第七章體液蛋白質(zhì)檢驗_第1頁
第七章體液蛋白質(zhì)檢驗_第2頁
第七章體液蛋白質(zhì)檢驗_第3頁
第七章體液蛋白質(zhì)檢驗_第4頁
第七章體液蛋白質(zhì)檢驗_第5頁
已閱讀5頁,還剩81頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、1,第七章 體液蛋白質(zhì)檢驗,人類白蛋白分子,2,本章內(nèi)容概要:,第二節(jié) 體液蛋白質(zhì)測定,第一節(jié) 概述,3,1、掌握血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類;個別血漿蛋白質(zhì)(前白蛋白、白蛋白)的來源和生理功能;血清總蛋白和白蛋白的測定方法和原理。,2、熟悉急性時相反應(yīng)蛋白的概念和種類;血清球蛋白和纖維蛋白原的測定方法。,3、了解其他蛋白質(zhì)的來源和生理功能;尿液蛋白和腦脊液蛋白的檢測 。,本章教學(xué)要求:,第一節(jié) 概述,4,一、血漿蛋白質(zhì)的分類和功能,組成:,種類:1000種 500種 200種 含量:g mg g 來源:肝臟是蛋白質(zhì)主要的加工廠,(一)血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類,6,營養(yǎng)作用,修補組織蛋白;

2、 維持血漿膠體滲透壓:主要是白蛋白; 作為PH緩沖系統(tǒng)的一部分:酸性或堿性蛋白質(zhì); 運輸作用:作為激素、維生素、脂類、代謝產(chǎn)物、離子、藥物等的載體; 體液免疫防御系統(tǒng):作為免疫球蛋白與補體等免疫分子; 催化作用:酶的本質(zhì); 代謝調(diào)控作用;作為底物,酶或中間產(chǎn)物抑制或激活組織蛋白酶; 參與凝血與纖維蛋白溶解;:除因子外均可。,血漿蛋白質(zhì)的功能,血漿蛋白質(zhì)的分類,7,7,分離方法,鹽析法:白蛋白/球蛋白(pH7.0半飽和的硫酸銨溶液),電泳法:,醋酸纖維素薄膜電泳:6種,瓊脂糖凝膠電泳:13種,聚丙烯酰胺凝膠電泳:30種,SDS聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳:300種,分辨率增高,-,-,-,+,纖維

3、蛋白原,醋酸纖維素薄膜,醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳:5個成分 清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白 分辨率高時:可有7個成分 有1和2 2中也可有兩條 聚丙烯酰胺凝膠電泳: 可以分出30多種蛋白質(zhì),醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳:5個成分,清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白,2.電泳分類法,是臨床實驗室常 用的血漿蛋白質(zhì) 電泳方法,分辨率高時:可有7個成分 有1和2 2中也可有兩條 聚丙烯酰胺凝膠電泳: 可以分出30多種蛋白質(zhì),9,3.功能分類法,(1)運輸載體類 血漿脂蛋白:包括CM、VLDL、LDL、HDL等 前清蛋白與清蛋白 甲狀腺素結(jié)合球蛋白 皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白 類固醇激素結(jié)合球蛋白

4、視黃醛結(jié)合蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白 觸珠蛋白 血色素結(jié)合蛋白 銅藍蛋白,(2)蛋白酶抑制物:包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋 白酶、2-巨球蛋白等6種以上 (3)血清酶類:血漿固有酶如LCAT等 組織細胞少量釋放的細胞內(nèi)酶 細胞破裂而進入血循環(huán)的細胞內(nèi)酶 (4)蛋白類激素:胰島素、胰高血糖素、生長激素等 (5)凝血蛋白類 (6)免疫球蛋白類 (7)補體蛋白類,(2)蛋白酶抑制物:包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋 白酶、2-巨球蛋白等6種以上 (3)血清酶類:血漿固有酶如LCAT等 組織細胞少量釋放的細胞內(nèi)酶 細胞破裂而進入血循環(huán)的細胞內(nèi)酶 (4)蛋白類激素:胰島素、胰高血糖素、生長激素等 (5)凝血蛋白類

