GB 29682-2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中青霉素類藥物多殘留的測(cè)定 高效液相色譜法

  G 中華人民共和國(guó) 國(guó) 家標(biāo)準(zhǔn)  9682 2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)  水產(chǎn)品中青霉素類藥物 多 殘留 的測(cè)定  高效液相色譜法  in 電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)）  2013布  2014施  中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部  中華人民共和國(guó) 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)  發(fā)布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 產(chǎn)品中青霉素類藥物多殘留的測(cè)定  高效液相色譜法  .  1 范圍  .  2 規(guī)范性引用文件  .  3 原理  .  4 試劑與材料  .  5 儀器和設(shè)備  .  6 試料的制備與保存  .  料的制備  .  料的保存  .  7 測(cè)定步驟  .  準(zhǔn)曲線的制備  .  取  .  化  .  生化  .  定  .  白試驗(yàn)  .  8 結(jié)果計(jì)算和表述  .  9 檢驗(yàn)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度  .  敏度  .  確度  .  密度  .  附錄 A .     言  本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。  本標(biāo)準(zhǔn)系國(guó)內(nèi)首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。    水產(chǎn)品中青霉素類藥物 多 殘留 的測(cè)定  高效液相色譜法  1 范圍  本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中 4 種青霉素類藥物殘留量檢測(cè)的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法。  本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚可食性組織中青霉素 G、苯唑 西林 、雙氯青霉素和乙氧 萘 青霉素 單個(gè)或多個(gè)藥物殘留量的檢測(cè)。  2 規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成 為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。   準(zhǔn)化工作導(dǎo)則  第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則   6682 分析實(shí)驗(yàn)室 用水規(guī)格和試驗(yàn)方法  3 原理  試料中殘留的青霉素類藥物， 用乙腈提取， 凈化， 1,2,4氯化汞溶液衍生 ， 高效液相色譜 定，外標(biāo)法定量。  4 試劑與材料  以下所用的試劑 ，除特別注明外均為分析純?cè)噭?水符合  6682 規(guī)定的一級(jí)水。  霉素 G、 苯唑西林 、 雙氯青霉素 和 乙氧 萘 青霉素 標(biāo)準(zhǔn)品 ： 含量 98%。  醇  腈  水硫代硫酸鈉  水磷酸二氫鈉    水磷酸氫二鈉  酸銨  氧化鈉  己烷  1,2,4氯化汞 （  相萃取柱 ： 60  相當(dāng)者。  流動(dòng) 相 A： 取五水硫代硫酸鈉 3.9 g，用水溶解 ，再加入二水磷酸二氫鈉 10.2 g、無水磷酸氫二鈉 4.9 g、硫酸銨 6.8 g，用水溶解， 并 稀釋 至 1 000 濾膜過濾 。  氯化汞（ 液 ：  取氯化汞 （ g，用水溶解 并 稀釋 至 10 配現(xiàn)用。  5  氫氧化鈉 溶液 ： 取氫氧化鈉 20 g，用水溶解 并 稀釋 至 100  衍生化試劑 ： 取 1， 2， 4g，用水 60 解，加 氯化汞溶液 10  5  氫氧化鈉 溶液調(diào)節(jié)  水稀釋到 100 2 8 避光保存，有效期 3 個(gè)月。  1 mg/霉素類藥物 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ： 精密 稱 取 青霉素 G、 苯唑西林 、雙氯青霉素和 乙氧萘青霉素 的標(biāo)準(zhǔn)品 各 10 分別 于 10 瓶中， 用水溶解并 稀釋至刻度 ， 配制成濃度為 1 mg/ 青霉素 G、 苯唑西林 、雙氯青霉素和 乙氧萘青霉素 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ， 分裝，立刻于 20 以下 避光保存，有效期 1 個(gè)月。使用時(shí)不得反復(fù)凍融。  10 g/霉素 G 標(biāo)準(zhǔn)工作液： 精密 量取 1 mg/霉素 G 標(biāo)準(zhǔn) 貯備液 1.0 于 100 用水溶解并 稀釋至刻度 ， 配制成濃度為 10 g/ 青霉素 G 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 分裝，立刻于 20以下 避光保存，有效期 1 個(gè)月。使用時(shí)不得反復(fù)凍融。  