藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別項(xiàng)目設(shè)置的幾點(diǎn)考慮

1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別項(xiàng)目設(shè)置的幾點(diǎn)考慮藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別是用以判定某已知藥品的真?zhèn)味皇菍?duì)未知藥物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，所以鑒別方法應(yīng)以專屬性好、簡(jiǎn)便易行為宜，尤其能將結(jié)構(gòu)相似的同類藥品加以區(qū)別為主要考慮因素。如新魚(yú)腥草素鈉及制劑標(biāo)準(zhǔn)中僅用化學(xué)法和 uv 法作鑒別，難以與結(jié)構(gòu)類似物魚(yú)腥草素鈉及制劑相區(qū)分，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不具備應(yīng)有的專屬性，可能給此后的市場(chǎng)監(jiān)督造成混亂。常用的鑒別方法包括色譜法、光譜法、化學(xué)法和生物學(xué)方法等，可根據(jù)藥品具體特點(diǎn)加以選用。色譜法（ tlc 法或 hplc 法）利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，各自色譜行為（比移值或保留時(shí)間）的不同，與對(duì)照品在相同色譜條件下進(jìn)行色譜分離，比較其色譜行為的

2、一致性，來(lái)鑒別藥品的真?zhèn)巍＿@類方法的運(yùn)用使得結(jié)構(gòu)相似化合物、同系物等的區(qū)分變得簡(jiǎn)單易行。hplc 法雖然主要用于定量，但如果運(yùn)用得當(dāng)，尤其在含量測(cè)定或有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下已采用本法的情況下，利用對(duì)照品與供試品保留時(shí)間相同的特性作為鑒別依據(jù)，不必專門增加實(shí)驗(yàn)以提高鑒別的專屬性，是非常可取的。值得注意的是色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性要好，同一物質(zhì)不同進(jìn)樣時(shí)保留時(shí)間的重現(xiàn)性必須有保證。這就要求流動(dòng)相與固定相相匹配， c18 鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故在 c18 柱的反相色譜系統(tǒng)中，流動(dòng)相有機(jī)溶劑比例通常不應(yīng)低于5 ，否則 c18 鏈的隨機(jī)卷曲將造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定導(dǎo)致組份保留值波動(dòng)，不利于此種鑒別。即便如此，在實(shí)

3、際操作中有時(shí)依然能遇到同一物質(zhì)在完全相同的色譜系統(tǒng)中保留時(shí)間不一致的情況，尤其梯度洗脫時(shí)此種現(xiàn)象更為常見(jiàn)。藥典中對(duì)保留時(shí)間的一致性未予具體規(guī)定，此時(shí)，操作中可增加1 / 5供試品溶液與對(duì)照品溶液等量混合，進(jìn)樣后出現(xiàn)單一色譜峰作為鑒別依據(jù)，可以彌補(bǔ)該法之不足，此操作可列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在含量和有關(guān)物質(zhì)未采用 hplc 法的情況下，一般不單獨(dú)采用本法作鑒別。tlc 法除色譜行為外，還可將斑點(diǎn)顏色作為鑒別依據(jù)，可由兩個(gè)因素把握供試品與對(duì)照品的同一性，而且簡(jiǎn)便易行，堪稱一個(gè)很好的鑒別方法。但由于薄層板質(zhì)量、邊緣效應(yīng)等因素的影響，實(shí)際操作中有時(shí)也會(huì)遇到同一物質(zhì)在同一塊薄層板上的rf 值不一的情況，可比照hp

4、lc 的情況，操作中增加供試品溶液與對(duì)照品溶液等量混合，點(diǎn)樣后出現(xiàn)單一斑點(diǎn)作為鑒別依據(jù)，此點(diǎn)在2005年版藥典中已有體現(xiàn)。也有人提議明確rf 值偏差不超過(guò) 5%, 作為鑒別要求， 但其可行性有待考察。單獨(dú)使用tlc 鑒別時(shí)，要有色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)內(nèi)容，如要求幾種結(jié)構(gòu)相似化合物的混合溶液色譜展開(kāi)后應(yīng)顯示相應(yīng)的幾個(gè)斑點(diǎn)或最難分離物質(zhì)對(duì)能夠分開(kāi)的情況下，供試品溶液與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)一致。在中國(guó)藥典 2005 年版中，對(duì) tlc 鑒別法在斑點(diǎn)的顏色與位置明確規(guī)定的基礎(chǔ)上對(duì)斑點(diǎn)大小也做出明確要求：供試品與同濃度對(duì)照品溶液顏色與位置應(yīng)一致，斑點(diǎn)大小應(yīng)大致相同；或供試品與對(duì)照品等體積混合，應(yīng)顯

