GB 5009.169-2016 食品安全國家標準 食品中?；撬岬臏y定

016 前 言本標準代替003食品中?；撬岬臏y定010食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測定。本標準與003相比,主要變化如下:標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中?；撬岬臏y定”;增加了加了丹磺酰氯柱前衍生高效液相色譜法為第二法;刪除了薄層色譜法。0161 食品安全國家標準食品中?；撬岬臏y定1 范圍本標準規(guī)定了食品中牛磺酸測定的方法。本標準適用于嬰幼兒配方食品、乳粉、豆粉、豆?jié){、含乳飲料、特殊用途飲料、風(fēng)味飲料、固體飲料、果凍中牛磺酸的測定。第一法 鄰苯二甲醛(后衍生高效液相色譜法2 原理試樣用水溶解,用偏磷酸沉淀蛋白,經(jīng)超聲波震蕩提取、離心、微孔膜過濾后,通過鈉離子色譜柱分離,與鄰苯二甲醛(生反應(yīng),用熒光檢測器進行檢測,外標法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。磷酸。檬酸三鈉。酚。酸。醇:色譜純。酸。氧化鉀。苯二甲醛(0 聚氧乙烯月桂酸醚(鐵氰化鉀。酸鋅。粉酶:活力磷酸溶液(30g/L),用水溶解并定容至10000162 ),加950入1),用硝酸( 柱后熒光衍生溶液(鄰苯二甲醛溶液)酸鉀溶液():),),用水溶解并定容至1000苯二甲醛衍生溶液:),用10)溶解后,)0),硼酸鉀溶液(容至1000用前現(xiàn)配。淀劑:1),用水溶解并定容至100沉淀劑在室溫下3個月內(nèi)穩(wěn)定。淀劑:2),用水溶解并定容至100沉淀劑在室溫下3個月內(nèi)保持穩(wěn)定。準品純度99%,07磺酸標準儲備溶液(1mg/用水溶解并定容至100 ?；撬針藴使ぷ饕簩⑴；撬針藴蕛淙芤?水稀釋制備一系列標準溶液,標準系列濃度為:0g/用前現(xiàn)配。4 效液相色譜儀:帶有熒光檢測器。后反應(yīng)器。光衍生溶劑輸液泵。聲波震蕩器。4.5 心機:不低于5000r/孔濾膜:平:0163 5 樣制備準確稱取固體試樣1g5g(錐形瓶中,加入40左右溫水20勻使試樣溶解,放入超聲波振蕩器中超聲提取10加50),充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進樣。谷類制品,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入40左右溫水40入淀粉酶(酶活力勻后向錐形瓶中充入氮氣,蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱中30出冷卻至室溫,再加50),充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進樣。準確稱取液體試樣(乳飲料除外)5g30g(錐形瓶中,加50),充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進樣。?；撬岷扛叩娘嬃项愊扔盟♂尩竭m當(dāng)濃度,最后一步稀釋時,加入50)充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進樣。果凍類試樣,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入20060水浴20卻后,加入50)充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進樣。乳飲料試樣,稱取5g30錐形瓶中,加入40左右溫水30分混勻,置超聲波振蕩器上超聲提取10卻到室溫。渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100分混勻,樣液于5000r/濾,接取中間濾液以備進樣。譜柱:鈉離子氨基酸分析專用柱(25相當(dāng)者。動相:檸檬酸三鈉溶液(動相流速: 熒光衍生溶劑流速: 柱溫:55。測波長:激發(fā)波長:338射波長:425 進樣量:20L。準曲線的制作將標準系列工作液分別注入高效液相色譜儀中,測定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積,以標準工作液的濃度為橫坐標,以響應(yīng)值(峰面積或峰高)為縱坐標,繪制標準曲線。0164 樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到色譜峰高或峰面積,根據(jù)標準曲線得到待測液中?；撬岬臐舛?平行測定次數(shù)不少于兩次。6 分析結(jié)果的表述試樣中?；撬岷堪词?1)計算:A=c000100(1)式中:A試樣中?；撬岬暮?單位為毫克每百克(00g);c試樣測定液中牛磺酸的濃度,單位為微克每毫升(g/V試樣定容體積,單位為毫升(m試樣質(zhì)量,單位為克(g)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 法檢出限為:00g;00g。第二法 丹磺酰氯柱前衍生法9 原理試樣用水溶解,用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白質(zhì)。