中藥的鑒別

LOGO第三章 中藥的鑒別第三章 中藥的鑒別1.中藥鑒別的意義 中藥真?zhèn)舞b別是中藥、生產(chǎn)、應(yīng)用、研究至關(guān)重要的第一步 2.中藥鑒別的目的鑒別真?zhèn)?.中藥鑒別的方法性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別、生物鑒別第三章 中藥的鑒別v整體vv細胞vv分子vv基因v 主要內(nèi)容主要內(nèi)容v1 性狀鑒別v2 顯微鑒別v3 理化鑒別v4 生物鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別u定義：以眼觀、手摸、鼻聞、口嘗、水試和火試等方法，鑒別藥材、飲片和制劑的形狀、形態(tài)、氣和味等外觀形狀，以確定中藥的真?zhèn)巍? 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v1.形狀 -指中藥材和中藥飲片的外形。v 特點：固定、特異性 v（ 1）中藥材 蕨類植物、裸子植物、被子植物v（ 2）中藥飲片v圓片：白芷、白芍等 長方形：葛根、杜仲等v斜片：黃芪 條片狀：丹皮、枇杷葉v段片狀：荊芥、紫蘇 類圓球形：五味子1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v2.大小v指中藥材和中藥飲片的長短、粗細和厚薄。v中藥飲片片型的長短厚薄，是飲片規(guī)格、質(zhì)量的一項重要指標 - 中國藥典 一部 有具體規(guī)定。v3.色澤v指在日光下觀察的中藥材和中藥飲片顏色及光澤度。1 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v4.表面v指中藥材和中藥飲片表面的紋理。v光滑、粗糙，皺紋、皮孔、釘刺或毛茸等。1 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v5.斷面v指中藥材和中藥飲片折斷面的特征和折斷時的現(xiàn)象。v難易程度、斷面是否平坦或纖維性、顆粒性、粉性等1 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v6.質(zhì)地v指中藥材、中藥飲片堅硬、松軟、致密、黏性、粉性等。v7.氣1 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v8.味v指中藥材或飲片實際的口嘗滋味，是其所含化學(xué)成分的直接反映。v9.水試1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別v一、中藥材和中藥飲片的性狀鑒別v10.火試v指中藥材或飲片實際的口嘗滋味，是其所含化學(xué)成分的直接反映。1 性狀鑒別性狀鑒別v動物類1 性狀鑒別性狀鑒別v礦物類1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別v二、中藥提取物的性狀鑒別v顏色、氣、味、物理常數(shù)（如：相對密度、旋光度、折光率、皂化值等）1 性狀鑒別性狀鑒別v三、中藥制劑的性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別1 性狀鑒別性狀鑒別v沉香化氣丸 ：本品為灰棕色至黃棕色的水丸；氣香，味微甜、苦。v牛黃解毒片 ：本品為素片或包衣片，素片或去包衣后的片心顯棕黃色；有冰片香氣，味微苦、辛。v龜齡集 ：本品為膠囊劑，內(nèi)容物為棕褐色；氣特異，味咸。v舒心口服液 ：本品為棕紅色的澄清液體；氣微香，味甜、微苦、澀。v物理常數(shù) ：折光率、旋光度、相對密度等 2 顯微鑒別v （一）、定義v顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制片及含藥材粉末的制劑中藥材的組織、細胞或內(nèi)含物等特征進行鑒別的一種方法。v鑒別時選擇具有代表性的供試品，根據(jù)各種鑒別項的規(guī)定制片。制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。 