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1、G test and GM test,1,一、血清G試驗(yàn) 二、血清GM試驗(yàn) 三、肺泡灌洗液GM試驗(yàn),主 要 內(nèi) 容,2,血清G試驗(yàn)原理 血清G試驗(yàn)的臨床價(jià)值 血清G試驗(yàn)檢測(cè)方法 血清G試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況 血清G試驗(yàn)假陰性的情況 血清G試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限,一、血清G試驗(yàn),3,1.1 血清G試驗(yàn)原理,G試驗(yàn)檢測(cè)的是真菌的細(xì)胞壁成分-1,3-D-葡聚糖(BG),人體的吞噬細(xì)胞吞噬真菌后,能持續(xù)釋放該物質(zhì),使血液中含量增高。 定植時(shí)BG很少釋放入血,因此可有助于鑒別真菌侵襲與定植。,-(1,3)-D-葡聚糖,細(xì)胞核,(1-3)-D-Glucan,鱟變形細(xì)胞裂解物的G因子,活化G因子,凝固酶原,凝固酶,凝固
2、蛋白原,凝固蛋白(凝膠),4,1 ,3-D 葡聚糖為真菌細(xì)胞壁成分,適用于除隱球菌和接合菌(毛霉菌)外的所有深部真菌感染的早期診斷,尤其是念珠菌和曲霉菌,但不能確定菌種。 診斷侵襲性真菌感染(如侵襲性念珠菌病、侵襲性曲霉菌病、肺孢子菌肺炎等)的方法之一。,1.2 血清G試驗(yàn)的臨床價(jià)值,5,1.3 血清G試驗(yàn)檢測(cè)方法,Fungitec G test 陽(yáng)性閾值為20ng/L 敏感性67-100% 特異性84-100%,Glucatell test 陽(yáng)性閾值為60ng/L或80ng/L 敏感性70-80% 特異性90%左右,6,使用纖維素膜進(jìn)行血透,標(biāo)本接觸過(guò)紗布或其他含有葡聚糖的材料; 靜脈輸注免
3、疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品; 標(biāo)本中存在脂多糖; 操作者處理標(biāo)本時(shí)存在污染; 使用多糖類(lèi)抗癌藥物; 放化療造成的粘膜損傷導(dǎo)致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經(jīng)胃腸道進(jìn)入血液; 服用多粘菌素,厄他培能,頭孢噻肟、吡肟, 磺胺也會(huì)不同程度引起假陽(yáng)性。,1.4 血清G試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況,7,隱球菌具有厚壁包膜,生長(zhǎng)緩慢,導(dǎo)致假陰性; 局灶性曲菌病,BG很少釋放入血; 抗真菌藥物的使用。,1.5 血清G試驗(yàn)假陰性的情況,8,優(yōu)勢(shì): 鑒別侵襲性感染與定植; 不受機(jī)體免疫狀態(tài)影響,早于臨床診斷平均4天;是早期真 菌感染的敏感生物標(biāo)志。 局限: 不能區(qū)分真菌的種類(lèi)。,1.6 血清G試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限,9,
4、血清GM試驗(yàn)原理 血清GM試驗(yàn)的臨床價(jià)值 血清GM試驗(yàn)檢測(cè)方法 血清GM試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況 血清GM試驗(yàn)假陰性的情況 血清GM試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限,二、血清GM試驗(yàn),10,GM試驗(yàn)檢測(cè)的是半乳甘露聚糖(glactomannan,GM),主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷; 半乳甘露聚糖是廣泛存在于曲霉和青霉細(xì)胞壁的一種多糖,菌細(xì)胞壁表面菌絲生長(zhǎng)時(shí),半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放,是最早釋放的抗原; 檢測(cè)法是一種微孔板雙抗體夾心法,采用小鼠單克隆抗體EBA-2,檢測(cè)人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。,2.1 血清GM試驗(yàn)的原理,11,曲菌定植時(shí)極少釋放入血,因此有助于鑒別侵襲與定植; GM釋放量與菌量成
5、正比,可以反映感染程度; 連續(xù)檢測(cè)GM可作為治療療效的監(jiān)測(cè); 在造血干細(xì)胞移植患者中的診斷敏感性高; 參考值:I0.5為陽(yáng)性。,2.2 血清GM試驗(yàn)的臨床價(jià)值,12,使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦; 新生兒和兒童(雙歧桿菌定植、食用乳制品); 血液透析; 自身免疫性肝炎等; 食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物。,2.3 血清GM試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況,13,釋放入血循環(huán)中的曲霉GM并不持續(xù)存在而是會(huì)很快清除; 以前使用了抗真菌藥物; 病情不嚴(yán)重; 非粒細(xì)胞缺乏的患者。,2.4GM試驗(yàn)假陰性的情況,14,優(yōu)勢(shì): 鑒別曲霉菌侵襲性感染與定植; 早于臨床癥狀和影像學(xué)異常1周; GM診斷侵襲性曲霉
