紅海欖化學(xué)成分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定-中國試驗(yàn)方劑學(xué)雜志

1、紅海欖化學(xué)成分研究梁成欽1，龔受基1，周先麗1，徐慶1，蘇小建2 收稿日期通訊作者 蘇小建， Tel:，E-mail: 作者簡介梁成欽(1977-),男，助理研究員，碩士，研究方向：天然藥物化學(xué)研究；Tel:，E-mail:，朱秋燕2（1. 廣西桂林醫(yī)學(xué)院，廣西桂林；2. 廣西師范大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院，廣西桂林）摘要目的：研究紅海欖的化學(xué)成分。方法：利用硅膠柱層析和葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱層析進(jìn)行分離純化；采用化合物的理化性質(zhì)和NMR、IR、MS等波譜方法對各單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從紅海欖中分離得到了7個

2、化合物，它們分別是：-香樹脂醇（1）、豆甾醇（2）、白樺脂酸（3）、胡蘿卜甙（4）、蘆丁（5）、D-甘露醇（6）和六十炔烴（7）。結(jié)論：其中化合物（1）、（2）、（3）、（6）和（7）為首次從該植物中分離得到。關(guān)鍵詞紅海欖；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定中圖分類號：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：Studies on Chemical Constituents of Rhizophora stylosaLIANG Cheng-qin1, GONG Shou-ji1, ZHOU Xian-li, XU Qing1 , SU Xiao-jian2*, Zhu Qiu-yan2(1. Guilin Medi

3、cal College, Guilin ,China; 2. College of Environment and Resources of Guangxi Normal University, Guilin ,China)Abstract Objective: To study the chemical constituents of Rhizophora stylosa. Methods: The constituents were isolated and purified by silica gel column chromatograph and Sephadex LH-20 col

4、umn chromatograph. Their structures were elucidated through their physicochemical properties and spectroscopic analysis such as 1H-NMR, 13C-NMR and FT-IR. Results: Eight compounds were isolated from Rhizophora stylosa, they were identified as-amyrin(1), Stigmasterol(2), Betulinic acid (3), Daucoster

5、ol(4), Rutin(5), D-Mannitol(6) and sixty Alkyne (7). Conclusion: Compounds （1）,（2）,（3）,（6）and（7） were isolated from the plant for the first time. Key words Rhizophora stylosa; Chemical constituents; Structure identification紅海欖(Rhizophora stylosa) 是紅樹科(Rhizophraceae)中的一種紅樹林植物，生長于熱帶和亞熱帶沿海潮間帶，具有解毒利咽，清熱

6、利濕，涼血止血，斂肺止咳，澀腸止瀉等藥用功效，在東南亞沿海具有較長的藥用歷史1。目前，世界各國對紅樹植物的活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)及其藥理研究表明， 紅樹植物含萜類、多糖和生物堿等化合物，具有抗艾滋病、抗腫瘤、抑菌和抗氧化等活性2。從報道得知，紅海欖含有二萜、三萜、甾體、黃酮和生物堿等化合物3。目前有關(guān)紅海欖化學(xué)成分的研究并不多4，所以為有效保護(hù)和合理開發(fā)我國紅海欖資源，從中尋找具有藥用價值的生物活性成分，我們對紅海欖化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步研究，并從中分離得到了7個化合物，分別為-香樹脂醇（1）、豆甾醇（2）、白樺脂酸（3）、胡蘿卜甙（4）、蘆?。?）、D-甘露醇（6）和六十炔烴（7）。其中化合物（1）、（2

7、）、（3）、（6）和（7）為首次從該植物中分離得到。1材料紅外光譜儀（美國Nicolet公司Avatar 360 FT-IR）；核磁共振儀（瑞士Bruker公司ADVANCE AV 500 MHz）；X-4 型顯微熔點(diǎn)測定儀(溫度計未校正，北京泰克儀器有限公司)；薄層層析用硅膠GF254、柱層析用硅膠（200300目）（青島海洋化工廠），其他試劑均為國產(chǎn)分析純。 紅海欖采自廣西北海合浦，并由中國科學(xué)院廣西桂林植物研究所黃定中高工鑒定為紅海欖(Rhizophora stylosa)，樣品標(biāo)本保存于桂林醫(yī)學(xué)院科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心。2提取分離紅海欖樹葉(3.5 kg)和枝(4.0 kg)，自然風(fēng)干后，分別用

8、80 %乙醇回流提取3次（固液比18），每次提取1 h，合并提取液并減壓回收溶劑至無酒精味，分別得葉和枝濃縮液，然后再分別依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，減壓濃縮萃取液得各萃取部位浸膏。將葉石油醚萃取物(3.5 g)進(jìn)行硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯（100010）進(jìn)行梯度洗脫，所得到流分再反復(fù)硅膠柱層析，得到化合物1(16.7 mg)和化合物2(12.5 mg)。將葉正丁醇萃取物（16.587 g）進(jìn)行硅膠柱層析，分別用氯仿-甲醇（8020，6040，0100）進(jìn)行洗脫，所得流分反復(fù)進(jìn)行Sephadex LH-20柱層析，用甲醇進(jìn)行洗脫，得到化合物5(34.5 mg)和化合物6

