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1、液相色譜基礎(chǔ)知識(shí),Waters LC School 培訓(xùn)教材,蒸餾 離心 電泳 過(guò)濾 超濾 色譜,常見的分離方式,色譜法的分類,HPLC分離的機(jī)理,典型的儀器配置,液相色譜的應(yīng)用（一）,“分析型液相色譜” 定性及定量分析 靈敏度的要求 樣品的復(fù)雜性 樣品量的要求 精度及準(zhǔn)確度的要求 容易使用,液相色譜的應(yīng)用（二）,“制備型液相色譜” 分離及純化 化合物的穩(wěn)定性 樣品的復(fù)雜性 制備量的要求 純度的要求，及純度的鑒定 方法的安全性,開發(fā)液相色譜方法,問(wèn)題什么樣的分離結(jié)果是好的?分辨率?,什么是色譜的分辨率？,分辨率的公式：,影響分辨率的因素：K，a，N,分辨率的方程 k 是容量因子，表達(dá)了樣品與柱

2、填料的作用強(qiáng)弱。 a 是選擇性系數(shù)，描述兩化合物分離的好壞程度。是化學(xué)因素。 N 是理論塔板數(shù)，描述色譜峰的譜帶展寬程度。,色譜柱的柱效 N,理論塔板數(shù)計(jì)算公式： Ws 方法 Wtan16切線法 Wh5.54半峰高 W3s9 3s W4s16 4s W5s25 5s,Inject,Inject,用“切線”法計(jì)算柱效,不好的色譜柱的柱效反而比好色譜柱的要高，因?yàn)槠渫衔膊糠譁y(cè)不出來(lái),Good Column,Bad Column,Inject,Inject,用“5”法計(jì)算柱效,提高柱效的方法,色譜柱本身 減小填料的顆粒度 找到最佳的流速(根據(jù)不同內(nèi)徑) 合適的溫度 降低溶劑的粘度 增加柱長(zhǎng),其他影響柱效的因素,柱外效應(yīng) 連接管路 進(jìn)樣器、檢測(cè)器 進(jìn)樣體積 進(jìn)樣量,容量因子 k,改變k值的方法 調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性、pH、離子強(qiáng)度等 梯度淋洗,與峰高的關(guān)系,與R的關(guān)系,選擇性系數(shù) a,定義 a =1 時(shí)兩組分分不開， 改變a的途徑 改變固定相 改變流動(dòng)相 改變溫度 改變樣品的本身性質(zhì),a ，k，N如何控制分辨率?,液相色譜的檢測(cè)模式,靈敏度、選擇性、及適應(yīng)能力,色譜條件的優(yōu)化,開發(fā)液相色譜方法,分辨率是色譜分離中主要考慮的因素 在開發(fā)色譜方法時(shí)，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下幾

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