2 顯微鑒別（二）、分類v1 根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片方法不同分為：v（ 1）藥材（飲片）顯微制片：v橫切片或縱切片制片 、 粉末制片 、 表面制片 、 解離組織制片 、花粉粒與孢子制片。v（ 2）含飲片粉末的制劑顯微制片：按粉末制片法制片v（ 3）細胞壁性質(zhì)鑒別：木質(zhì)化細胞壁、木栓化或角質(zhì)化細胞壁、纖維素細胞壁。v（ 4）細胞內(nèi)含物性質(zhì)鑒別：淀粉粒、菊糖、草酸鈣結(jié)晶v2 根據(jù)切片方法分為：v徒手切片、冷凍切片、半薄切片（ 0.5-2.0微米）、超薄切片（ 50-70nm)。 2 顯微鑒別v 一、橫切片或縱切片：選取藥材適當(dāng)部位，軟化后用徒手或滑走切片法，切成 1020m的薄片 ,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理后觀察。必要時可包埋后切片。v 二、粉末制片：取粉末少量，置載玻片上，攤平，選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當(dāng)試液處理后觀察。v 三、表面制片：將樣品濕潤軟化后 ,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。v 四、解離組織片：如樣品中薄壁組織占大部分，木化組織少或分散存在，可用氫氧化鉀法；如果品堅硬，木化組織較多或集成較大群束，可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前，應(yīng)先將樣品切成寬或厚約 2mm的小條或片。 2 顯微鑒別（三）、儀器與材料1 儀器 v生物光學(xué)顯微鏡（應(yīng)配有目鏡測微尺和載物臺測微尺）、滑走切片機或徒手圓筒生物切片器、小型粉碎機、鏡臺測微尺、離心機、醫(yī)用超聲儀。 2 顯微鑒別三）、儀器與材料2 用具 v放大鏡、刀片、解剖刀、鑷子（包括粗鑷及眼科彎鑷與直鑷）、剪（眼科剪與手術(shù)剪）、解剖針。載玻片、蓋玻片、吸濕器、培養(yǎng)皿或小燒杯（放切片用，切片后的處理均可在其中進行）、酒精燈、鐵三角架、石棉網(wǎng)、滴瓶、試管、試管架、滴管、玻璃棒（粗與細）、乳缽、量筒、毛筆（從刀上刷取切片用）、鉛筆（ HB、 4H、 6H繪圖用）、帶蓋搪瓷盤（裝切片標本用）、紗布、吸水紙（濾紙）、火柴等。 2 顯微鑒別v一、中藥材的顯微鑒別v1.完整藥材的顯微鑒別v選部位（橫切、縱切），制標本片，鏡下觀察v2.破碎藥材的顯微鑒別v大塊：同完整藥材v小塊：化學(xué)試劑解剖植物組織 -解離組織片v 刮粉 -制片v草類、葉類 -表面片 2 顯微鑒別v一、中藥材的顯微鑒別v3.粉末藥材的顯微鑒別 -過 中國藥典 4號篩備用。 2 顯微鑒別v二、中藥飲片的顯微鑒別v1.部分組織不完整：v地骨皮 -去心 -飲片缺少木質(zhì)心 -木質(zhì)部不得檢出v2.炮制后組織結(jié)構(gòu)、細胞特征、排列產(chǎn)生差異v3.既可鑒別飲片真?zhèn)危挚设b別生熟及炮制程度。 2 顯微鑒別v三、中藥制劑的顯微鑒別v（一）、定義v是利用顯微鏡來觀察制劑中原中藥飲片的組織碎片、細胞或內(nèi)含物等特征，從而鑒別制劑的處方組成。（二）、特點v1 制劑中各飲片及輔料相互影響，需要適當(dāng)預(yù)處理。v2.制備方法不同，選擇藥材在制劑中專屬性強的顯微特征。v3.中藥制劑在裝片鏡檢前需作適當(dāng)處理，消除輔料影響。 2 顯微鑒別v三、中藥制劑的顯微鑒別v3.中藥制劑在裝片鏡檢前需作適當(dāng)處理，消除輔料影響。v1） 散劑、膠囊劑：粉末裝片或透化后裝片；v2）片劑v 水丸v 糊丸v 水蜜丸v 錠劑v3）蠟丸 加極性小的有機溶劑攪拌，傾去溶劑，反復(fù)處理蠟質(zhì)再裝片檢視。v4）需解離裝片的：v（ 1）氫氧化鉀片（ 2）硝鉻酸法（ 3）氯酸鉀法v乳缽研成粉末，取粉末裝片 2 顯微鑒別v四、六味地黃丸的顯微鑒別v【 處方 】 熟地黃、山茱萸（制）、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉 2 顯微鑒別 2 顯微鑒別 2 顯微鑒別 2 顯微鑒別 2 顯微鑒別 2 顯微鑒別48v3 理化鑒別理化鑒別v理化鑒別的概念和意義理化鑒別的概念和意義v利用中藥所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，通過 化學(xué)反應(yīng)法，光譜法和色譜法 等分析方法和技術(shù)來判斷真?zhèn)蔚姆治龇椒ā? 