5、(6)免疫球蛋白類 (7)補體蛋白類,還有許多種類的蛋白質(zhì)未被認識,還有許多種類的蛋白質(zhì)未被認識,2.功能分類法,1. 作為運載蛋白 2. 組織蛋白酶抑制物 3. 在血漿中起催化作用的酶 4. 參與代謝調(diào)控作用的蛋白質(zhì)和肽類激素 5. 參與凝血與纖維蛋白溶解 6. 組成體液免疫防御系統(tǒng)(Ig與補體) 所有血漿蛋白質(zhì)能 維持血漿膠體滲透壓 組成血液pH緩沖系統(tǒng),(二)血漿蛋白質(zhì)的功能,生物 化學(xué),急性時相反應(yīng)(acute phase reaction,APR): 血漿蛋白質(zhì)對急性炎癥和組織損傷的非特異性反應(yīng)。 此時許多蛋白質(zhì):如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白、銅藍蛋白、 C4、C3、

6、纖維蛋白原和C-反應(yīng)蛋白等濃度顯著升高或升高, 而少數(shù)蛋白質(zhì)如前清蛋白、清蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白則出現(xiàn)相應(yīng)下降。 急性時相反應(yīng)蛋白(acute phase reactive protein,APP):對急性炎癥和組織損傷起非特異反應(yīng)從而出現(xiàn)濃度變化的血漿蛋白質(zhì)。 增加的蛋白質(zhì)稱為正向APP 下降的蛋白質(zhì)稱為負向APP,12,1.急性時相反應(yīng),(三)影響血漿蛋白質(zhì)濃度的因素,機體哪些情況會出現(xiàn)急性時相反應(yīng)? 急性細菌性感染如急性肺炎、鏈球菌感染性腎炎 急性非特異性炎癥如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病等 急性心肌梗死 惡性腫瘤 手術(shù)、創(chuàng)傷,13,APR的機制,炎癥損傷部位釋放的細胞因子,包括白

7、介素、腫瘤壞死因子和、干擾素以及血小板活化因子等, 引發(fā)肝細胞中上述蛋白質(zhì)合成量的改變。 正向APP是機體防御機制的一個部分,如: 增加的蛋白酶抑制劑控制組織中的酶活性 觸珠蛋白保護從破壞紅細胞中釋放的Hb C反應(yīng)蛋白等可活化補體 負向APP多作為營養(yǎng)蛋白,此時合成減少,可為合成正向APPs提供更多的氨基酸原料。,14,APR的時相,C-反應(yīng)蛋白:首先升高 1-酸性糖蛋白:12小時內(nèi)也升高 1-抗胰蛋白酶、觸珠蛋白、C4和纖維蛋白原然后升高 C3和銅藍蛋白:最后是升高 通常在25天內(nèi)這些APPs達到最高值,15,測定APP的臨床意義,幫助監(jiān)測炎癥的發(fā)生、變化和觀察治療反應(yīng), 尤其是那些升高最早

8、和最多的蛋白質(zhì),16,30,二、血清蛋白質(zhì)電泳組分的臨床分析,血漿蛋白質(zhì)和血清蛋白質(zhì)有何不同? 血漿:為生理狀況 血清:為常用檢測標本,血漿蛋白質(zhì)和血清蛋白質(zhì)有何不同? 血漿:為生理狀況 血清:為常用檢測標本,31,(一)血清蛋白質(zhì)電泳的正常組分及其含量,清蛋白:5768 1球蛋白:1.05.7 2球蛋白:4.911.2 球蛋白:713 球蛋白:9.818.2,醋纖膜電泳正常百分含量 清蛋白:5768 1球蛋白:1.05.7 2球蛋白:4.911.2 球蛋白:713 球蛋白:9.818.2,醋纖膜或瓊脂糖電泳正常區(qū)帶,區(qū)帶圖譜,掃描圖譜,kk,1.腎病綜合征,2. 肝硬化,正常圖譜,典型的-橋