9、(26.8 mg)。將枝氯仿萃取物（10.6 g）進(jìn)行硅膠（200-300目）柱層析，用氯仿-丙酮（100010010）、乙酸乙酯-甲醇(100010010)依次進(jìn)行梯度洗脫，所得流分再反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析和Sephadex LH-20柱層析，得到化合物7（7.6 mg），化合物3（8.4 mg），化合物4(6.6 mg)。3結(jié)構(gòu)鑒定化合物1白色粉末（乙酸乙酯），mp：192.0193.0 。以石油醚乙酸乙酯=51展開，Rf=0.26；石油醚乙酸乙酯=41展開，Rf=0.38，碘顯色，均為單一斑點(diǎn)。TLC板展開后，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱顯紫紅色。ESI-MSm/z425M-H-。IR（KBr

10、壓片法）cm-1: 3413(OH)，2946，2853，1465，1387(CH3)。1H NMR譜中(CDCl3，500MHz)，0. 82(2)、0.86、0. 89、0. 96、0. 99、1. 02、1. 16(各3H，s)，分別為8個甲基質(zhì)子信號，3. 25(1H， dd，J=5.0，10.0Hz，H-3)，5. 21(1H, br. s, H-12)。13C-NMR譜中(CDCl3)，共給出30個碳信號，其中145. 2和121. 8為一對雙鍵碳信號，79. 0為連氧次甲基碳信號，15. 056. 0有27個SP3雜化的碳信號，13C NMR數(shù)據(jù)及歸屬見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)5報道

11、的基本一致，故鑒定該化合物為-香樹脂醇(-amyrin，C30H50O)。化合物2無色片狀晶體（乙酸乙酯），mp：145.0147.0。ESI-MSm/z413MH。以石油醚乙酸乙酯=71展開，Rf=0.38；石油醚乙酸乙酯=41展開，Rf=0.43，碘顯色，均為單一斑點(diǎn)。TLC板展開后，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱顯紫紅色。IR（KBr 壓片法）cm-1： 3419 (OH)，3030，2948，2851，1464，1381，1056；13C NMR數(shù)據(jù)及歸屬見表1，此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)6報道的基本一致，故鑒定該化合物為豆甾醇（Stigmsterol，C29H48O）?；衔?無色針狀晶體(氯仿-甲

12、醇)，mp：274276。1HNMR(CDCl3，500MHz) H(ppm): 0.64(3H，s), 0.75(3H，s), 0.86(6H，s), 0.92(3H，s), 1.63(3H, s，H-29), 分別為6個甲基質(zhì)子信號。13C NMR數(shù)據(jù)及歸屬見表1，此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)7報道的基本一致，故鑒定該化合物為白樺脂酸(Betulinic acid，C30H48O3)。 化合物4白色無定形粉末（甲醇），mp：293.5295.4 ，Libermann-burchard反應(yīng)為陽性，IR（KBr 壓片法）cm-1：3362 (OH)，1647，1653(C=C)，2928、2850 (CH3)

13、，1458，1367 (CH3)，2863 (CH2)，1023 (C-O)；1HNMR(DMSO-d6，500 MHz)中，5. 41(1H, br. s, H-6)，4.32(1H，d，J=7.7 Hz，H-1)，0.75(3H，s)、0.90(9H，m)，0.99(3H，s)、1.06(3H，s)，分別為6個甲基質(zhì)子信號。此化合物的13C NMR數(shù)據(jù)及歸屬見表1，此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)8報道的基本一致，故鑒定該化合物為胡蘿卜甙（Daucosterol ，C35H60O6）。表1化合物14的13C NMR的數(shù)據(jù)歸屬（化合物1、2、3： CDCl3；化合物4：DMSO-d6，500 MHz）Table

14、 1 13C NMR spectra data of Compound 14（Compound 1，2，3: CDCl3; Compound 4: DMSO-d6，500 MHz）No.1234No.1234No.4C-138.637.338.837.3C-1627.028.932.240.4C-1101.4C-227.331.727.529.7C-1732.556.155.956.0C-273.9C-379.071.877.379.0C-1847.312.047.112.1C-379.6C-438.942.439.038.8C-1946.919.449.119.5C-470.6C-555.2