理化鑒別理化鑒別v 目前中國藥典收載的理化鑒別方法有：目前中國藥典收載的理化鑒別方法有：v 化學(xué)反應(yīng)法（多為試管反應(yīng)）v 微量升華法v 色譜法：薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法v 光譜法：熒光鑒別法、分光光度法（紫外、紅外）v3 理化鑒別理化鑒別v一、化學(xué)反應(yīng)法v（一）原理：利用檢測中藥中所含化學(xué)成分（ 有效成分或指標性成分 ） 發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，根據(jù)所產(chǎn)生的 顏色、沉淀或氣體 等現(xiàn)象，來判斷某些成分或某些藥味的有無。v 一般化學(xué)反應(yīng)法即通常所說的顯色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)等（ 試管反應(yīng) ）。v特點：v靈敏度高、專屬性差、操作簡單。v適用對象：多用于中藥制劑中 礦物藥 的 無機成分 、 動物 的蛋白質(zhì)類成分 以及 植物藥材成分類群 的鑒別 。v3 理化鑒別理化鑒別 1.顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)1.生物堿類；生物堿類；2.黃酮類；黃酮類；3.蒽醌類；蒽醌類；4.香豆素、內(nèi)酯類；香豆素、內(nèi)酯類；5.皂苷類；皂苷類；6.氨基酸、多糖類氨基酸、多糖類7.各種礦物類成分：砷、汞等。各種礦物類成分：砷、汞等。v生物堿沉淀試劑生物堿沉淀試劑vBorntrager反應(yīng)反應(yīng)v鹽酸鹽酸 -鎂粉反應(yīng)鎂粉反應(yīng)v異羥肟酸鐵反應(yīng)異羥肟酸鐵反應(yīng) vL-B反應(yīng)反應(yīng)v-萘酚萘酚 -濃硫酸反應(yīng)濃硫酸反應(yīng) 取本品 1ml，加 1氫氧化鈉溶液 1ml，煮沸，放冷，濾過。取濾液 2ml，加稀鹽酸數(shù)滴使呈酸性，加乙醚 10ml，振搖，乙醚層顯黃色，分取乙醚液，加氨試液 5ml，振搖，乙醚層仍顯黃色，氨液層顯持久的櫻紅色。v例：大黃流浸膏中大黃的鑒別v目標： 游離蒽醌 v取本品 0.2g，加水濕潤，加 KClO4、 HNO3飽和溶液 2ml，振搖，靜置，取上清液少許，加BaCl2溶液 0.5ml，搖勻，呈白色沉淀，傾去上清液，加 HCl溶液，沉淀不溶解。v取本品 0.2g，加 HCl濕潤，在銅片上磨擦，銅片上呈銀白色，加熱，銀白色消失。v例 牙痛一粒丸中雄黃、朱砂鑒別v雄黃v朱砂v2.沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)v 利用中藥中化學(xué)成分與適宜試藥發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成 沉淀物 進行鑒別。v取本品 10g,加濃氨試液數(shù)滴及氯仿 10ml,浸泡數(shù)小時 ,濾過 ,取濾液 1ml蒸干 ,殘渣加稀鹽酸 1ml使溶解 ,加碘化鉍鉀試液 1-2滴 ,即生成黃棕色沉淀 。 v例：馬錢子散中馬錢子鑒別 v目標：生物堿v(1)慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)，如泡沫慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)，如泡沫生成反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)等。生成反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)等。v(2)分析前對樣品進行分離、精制，除去干擾分析前對樣品進行分離、精制，除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性。