9、,不典型-橋,IgG型,IgA型,3.多發(fā)性骨髓瘤,2,典型的異常電泳圖譜及其掃描曲線,(四)球蛋白增多與M蛋白,Ig多克隆性增多:區(qū)帶呈彌散性升高 見于反復(fù)或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細胞 疾病或寄生蟲感染。 Ig單克隆性增多M蛋白:區(qū)帶局部有深染窄帶 漿細胞病、尤其惡性漿細胞病時, 異常漿細胞單克隆增殖, 產(chǎn)生大量單克隆Ig或輕鏈或重鏈片段, 病人血清或尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白,Ig多克隆性增多:區(qū)帶呈彌散性升高 見于反復(fù)或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細胞 疾病或寄生蟲感染。 Ig單克隆性增多M蛋白:區(qū)帶局部有深染窄帶 漿細胞病、尤其惡性漿細胞病時, 異常漿細胞單克隆增殖, 產(chǎn)生大量

10、單克隆Ig或輕鏈或重鏈片段, 病人血清或尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白,22,23,二、血漿蛋白質(zhì),(一)前白蛋白(PA) (二)白蛋白(ALB) (三)1-酸性糖蛋白(AAG) (四)甲胎蛋白(AFP) (五)結(jié)合珠蛋白(Hp) (六)2-巨球蛋白(AMG) (七)銅藍蛋白(CER/CP) (八)轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF) (九)2 微球蛋白(BMG) (十)C-反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP),24,結(jié)構(gòu): MW=54000,四個相同亞基構(gòu)成的四聚體。 理化性質(zhì):p4.7,肝細胞合成,半壽期12 小時。 測定方法:免疫比濁法免疫擴散技術(shù)。,25,功能:營養(yǎng)指標,載體功能(甲狀腺素維生素)。 臨床意義: 1.作為

11、營養(yǎng)不良的早期指標; 2.作為肝功能不全的指標,比Alb更靈敏; 3.負性急性時相反應(yīng)蛋白,急性炎癥,惡性腫瘤, 肝硬化及腎炎等情況下,PA迅速降低。 參考值: 0.180.45g/L 。,26,急性時相反應(yīng)蛋白,27,28,29,結(jié)構(gòu):585個aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽, MW=66458,含17個二硫鍵。 理化性質(zhì):pI=45.8,肝細胞合成但不儲存,半衰期為15-19 天,占總蛋白的40%60%,p7.4時帶負電。 測定方法:色素結(jié)合法:溴甲酚綠(BCG),溴甲酚紫(BCP),鹽析等。,(二)白蛋白(ALB)急性時相反應(yīng)蛋白,30,功能:營養(yǎng)作用,載體功能(高親和力),維持血漿滲透壓和正常p

12、值。 臨床意義:合成受食物影響,敏感性較低。 降低:在營養(yǎng)不良,肝功不全,急慢性肝疾病時; 增高:少見,假性升高。 參考值:35-50 g/,31,功能:蛋白酶抑制物(具有90的抑制蛋白酶活力)。如糜蛋白酶,彈性蛋白酶,但此抑制作用有明顯的p依賴性。 臨床意義: 降低:血漿AAT僅見于胎兒呼吸迫綜合癥。 升高:炎癥、術(shù)后,某些激素治療后。 參考值: 0.831.99g/L,32,結(jié)構(gòu):181個aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽, MW=4萬,含45%的糖,其中唾液酸占11%12%。 理化性質(zhì):pI值2.73.5,肝合成,膿毒癥時粒細胞和單核細胞及某些腫瘤組織也可合成。 位于1-球蛋白區(qū)帶。 測定方法:免疫

