植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)畢業(yè)論文答辯ppt(1).ppt

1、淺談植物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)技術(shù),答辯人：,細(xì)胞懸浮培養(yǎng),細(xì)胞懸浮培養(yǎng),細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的定義,單細(xì)胞制備的方法,懸浮培養(yǎng)的條件,細(xì)胞初始培養(yǎng),細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的類型,懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化,規(guī)?；囵B(yǎng),存在問(wèn)題與前景展望,細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的定義,定義1：細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。 應(yīng)用學(xué)科：細(xì)胞生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程（二級(jí)學(xué)科）,定義2：在流動(dòng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)非貼壁的懸浮細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞或組織的培養(yǎng)方法。細(xì)胞附著在微運(yùn)載體上的培養(yǎng)也是一種懸浮培養(yǎng)。 應(yīng)用學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；方法與技術(shù)（二級(jí)學(xué)科）,單細(xì)胞制備的方法,機(jī)械法,

2、酶解法,愈傷組織誘導(dǎo)法,1.機(jī)械法,2.酶解法,3.愈傷組織誘導(dǎo)法,植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過(guò)程圖像,一個(gè)成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足三個(gè)基本條件： 一是懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較??； 二是均一性好，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同； 三是生長(zhǎng)迅速。,懸浮培養(yǎng)的條件,細(xì)胞初始培養(yǎng),根據(jù)培養(yǎng)基在容器中的運(yùn)動(dòng)方式來(lái)區(qū)分，有4中振蕩培養(yǎng)方法： 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶呈360的緩慢旋轉(zhuǎn)移動(dòng)，使細(xì)胞培養(yǎng)物保持均勻分布和保證空氣供應(yīng)。 往返振蕩培養(yǎng)：機(jī)器帶動(dòng)培養(yǎng)瓶在一直線方向往返振蕩。 旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)：機(jī)器帶動(dòng)培養(yǎng)瓶在平行面上作旋轉(zhuǎn)振動(dòng)。 攪動(dòng)培養(yǎng)：利用攪拌棒不斷轉(zhuǎn)動(dòng)，使培養(yǎng)基被攪動(dòng)。,細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的類型,分批培養(yǎng),培

3、養(yǎng)初期懸浮細(xì)胞處于滯后期，細(xì)胞很少分裂；進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，細(xì)胞分裂活躍數(shù)目迅速增加；經(jīng)過(guò)34個(gè)細(xì)胞世代之后，培養(yǎng)基中某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)已經(jīng)耗盡，或是有毒代謝產(chǎn)物的積累，增長(zhǎng)逐漸緩慢，進(jìn)入靜止期后，增長(zhǎng)完全停止 。,連續(xù)培養(yǎng),連續(xù)培養(yǎng)主要用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，通過(guò)添加新鮮培養(yǎng)液和排放已利用的培養(yǎng)液來(lái)平衡營(yíng)養(yǎng)水平，使培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)期處于靜止期狀態(tài)。,連續(xù)培養(yǎng)是通過(guò)控制加入定量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)使細(xì)胞生長(zhǎng)率和細(xì)胞密度保持不變的一種培養(yǎng)方式，主要用于研究和生產(chǎn)次生代謝物質(zhì) 。,細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的類型,懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化,物理方法,體積選擇法 通過(guò)細(xì)胞體積大小分級(jí)，直接將處于相同周期的細(xì)胞進(jìn)行分選，然后將同一狀態(tài)的細(xì)胞繼代培

4、養(yǎng)于同一培養(yǎng)體系中，從而可能保持相同培養(yǎng)體系中的細(xì)胞具有較好的一致性。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，分選細(xì)胞維持了自然生長(zhǎng)狀態(tài)，因而不會(huì)有其它處理所帶來(lái)的對(duì)細(xì)胞活力的影響 。,低溫處理法 冷處理也可以提高培養(yǎng)體系中細(xì)胞同步化的程度。收集細(xì)胞，在4攝氏度溫度下處理數(shù)天，添加新鮮培養(yǎng)液。,懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化,化學(xué)方法,饑餓法 饑餓也是調(diào)整細(xì)胞同步化的方法之一。在一個(gè)培養(yǎng)體系中，如果細(xì)胞生長(zhǎng)的基本成分喪失，而導(dǎo)致細(xì)胞因饑餓而分裂受阻，從而停留在某一分裂時(shí)期。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入所缺乏的成分或者將饑餓細(xì)胞轉(zhuǎn)入完整培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞分裂又可以重新恢復(fù)。饑餓導(dǎo)致的細(xì)胞分裂受阻，常常使細(xì)胞不能合成DNA，即不能進(jìn)入S期；或細(xì)胞分裂不能進(jìn)行，即不能進(jìn)入M期。,抑制法 通過(guò)一些DNA合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞滯留在DNA合成前期，當(dāng)解除抑制后，即可獲得處于同一細(xì)胞周期-G1期的同步化細(xì)胞。,懸浮細(xì)胞的前景展望,細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的最終目的是利用高產(chǎn)株系進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，通過(guò)生物和工程技術(shù)方法的結(jié)合以實(shí)現(xiàn)高效生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物。這樣使維持高質(zhì)量細(xì)胞生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)的控制成為可能。由于植物細(xì)胞培養(yǎng)可以實(shí)現(xiàn)人工調(diào)控，成為生產(chǎn)植物次生代謝產(chǎn)物的最有潛力和吸引力的研究領(lǐng)域。同時(shí)，為快速有效的誘導(dǎo)抗性植物，進(jìn)行高產(chǎn)細(xì)胞株的篩選和穩(wěn)定性研究實(shí)現(xiàn)大規(guī)模擴(kuò)繁和人工種子的生產(chǎn)提供了更為有效的途