取上清液用丹磺酰氯衍生反應(yīng),衍生物經(jīng)紫外檢測器(254熒光檢測器(激發(fā)波長:330射波長:530測,外標法定量。10 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。腈:色譜純。乙酸。酸。水碳酸鈉。酸鈉。0165 酸甲胺(甲胺鹽酸鹽)?；酋Ｂ?5色譜純。注:丹磺酰氯對光和濕敏感不穩(wěn)定,在干燥器中避光保存。酸溶液(1):吸取9用水稀釋并定容到100酸鈉緩沖液(80):加401鹽酸溶液(水定容至50溶液在室溫下3個月內(nèi)穩(wěn)定?；酋Ｂ热芤?用乙腈(解并定容至100使用前配制。酸甲胺溶液(20):用水溶解并定容至100溶液保存在4下3個月內(nèi)穩(wěn)定。酸鈉緩沖液(10,加800冰乙酸(水定容至1000準品純度99%,07磺酸標準儲備溶液(1mg/用水溶解并定容至100磺酸標準工作液(紫外檢測器用)將?；撬針藴蕛淙芤?水稀釋制備一系列標準溶液,標準系列濃度為:0g/用前現(xiàn)配?；撬針藴使ぷ饕?熒光檢測器用)將?；撬針藴蕛淙芤?水稀釋制備一系列標準溶液,標準系列濃度為:0g/用前現(xiàn)配。11 效液相色譜儀:帶有熒光檢測器或紫外檢測器或二極管陣列檢測器。旋混合器。聲波震蕩器。11.4 心機:不低于5000r/孔濾膜:平:0166 12 液提取準確稱取固體試樣1g5g(錐形瓶中,加入40左右溫水40勻使試樣溶解,放入超聲波振蕩器中超聲提取10卻到室溫,渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻。樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24類制品,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入40左右溫水40入淀粉酶(酶活力勻后向三角瓶中充入氮氣,蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱中30出冷卻至室溫。放入超聲波振蕩器中超聲提取10卻到室溫,渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻。樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24確稱取液體試樣(乳飲料試樣除外)5g30g(錐形瓶中,加20分搖勻。渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻。樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24磺酸含量高的飲料類先用水稀釋到適當(dāng)濃度,最后一步稀釋時,渦旋混合,渦旋混合,之后轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻,樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24凍類試樣,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入20060水浴20卻后,加入50)充分搖勻,放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24飲料試樣,稱取5g40錐形瓶中,加入40溫水20分混勻,置超聲波振蕩器上超聲提取10卻到室溫。渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻,樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24充分混合,室溫避光衍生反應(yīng)2h(1旋混合,以終止反應(yīng),避光靜置至沉淀完全。濾,取濾液備用。衍生物在4以下可避光保存48h。與試液同步進行衍生。譜柱:50m)或相當(dāng)者。動相:乙酸鈉緩沖液(乙腈(70+30(體積比)。動相流速:0167 溫:室溫。測波長:熒光檢測器:激發(fā)波長:330射波長:530外檢測器或二極管陣列檢測器:254樣量:20L。準曲線的制作將標準系列工作液的衍生液分別注入高效液相色譜儀中,測定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積,以標準工作液的濃度為橫坐標,以響應(yīng)值(峰面積或峰高)為縱坐標,繪制標準曲線。樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到色譜峰高或峰面積,根據(jù)標準曲線得到待測液中?；撬岬臐舛?平行測定次數(shù)不少于兩次。13 分析結(jié)果的表述試樣中?；撬岷堪词?2)計算:A=c000100(2)式中:A試樣中牛磺酸的含量,單位為毫克每百克(00g);c試樣測定液中?；撬岬臐舛?單位為微克每毫升(g/V試樣定容體積,單位為毫升(m試樣質(zhì)量,單位為克(g)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。15 00g;定量限為:00g。00g;定量限為:500g。0168 附 錄 苯二甲醛(后衍生法液相色譜圖鄰