13、化學(xué)法(擴散,濁度),化學(xué)法(間接法),ELISA法等,(三)1-酸性糖蛋白(AAG) 急性時相反應(yīng)蛋白,33,功能:與免疫防御功能有關(guān),機制不詳;抑制血小板凝集影響膠原纖維形成;參與脂類運輸。 臨床意義: 升高:急性炎癥,組織損傷,風(fēng)濕,腫瘤,AMI ,潰結(jié)時; 降低:營養(yǎng)不良降低, 嚴重肝損傷和雌激素作用。 參考值:.252.0g/L 。,34,結(jié)構(gòu):590個aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽, MW=6.5萬萬,含4%的糖。 理化性質(zhì):pI值.7-.8,在白蛋白和1-球蛋白之間。胎兒肝卵黃囊合成,成人量微,升高由于腫瘤細胞合成。 測定方法:免疫化學(xué)法(擴散,火箭電泳),ELISA等,(四)甲胎蛋白(

14、AFP),35,功能:胎兒血漿主要蛋白質(zhì),調(diào)節(jié)肝細胞生長和腦細胞發(fā)育;抑制細胞和體液的免疫反應(yīng);維持正常妊娠,防止母嬰排斥。 臨床意義:胎兒產(chǎn)前監(jiān)測(羊水或母血) 增高:原發(fā)性肝癌患者診斷和鑒別(80%原發(fā)增高), 其他癌癥也可見增高。 參考值:20-100g/L(成人) 5g/L(新生兒),36,結(jié)構(gòu): 兩對肽鏈形成四聚體,有變異體。 理化性質(zhì):肝合成, pI 值為4.1,電泳位a2 -球蛋白區(qū)帶 測定方法:電泳法,免疫化學(xué)法(擴散,濁度),化學(xué)法等,(五)結(jié)合珠蛋白(Hp) 急性時相反應(yīng)蛋白,37,功能: 與紅細胞中釋出自由Hb 結(jié)合,防止Hb 從尿中丟失保存鐵, 急性溶血后一周再生恢復(fù)。

15、 高效的過氧化物酶。 需鐵細菌的天然抑菌劑。 臨床意義: 升高:急性時相反應(yīng); 降低:血管內(nèi)溶血時;雌激素作用。 參考值:0.5-2.2 g/L,38,結(jié)構(gòu): MW=6280 萬,分子量最大,由四個相同的亞基組成,含糖量約。 理化性質(zhì):肝細胞與單核吞噬細胞系統(tǒng)中合成,半壽期5 天。 測定方法:免疫化學(xué)等,(六)2-巨球蛋白(AMG),不屬于急性時相反應(yīng)蛋白,39,功能:與多種分子和離子結(jié)合,影響蛋白水解酶活性(主要的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護某些酶的作用)。 臨床意義:嬰幼兒及兒童比成人高; 升高:雌激素,低蛋白血癥尤其是腎病綜合征時,可顯著升高以維持血漿膠體滲透壓; 降低:胰腺炎及前列腺癌時

16、。 參考值:1.31-2.93g/L,40,結(jié)構(gòu): MW=12-16 萬, 1046個aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽,含糖約,每分子銅藍蛋白可結(jié)合個銅原子。 理化性質(zhì):肝合成,巨噬細胞和淋巴細胞合成少量;pI 值為4.4, 具遺傳基因多態(tài)性。 測定方法:免疫化學(xué)(擴散或比濁)等,(七)銅藍蛋白(CER/CP) 急性時相反應(yīng)蛋白,41,功能:具氧化酶活性且起抗氧化劑作用,銅的無毒代謝庫 臨床意義: 增加感染,創(chuàng)傷,腫瘤; 降低-營養(yǎng)不良,嚴重肝病及腎綜;協(xié)助診斷Wilson病(肝豆狀核變性) 參考值:0.21-0.53g/L,42,結(jié)構(gòu): MW=7.7 萬,單鏈糖蛋白,含糖約。 理化性質(zhì):肝細胞合成,