5、示單一，斑點(diǎn)緊密；或供試品溶液的主斑點(diǎn)與上述混合溶液的主斑點(diǎn)的顏色與位置一致，大小相似；或選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似藥物對(duì)照品，兩者的比移植應(yīng)不同（例如芬布芬與酮洛芬，地塞米松磷酸鈉與潑尼松龍磷酸鈉，醋酸氫化可的松與醋酸可的松，潑尼松龍與氫化可的松，甲睪酮與睪酮，左旋多巴與酪氨酸） ；或上述兩種溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。2 / 5光譜法中ir 法因可反映較多的結(jié)構(gòu)信息，在組份單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥鑒別中作為首選，藥物存在多晶型現(xiàn)象又無(wú)可重復(fù)轉(zhuǎn)晶方法時(shí)一般不采用此法， 但如果藥物存在多晶型現(xiàn)象，且需鑒別其有效晶型，ir 圖譜可以反映其有效晶型特點(diǎn)時(shí)，本法又是一種有效而簡(jiǎn)便易行的鑒別

6、方法。制劑中則因輔料影響、提取過(guò)程可能導(dǎo)致晶型變化而一般不采用ir 法，而采用所受影響因素較少的uv 法。常用的 uv 鑒別方法有： 測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)， 或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)；規(guī)定一定濃度的供試液在特定吸收波長(zhǎng)（最大吸收或最小吸收）處的吸收度；經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征；規(guī)定幾個(gè)特定吸收波長(zhǎng)及其吸收度比值（峰- 峰、峰 - 谷、谷 - 谷）；規(guī)定幾個(gè)特定吸收波長(zhǎng)及其吸收系數(shù)。因末端吸收所受影響因素較多，uv 法鑒別時(shí)，一般不宜用220nm以下波長(zhǎng)的吸收特性作鑒別；因反映的結(jié)構(gòu)信息少，一般也盡量不用單一吸收峰作鑒別依據(jù)；為提高專屬性，可將上述幾個(gè)方法結(jié)合起來(lái)使用。化學(xué)鑒別法一般

7、是特定官能團(tuán)或特定結(jié)構(gòu)化合物的特性反應(yīng)，與其它鑒別方法結(jié)合使用，可以使得鑒別的專屬性更加突出?；瘜W(xué)鑒別法具有專屬性較強(qiáng)、反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯的特點(diǎn)才有使用價(jià)值。包括在適當(dāng)條件下產(chǎn)生顏色、熒光，發(fā)生沉淀反應(yīng)或產(chǎn)生氣體等現(xiàn)象。1. 呈色反應(yīng)：即向供試品溶液中加入適當(dāng)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。常見(jiàn)的反應(yīng)類型有：茚三酮呈色反應(yīng)多為含脂肪氨基結(jié)構(gòu)的藥物；異羥肟酸鐵反應(yīng)多為含芳酸及其酯類和酰胺類結(jié)構(gòu)的藥物；3 / 5三氯化鐵呈色反應(yīng)多為含酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基的藥物；重氮化偶合呈色反應(yīng)多為芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基結(jié)構(gòu)的藥物；氧化還原呈色反應(yīng)或其它顏色反應(yīng)。2. 沉淀反應(yīng)：供試

8、品溶液中加入適當(dāng)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成不同顏色的沉淀物，有的具有特殊的沉淀形狀。常見(jiàn)的反應(yīng)類型有：與硫氰化鉻胺（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)多為生物堿及其鹽類藥物和具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽類藥物。與重金屬離子的沉淀反應(yīng)在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成沉淀物。其它沉淀反應(yīng)。3. 氣體生成反應(yīng)：供試品溶液中加入適當(dāng)試劑，在一定條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成氣體。常見(jiàn)的反應(yīng)類型有：產(chǎn)生氨氣，利用其特殊的氣味鑒別多為胺（銨）類藥物、酰胺類藥物經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨氣；產(chǎn)生硫化氫氣體，利用其特殊的氣味鑒別多為化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生硫化氫氣體；另外，含碘有機(jī)藥物，直火加熱后，可產(chǎn)生紫色碘蒸汽；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。4. 熒光鑒別：常見(jiàn)的熒光發(fā)射形式有以下類型：藥物本身在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光；藥物溶液加硫酸呈酸性后，在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光；藥物和溴反應(yīng)4 / 5后，在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光；藥物和間苯二酚反應(yīng)后以及經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。5. 測(cè)定生成物的熔點(diǎn)：因操作煩瑣、費(fèi)時(shí)，現(xiàn)已較少應(yīng)用。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的鑒別項(xiàng)目一般選用不同原理的方法相結(jié)合以起到互補(bǔ)作用，同類試驗(yàn)原理（如uv 與 ir 法、 hplc 與 tlc 法）或相同官能團(tuán)的化學(xué)鑒別法盡量不同時(shí)出現(xiàn)在同一標(biāo)準(zhǔn)中