10 g/唑西林、雙氯青霉素和 乙氧萘青霉素 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液： 精密 量取 1 mg/唑西林、雙氯青霉素和 乙氧萘青霉素 標(biāo)準(zhǔn) 貯備液各 1.0 于 100 瓶中， 用水溶解并 稀釋至刻度 ，配制成濃度為 10 g/ 苯唑西林、雙氯青霉素和 乙氧萘青霉素 混合 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 分裝，立刻于 20以 下 避光保存，有效期 1 個(gè)月。使用時(shí)不得反復(fù)凍融。  5 儀器和設(shè)備  高效液相色譜儀 ： 配紫外檢測(cè)器 。  分析天平 ： 感量 1g。  天平 ： 感量    冷凍高速離心機(jī)  恒溫水浴鍋  旋渦混合器  固相萃取裝置  組織勻漿機(jī)  氮?dú)獯蹈裳b置  離心管： 50  濾膜： m。  6 試料的制備與保存  料的制備  魚去鱗、去皮，沿背部取肌肉 組織，或取魚肌肉 +皮組織 ， 絞碎，并使均質(zhì) 。   取均質(zhì) 后的供試樣品，作為供試試料 。   取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。   取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作液 ， 作為空白添加試料。  料 的保存  以下 保 存。  7 測(cè)定步驟  準(zhǔn)曲線的制備  分別精密 量取 10 g/霉素 G 標(biāo)準(zhǔn)工作液 及 10 g/唑西林、雙氯青霉素和 乙氧萘青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液適量， 用流動(dòng)相稀釋 ，配制成 青霉素 G 濃度為 20、 50、 100、 200、 400、 800 和 1 600 g/L， 苯唑西林 、雙氯青霉素 和 乙氧萘青霉素 濃度 為 100、 200、 400、 800、 1 600、 3 200 和 6 400 g/合標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，各取 500 L，按 衍生化 步驟 操作 ， 供 高效液相色譜 測(cè)定 。 以 測(cè) 得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。    取  稱取 試料 （ 5g， 于 50 心管中，加 乙腈 15 勻， 加 正己烷 5 渦混 勻 ，  6 000 r/心 15 棄 正己烷層 液 ， 取下 層 液 ， 于 另一離心管中。殘?jiān)?再 加 乙腈 10 正己烷 5 渦 混勻 ， 6 000 r/心 15 棄 正己 烷層 液 ， 合并兩次下層液 ， 于 40 水浴旋轉(zhuǎn)蒸干 ， 用 水 5 解 殘余物 ，備用。  化  依次用甲醇 3  水 3 化， 取 備用液過柱， 用 水 1 洗，乙腈 3 脫，收集洗脫液， 于 45 50 水浴氮?dú)獯蹈?。用流?dòng)相 1.0 解 殘余物 ，旋渦 混勻 ， 備用 。  生化  準(zhǔn)確量取 備用液 500 L， 于 1.5 丙烯離心管中，加衍生化試劑 500 L，旋渦混勻， 于 65水浴反應(yīng) 10 速冰浴冷卻， 于 4  10 000 r/心 10 上清液 ， 供高效液相色譜 測(cè)定 。  定  譜條件  色譜柱： 250 4.6 徑 5 m） ，或相當(dāng)者。  流動(dòng)相： 流動(dòng)相 A+乙腈（ 65+35， v/v） 。  流速： 1 mL/ 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)： 325  柱溫： 30 。  進(jìn)樣量： 50 L。  定法  取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算 。 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中青霉素類藥物響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液和 空白添加試樣溶液的高效液相色譜圖見附錄 A。    白試驗(yàn)  除不加 試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。  8 結(jié)果計(jì)算和表述  單點(diǎn)校準(zhǔn)  試料中青霉素類藥物的殘留量（ g/按 下 式 計(jì)算     式中：  X 供試 試料中 相應(yīng)的 青霉素類藥物殘留量 ， g/ A 試樣溶液中 相應(yīng) 的 青霉素類藥物衍生物峰面積；  標(biāo)準(zhǔn)工作液中 相應(yīng) 的 青霉素類藥物衍生物峰面積；  標(biāo)準(zhǔn)工作液中 相應(yīng) 的 青霉素類藥物濃度 ， g/L；  V 衍生化后所得溶液總體積，  m 供試試料 質(zhì)量 ， g。  注：計(jì)算結(jié)果 需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。  9 檢驗(yàn)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度  敏度  本方法青霉素 G 的檢測(cè)限為 3 g /定量限為 10 g/苯唑西林 、雙氯青霉素、 乙氧萘青霉素 的檢測(cè)限為 10 g/定量限為 50 g / 確度  本方法在 10 600 g /加濃度 水平上 的回收率為 70 110。  密度   本方法 批內(nèi) 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 20%，