17、pI 值為5.5-5.9,半壽期7 天,可逆結(jié)合多價離子如Fe、Cu、Zn、Co 等,一分子TRF 可結(jié)合兩個三價鐵。 測定方法:免疫擴散法,放免法和免疫比濁法等。,(八)轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF/Tf) 急性時相反應(yīng)蛋白,43,功能:運輸鐵。 臨床意義:血TRF 濃度受鐵供應(yīng)調(diào)節(jié),缺鐵TRF升高,鐵治療后恢復(fù)??捎糜谪氀脑\斷(缺鐵性低色素性貧血TRF升高,再障時TRF正?;蛘呓档停┖蛯χ委煹谋O(jiān)測。 降低:急性時相反應(yīng)、慢性肝病、營養(yǎng)不良及蛋白丟失時; 升高:妊娠或雌激素會使其降低;缺鐵性低色素貧血。 參考值: 2.5-4.3 g/L (成人) 1.30-2.75 g/L (新生兒),44,結(jié)構(gòu):

18、MW=11800, 100個aa殘基構(gòu)成的單鏈多肽,分子中含一對二硫鍵,不含糖。 理化性質(zhì): pI 值為5.7,淋巴細胞合成,存在細胞表面,特別是淋巴和腫瘤細胞。釋放入血循環(huán)。半衰期107 分鐘,幾乎由腎小管回收。 測定方法:放射免疫化學(xué)等。,(九)2 微球蛋白(BMG),45,功能:分子量小,可自由通過腎小球濾過膜,在腎小管幾乎全部重吸收,可監(jiān)測腎小管功能;是HLA(人類白細胞抗原)鏈的輕鏈部分。 臨床意義:增高:腎功能衰竭,炎癥及腫瘤時。 參考值:1.0 2.5 mg/L (血漿),性質(zhì):因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn),可結(jié)合肺炎球菌細胞壁C-多糖的蛋白質(zhì)而命名。 結(jié)構(gòu): MW11.5-14

19、萬,分子含個相同的亞基,亞基間靠非共價鍵連接成圓盤狀多聚體。 理化性質(zhì):肝合成, pI 值為6.2,電泳位于 區(qū)帶。 測定方法:半定量沉淀法(早),免疫化學(xué)法。,(十)C-反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP) 急性時相反應(yīng)蛋白,47,功能:結(jié)合多糖,磷脂和核酸;激活補體,抗凝。 臨床意義: 第一個認定的急性時相反應(yīng)蛋白,是急性時相反應(yīng)的一個敏感指標,在、創(chuàng)傷、感染、外科手術(shù)、腫瘤浸潤時含量迅速升高,達到正常的2000倍。 CRP是非特異性指標,需結(jié)合臨床病史。 參考值: 8.0mg/L (血漿),48,急性時相反應(yīng)蛋白分類:,升高:其他種蛋白質(zhì)。,降低:前白蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白,49,第二節(jié) 體液蛋白質(zhì)測定

20、,總蛋白測定,個別蛋白質(zhì)的測定,蛋白分離測定技術(shù),發(fā)展趨勢:,測定體液標本:,血漿:普遍,尿液,腦脊液和胸腹水等:有選擇性的組織病變檢查,50,免疫化學(xué)法特異定量個別蛋白質(zhì),體液蛋白質(zhì)的測定方法概括:,常規(guī):免疫濁度法、免疫擴散法,免疫電泳法, 微量:放射免疫測定(RIA),酶免疫測定法(ELA/ELISA),51,電泳測定:,定量化學(xué)測定TPr,Alb,電泳 組成圖譜 半定量 定量,染料結(jié)合法,UV法,折光法等,52,一、血清總蛋白測定,假設(shè):,、 純多肽鏈,含氮量平均為16 % 、各種蛋白質(zhì)與化學(xué)試劑反應(yīng)性一致,僅為相對定量,53,測定依據(jù):蛋白質(zhì)測定一般利用蛋白質(zhì)以下的結(jié)構(gòu)或性質(zhì),1、元

21、素組成測定:含N穩(wěn)定; 2、重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu):具有多個肽鍵; 3、酪氨酸和色氨酸與Folin-酚試劑反應(yīng)顯色或UV 吸收; 4、與色素結(jié)合的能力:與染料以離子鍵或共價鍵連接; 5、沉淀后借濁度測定:光度計測定; 6、光折射測定:折射儀測定。,54,方法:,1.凱氏定氮法參考方法2.雙縮脲法( 推薦) 3.酚試劑法4.散射比濁法 5.染料結(jié)合法6. UV 法 .折光測定法,55,1.凱氏定氮法參考標準方法(0.05mg N 0.3g pro),消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨;(耗時) 蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā); 吸收用酸性溶液(硼酸)吸收氣態(tài)氨(使H+ ) 滴定用已標定的無機酸滴(使H