15、140.855.4140.9C-2031.140.4150.836.0C-579.3C-618.4121.718.4121.6C-2134.821.029.719.4C-661.6C-732.731.934.431.9C-2237.0138.337.233.9C-838.832.040.731.9C-2328.1129.428.636.7C-947.750.250.450.1C-2415.5C-1037.236.537.226.0C-2515.631.916.229.2C-1123.520.220.921.1C-2616.818.916.419.0C-12121.839

16、.825.628.2C-2726.021.014.820.1C-13145.242.338.142.3C-2828.425.4177.723.1C-1441.856.842.556.7C-2933.311.919.412.2C-1526.224.430.624.3C-3023.7110.0化合物5淺黃色粉末(甲醇)， mp：177.0178.0， HCl-Mg反應(yīng)呈紫色， Molish反應(yīng)界面呈紫紅色，指示該化合物為黃酮的苷類化合物。ESI-MSm/z609M-H-。IR(KBr壓片法) cm-1：3352 (OH)，2939，1657 (C=O)，1602, 1572, 1505。1HNMR

17、(CDCl3，500 MHz)12.58(1H，S，5-OH)， 10.83(1H，S，7-OH)，9.65(1H，S，4-OH)，9.17(1H，S，3-OH)， 5.27(1H，d，J=3.5，2-OH)， 5.09(1H，d，J=3.9，3-OH)， 5.06(1H，d，J=5.7，4-OH)，4.51(1H，S, 2-OH)，4.36(1H，S， 3-OH)，4.32(1H，S， 4-OH)，7.53(1H，d，J=8.1，H-6)，7.52(1H，S，H-2)，6.83(1H，d， J=8.1，H-5)，6.38(1H，d，J=1.5，H-8)，6.18(1H，d，J=1.5，H-6

18、)，5.33(1H，d，J=6.9，H-1) 和4.38(1H，S， H-1)，0.98(3H，d，J=6.1)，3.04-4.00(葡萄糖基和鼠李糖吡喃環(huán)上的10個H)。13CNMR(CDCl3，500 MHz) 177.8（C-4），164.5（C-7），161.7 (C-5)，157.1 (C-2)，156.9 (C-9)， 148.9 (C-4)，145. (2C-3)，133.8 (C-3)； 122.0 (C-6)， 121.7 (C-1)，116.7 (C-2)， 115.7 (C-5)，104.4 (C-10)， 101.7 (C-1)，101.2 (C-1)，99.1 (C-

19、6)，94.0 (C-8)；76.9 (C-3)， 76.3 (C-5)， 74.6 (C-2)， 72.3 (C-4)， 71.1 (C-4)，70.8 (C-2)， 70.5 (C-3)， 68.7 (C-5)，67.5 (C-6)，18.2 (C-6)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)9基本一致，故鑒定該化合物為蘆?。≧utin，C27H30O16）。化合物6白色針狀晶體（甲醇），該化合物在加熱條件下溶于甲醇。mp：167.81685 ，Molish反應(yīng)陽性，易溶于水，難溶于低極性有機(jī)溶劑。IR(KBr壓片法)cm-1：3400-3200(OH)，2948(CH2)，1419(CH2)，1083、1020

20、(C-O)，930(OH)。由1HNMR(DMSO-d6，500 MHz)譜數(shù)據(jù)可知，處于較低場的:4.40(2 H，d，J=5.5Hz，C2，5-OH)，4.32(2 H，t，J=5.0 Hz，C1，6-OH)，4.12(2 H，d，J=7.2 Hz，C3，4-OH)，分別是醇羥基的氫質(zhì)子，與碳上所連質(zhì)子明顯偶合；而處于較高場3.303.65處的質(zhì)子峰，推測為其余氫質(zhì)子的堆積峰。結(jié)合13CNMR(DMSO-d6，500 MHz)譜可知分子結(jié)構(gòu)具有對稱性，：71.8(2C，C-3，C-4)，70.2(2C，C-2，C-5)，64.3(2C，C-1，C-6)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)10報道的數(shù)據(jù)基本一致

21、，所以確定該化合物為D-甘露醇（D-Mannitol，C6H14O6）?；衔?白色粉末（氯仿），mp：58.660.2。APCI-MS m/z 839M+H+。IR（KBr 壓片法）cm-1：2918，2849，2115，1473，723。1HNMR (CDCl3，500 MHz)顯示有四組氫信號，H（ppm）：2.37（t，2H）， 1.66（m，2H）， 1.28（m，44H）， 0.90（t ，3H）。1H NMR在化學(xué)位移1.28 ppm和0.90 ppm兩個高場區(qū)有信號峰，并在化學(xué)位移0.90 ppm處是一變形的三重峰，此為長鏈脂肪烴的多個亞甲基所產(chǎn)生的次級效應(yīng)11 。結(jié)合IR譜圖分析，由于3000 cm-1以上無不飽和烴的C-H伸縮振動吸收峰，說明該不飽和鍵為三鍵，且不在端位。在2115 cm-1附近區(qū)域無CC