6、感染的敏感度高于G試驗(yàn); 血清中存在時(shí)間較短,可作為療效監(jiān)測(cè)。 局限: 不能區(qū)分曲霉菌的種類(lèi)。,2.5 血清GM試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限,15,G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的聯(lián)合使用,同時(shí)測(cè)定G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)有助于早期診斷侵襲性真菌感染!,16,血液病患者中IPA診斷價(jià)值(回顧性、前瞻性); 重癥COPD患者合并IPA的診斷價(jià)值; 綜合ICU中重癥患者IPA的診斷價(jià)值。,三、肺泡灌洗液(BAL)的GM試驗(yàn),17,回顧性分析99名血液病患者,其中58名確診或臨床診斷IPA者。所有患者的BALF樣本均用Platelia(雙夾心酶聯(lián)免疫吸附的方法檢測(cè)GM水平的試劑盒)檢測(cè)。 結(jié)果顯示,與培養(yǎng)法(50%)和顯微鏡法(53
7、.3%)相比,BALF的GM檢測(cè)法敏感性更高91.3%,光密度(OD)臨界值1.0,陽(yáng)性、陰性預(yù)測(cè)值分別為76%和96%(OD臨界值1.0)。 中性粒細(xì)胞減少患者和未見(jiàn)減少者的平均OD臨界值無(wú)差異。 在接受預(yù)防性抗真菌治療的患者中,GM檢測(cè)法敏感性下降顯著。,Bronchoalveolar lavage fluid galactomannan for the diagnosis of invasive pulmonary aspergillosis in patients with hematologic diseases,Clin Infect Dis. 2009 Dec 1;49(11):
8、1688-93.,3.1 文獻(xiàn)一,18,3.1 文獻(xiàn)一:研究結(jié)果,19,目的:前瞻性的病例對(duì)照研究,以確診或臨床診斷的侵襲性肺曲霉菌?。↖PA)血液病患者VS 不符合確診或者擬診IPA診斷標(biāo)準(zhǔn)的血液病患者組以及無(wú)曲霉感染證據(jù)的非血液病患者組。 結(jié)果:10例病例組VS 52例對(duì)照組,病例組BAL的GM試驗(yàn)OD值明顯高于對(duì)照組,通過(guò)ROC分析,合適的OD界值點(diǎn)為1.1,具有98.1%的特異性和100%的敏感性。,Galactomannan testing of bronchoalveolar lavage fluid is useful for diagnosis of invasive pulm
9、onary aspergillosis in hematology patients.,BMC Infect Dis. 2010 Mar 3;10:44.,3.1 文獻(xiàn)二,20,明確肺泡灌洗液中GM檢測(cè)在重癥慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并侵襲性肺曲霉菌病中的臨床價(jià)值。 結(jié)果:(1) 50例重癥COPD患者中有34例行纖維支氣管鏡檢查并獲取BALF標(biāo)本,IPA臨床診斷9例,疑診6例,定植2例,對(duì)照組17例;(2)根據(jù)ROC曲線(xiàn),當(dāng)BALF中GM分光光度比值以0.795為界值時(shí)其IPA診斷靈敏度為88.9%,特異度為95.1%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100%,陰性預(yù)測(cè)值為93.7%。,支氣管肺泡灌洗液半乳
10、甘露聚糖檢測(cè)在重癥COPD合并侵襲性肺曲霉菌病中的臨床價(jià)值,2010年危重癥醫(yī)院全國(guó)會(huì)議,3.2 文獻(xiàn)三,21,目的:比較肺泡灌洗液GM試驗(yàn)和血清GM試驗(yàn)及G試驗(yàn)對(duì)重癥患者肺侵襲性曲霉菌病的診斷效度。 入組:51人納入研究,9例侵襲性曲霉菌病(IA)(4例確診,5例臨床診斷),3例肺孢子菌肺炎(PJP),1例混合IA和PJP。,A prospective comparison of galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid for the diagnosis of pulmonary invasive aspergillosis in medical patients under intensive care: comparison with the diagnostic performance of galactomannan and of (1 3) d-glucan chromogenic assay in serum samples,Clin Microbiol Infect 2011; 17: 10531060,3.3 文獻(xiàn)四,22,3.3 文獻(xiàn)四:研究結(jié)果,23,All IA,Proven IA,All IF
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