22、+ 恢復(fù)),計算總氮量 定蛋白(總氮量-非蛋白氮)6.25=蛋白含量,納氏試劑:碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物,其色度與氨氮含 量成正比。,原理:,56,評價:,優(yōu)點:準確度高,精密度高,靈敏度高,是公認的參考方法。 缺點:操作復(fù)雜,費時,不適合常規(guī)檢測,血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是疾病時。,應(yīng)用:標準蛋白的標定及校正其它常規(guī)方法,57,2.雙縮脲法,原理:,蛋白質(zhì)中的肽鍵(-CONH-)在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物, 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比,而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無關(guān)。,條件:至少含兩個肽鍵(-CONH-)基團才能和Cu2+形成

23、絡(luò)合物,氨基酸及二肽無反 應(yīng),三肽以上才能反應(yīng)。,雙縮脲生成,58,評價:,優(yōu)點:簡便,準確,重復(fù)性好,10g-120g/L線性好,特異性與精密度好,批內(nèi)CV%2%,顯色穩(wěn)定。 缺點:靈敏度較差,對蛋白質(zhì)含量低的體液標本不適合。,應(yīng)用:常規(guī)推薦方法。手工或上機使用。,59,3.酚試劑法,原理:,蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應(yīng)生成藍色化合物,,Lowry改良法:在酚試劑中加入Cu2+(75%呈色),提高了呈色的靈敏度,為雙縮脲法的100倍左右。,60,評價及應(yīng)用:,優(yōu)點:操作簡單,改良法靈敏度高(10g-60g),適合測定蛋白含量少的標本。 缺點:各種蛋白

24、質(zhì)酪氨酸和色氨酸比例不同,只適合測定單一蛋白質(zhì)。受一些藥物干擾。,61,4.比濁法,原理:,評價及應(yīng)用:,優(yōu)點:簡便不需特殊儀器。 缺點:濁度形成的干擾因素多(加試劑方法,反應(yīng)溫度,蛋白絮狀沉淀等),某些酸類(磺基水楊酸等)和血清蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生沉淀,測其濁度,與標準對比,可求蛋白含量。,62,5.染料結(jié)合法,在酸性環(huán)境下,帶正電的蛋白質(zhì)(-NH3+)與染料的陰離子產(chǎn)生顏色反應(yīng),使染料的吸收峰改變,可既而用分光光度法比色測定。,原理:,常用染料:氨基黑,考馬斯亮藍等,評價及應(yīng)用:,優(yōu)點:操作簡便,重復(fù)性好,靈敏度高,且干擾因素少。 缺點:特異性不高;不同蛋白質(zhì)和染料的結(jié)合力不一致,標準物不易確定

25、。,63,6.紫外分光光度法,蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白質(zhì)溶液在280nm處有一吸收峰。可用于測定蛋白質(zhì)但需避免核酸干擾。 (1)Lowry-Kalcker 公式 蛋白質(zhì)濃度(mg/ml)=1.45 A 280 - 0.74 A 260 (2)Warburg-Christian 公式 蛋白質(zhì)濃度(mg/ml)=1.55 A 280 - 0.76 A 260,原理:,64,評價及應(yīng)用:,優(yōu)點:敏感而簡便,可保留蛋白生物活性,常用與較純的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度計及石英比色皿。 缺點:各種蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸含量和比例不同;在280nm測定易受游離色aa和酪aa以及尿

