16、精擦拭，血管充盈，表皮角質(zhì)軟化 固定：以左手食指和中指捏住鼠尾，無名指從下面托起，以大拇指和小指夾住尾巴的末梢 注射：進(jìn)針，先緩注少量藥液，無阻力 3狗前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈 側(cè)臥固定，剪毛，用膠皮帶扎緊靜脈近端，從遠(yuǎn)端進(jìn)針，有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。,幾種動(dòng)物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）,（六）經(jīng)口給藥 多用灌胃法,常用動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積 見右表,1小鼠、大鼠（或豚鼠） 灌胃針安注射器上 固定動(dòng)物成垂直體位經(jīng)口腔緩慢插入灌胃針針插入時(shí)應(yīng)無阻力注射液體。 灌胃針插入位置：小鼠34cm 大鼠或豚鼠46cm 灌胃量：小鼠為0.21ml，大鼠、豚鼠為15ml

17、。,2狗、兔、貓、猴 固定動(dòng)物將擴(kuò)口器放入動(dòng)物口中，用繩固定于嘴部橡皮導(dǎo)管（如導(dǎo)尿管），經(jīng)擴(kuò)口器上的小圓孔插入將藥液灌入。,（七）其它途徑給藥 1. 呼吸道給藥揮發(fā)性類藥物：乙醚、氨氣等 2.皮膚給藥藥液涂在皮膚上，經(jīng)皮膚吸收 用于鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等 3.脊髓腔內(nèi)給藥用于椎管麻醉或抽取腦脊液 4.腦內(nèi)給藥用于微生物學(xué)研究 大小鼠正中額部刺入腦， 豚鼠、兔、狗須先用穿顱鋼針穿透顱骨，再刺入腦部 5.直腸內(nèi)給藥用于動(dòng)物麻醉 6.關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥常用于關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型復(fù)制,人與各種動(dòng)物及各種動(dòng)物之間用藥劑量換算 公式：B動(dòng)物劑量（mg/kg）=WA動(dòng)物劑量（m

18、g/kg）,07.09.2020,85,第九節(jié) 處死方法,處死原則：當(dāng)實(shí)驗(yàn)中途停止或結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)站在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的立場(chǎng)上以人道的原則去處置動(dòng)物，原則上不給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。 安樂死是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安樂死方法的選擇取決于動(dòng)物的種類與研究的課題。,一、搗碎腦脊髓 用于蛙類 二、頸椎脫臼法 用于鼠類 三、放血法 眼眶放血、心臟放血、動(dòng)脈放血 四、斷頭法 五、擊打法 六、藥物法 有毒藥物或麻醉劑 七、空氣栓塞法 兔、貓等靜脈注入2040ml 狗靜脈內(nèi)注入80150ml,07.09.2020,91,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用手術(shù)器械,07.09.2020,92,手術(shù)刀握持方法,07.09.2020,93,07.09.2020,94,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用方法,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法很多，下面舉一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的常用方法： 1、復(fù)制動(dòng)物模型法 采用人工的方法使動(dòng)物在一定致病因素（機(jī)械、化學(xué)、生物和物理）作用下，造成動(dòng)物的組織，器官或全身的一定損傷，復(fù)制成與人類疾病相似的動(dòng)物疾病模型，來研究各種疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律及防治