26、酸和膽紅素的干擾;導(dǎo)致準確性和特異性受影響。 措施:在220-225nm波長區(qū)域,用0.15mol/l的NaCl稀釋1000-2000倍可消除干擾。,65,7.折光測定法,溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率,在固定波長和溫度下,光折射率和血清中蛋白質(zhì)含量成正比。,原理:,評價及應(yīng)用:,優(yōu)點:簡便、快速,易掌握,重復(fù)性較好,適合臨床急診,體檢篩查和胸腹水蛋白質(zhì)測定。 缺點:準確性較差,易受高血脂癥,高膽紅素血癥以及溶血等因素影響,會由于A/G比值變化而產(chǎn)生誤差。,66,參考范圍:成人6080g/L,臨床意義:,總蛋白升高:,總蛋白降低:丟失過多 消耗增加 白蛋白合成減少 水腫,真性升高:MM

27、、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等,假性升高:機體明顯失水,總蛋白含量相對升高, A/G幾乎不變,67,二、血清白蛋白測定,方法:,1.染料結(jié)合法( 推薦) 2.鹽析法 3.電泳法4.免疫化學(xué)法,68,1.染料結(jié)合法( 推薦),原理: 血清ALB可通過離子鍵或疏水鍵與包括染料在內(nèi)的各種有機離子結(jié)合,而GLB很少結(jié)合外源性染料,可在不分離ALB與GLB的情況下直接測定ALB。,染料,BCG,BCP,優(yōu)點,缺點,易于和非人源性白蛋白結(jié)合 與白蛋白結(jié)合特異性較差,與非人源性白蛋白結(jié)合力弱 與白蛋白結(jié)合特異性好,在30秒內(nèi)測可提高特異性,69,應(yīng)用及評價:,嚴格控制反應(yīng)時間的BCG法既適合手工也適合自動

28、 化分析。臨床上推薦使用。,70,原理: 鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質(zhì)的水化膜、中和其所帶的電荷從而使蛋白質(zhì)分子聚集而沉淀析出。 各種蛋白質(zhì)的親水性和帶電荷不同,故鹽析時所需鹽濃度與pH不同。GLB在生理pH下帶電荷及水化膜比ALB少,可被較低濃度中性鹽沉淀。,2.鹽析法,中性鹽:硫酸銨、硫酸鈉等,71,應(yīng)用及評價:,操作繁瑣, 不宜自動化,基本不用,72,3.電泳法,操作:,醋纖膜電泳,染色,晾干,透明,光密度儀掃描,洗脫,比色,染色,分離,測得蛋白組分百分比,計算得出各種蛋白質(zhì)含量,半定量,定量,73,評價及應(yīng)用:,優(yōu)點:電泳特異性好,可了解血清蛋白質(zhì)全貌,缺點:電泳技術(shù)繁瑣,不

29、易自動化;白蛋白與染料 親和力高會導(dǎo)致結(jié)果偏高,74,4.免疫化學(xué)法,原理及特點:,應(yīng)用:特異性高,但成本較高,費時,生化檢驗用的不多.,75,參考范圍:成人3555g/L.,臨床意義:,白蛋白升高:,白蛋白降低:丟失過多 消耗增加 白蛋白合成減少 水腫 先天性ALB缺乏病,真性升高:未見,假性升高:機體明顯失水,或治療輸入過多白蛋白,76,三、血清球蛋白測定,方法:,間接法:TP-ALB=GLB,直接法:乙醛酸比色法(GLB中的色氨酸遠大于ALB中的色氨酸含量),色氨酸+乙醛酸 紫色化合物,H+,Hopkins-Cole反應(yīng):,參考范圍: 成人2030g/L. A/G:1.52.5 A/G1,比例倒置,清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起,見于嚴重肝功能損傷及M蛋白血癥,如慢性重度以上持續(xù)性肝炎、肝硬化、原發(fā)性肝癌、多發(fā)性骨髓瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥等。,77,臨床意義:,球蛋白升高:,球蛋白降低:合成減少、低或無-球蛋白血癥,真性升高(常見):自身免疫性疾病、感染反 應(yīng)、MM、巨球蛋白血癥。,假性升高(少見):機體明顯失水。,78,四、血漿纖維蛋白原測定,血漿纖維蛋白原:,結(jié)構(gòu)特點:凝血因子,肝合成,MW=3

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論