v(3)采用陰性對照和陽性對照的方式，對擬定采用陰性對照和陽性對照的方式，對擬定的鑒別方法進行反復(fù)驗證，防止出現(xiàn)假陽性。的鑒別方法進行反復(fù)驗證，防止出現(xiàn)假陽性。v一般化學(xué)反應(yīng)法用于中藥鑒別應(yīng)注意：v二、微量升華法v（一）原理：利用某些成分的 升華性 ，在一定溫度下將其從制劑中升華分離出來，并以升華物所具有的某些理化性質(zhì)作為制劑鑒別的依據(jù)。v （二）特點v升華法具有 簡便 、 實用 等特點，由于升華性僅為少數(shù)中藥化學(xué)成分所具有且升華物純度較高，故該法 專屬性亦較好 。v中藥材中常見的具有升華性的成分有冰片、大黃中蒽醌類成分；牡丹皮中丹皮酚；薄荷中薄荷醇；斑蝥中斑蟊素等。v 取制劑粉末，進行微量升華，收集冰片升華物，顯微鏡檢升華物的結(jié)晶性狀后，加入香草醛硫酸溶液，白色結(jié)晶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)呈現(xiàn) 紫紅色v 例：萬應(yīng)錠中冰片的鑒別：例：萬應(yīng)錠中冰片的鑒別：v三、色譜法（一）薄層色譜法（一）薄層色譜法（ TLC）（二）紙色譜法（二）紙色譜法（ PC）（三）高效液相色譜法（三）高效液相色譜法（ HPLC）（四）氣相色譜法（四）氣相色譜法（ GC）v(一一 )薄層色譜法（薄層色譜法（ TLC）v 使用本法鑒定中藥供試品，通常是在 同一塊薄層板 上點入樣品 和適宜的 對照物 ，采用 同一條件 依法層析展開，經(jīng)顯色或用其他方法檢出 色譜斑點 后，將樣品與對照物所得的色譜圖進行 對比 ，作出鑒定。分離、分析同時進行簡便、快速、三維檢測成分的種類多藥典中應(yīng)用最多v1.儀器與材料v（ 1）薄層板v常用固定相材料：常用固定相材料：v顆粒大?。侯w粒大小：v薄層板類型：薄層板類型：薄層色譜法薄層色譜法v（ 2）點樣器：v微升毛細管v手動v半自動v全自動點樣器材v v（ 3）展開容器：v平底展開缸v雙槽展開缸v（ 4）顯色裝置：v 玻璃噴霧瓶v 專用噴霧瓶v v 專門器械v 展開缸v 雙槽展開缸v 干燥器v噴霧顯色v浸漬顯色v熏蒸顯色v（ 5）檢視裝置v（ 6）薄層色譜掃描儀v 指用一定波長的光對薄層板上有吸收的斑點，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的譜圖和積分數(shù)據(jù)用于定性定量分析的儀器v薄層板制備 v點樣 v展開 v顯色與檢視 v記錄 薄薄層層色色譜譜法法操操作作方方法法v（ 1）薄層板制備）薄層板制備v市售薄層板：用前 110活化 30分鐘v聚酰胺薄膜：不活化v鋁基片薄層板：可裁剪v（ 2）點樣）點樣v原點、點距v（ 3）展開）展開v深度v展開劑飽和v單向展開、雙向展開v（ 4）顯色與檢視）顯色與檢視v原可見光有顏色，直接檢視v自身有熒光或加入試劑可激發(fā)熒光的成分，在365或 254nm觀察。v化學(xué)顯色：通用型和專屬性較好的顯色劑v薄層色譜 -生物自顯影法v（ 5）記錄）記錄v可見光 v熒光 v熒光淬滅v影響薄層色譜的因素有哪些？影響薄層色譜的因素有哪些？v供試品溶液的制備供試品溶液的制備v展開劑的選擇展開劑的選擇v薄層板的選擇薄層板的選擇v對照物的選擇對照物的選擇v展開劑蒸氣飽和展開劑蒸氣飽和 v溫度和濕度溫度和濕度v3.影響薄層色譜鑒別的主要因素 v（ 1）供試品溶液的制備v根據(jù)主要的檢測成分選擇提取溶劑v常用的預(yù)處理方法有：常用的預(yù)處理方法有： 升華法，蒸餾法，溶劑提取法，小型層析柱的柱色譜法、離子交換法等。 v一捻金薄層色譜圖（人參鑒別）va 未經(jīng)凈化處理 vb 經(jīng)凈化處理v（ 2）薄層板的選擇v固定相選擇v硅膠 G、硅膠 GF254v生物堿：氧化鋁v黃酮類、酚類：聚酰胺1. Rf值值 0.2-0.82. 避免拖尾問題避免拖尾問題3. 配比一致配比一致4. 避免邊緣效應(yīng)避免邊緣效應(yīng)5. 低毒溶劑低毒溶劑6. 溫度和濕度溫度和濕度v無水乙醇無水乙醇 -苯（苯（ 1:4）v苯苯 -三氯甲烷（三氯甲烷（ 1:3）v丙酮丙酮 -甲醇（甲醇（ 1:1）v極極性性v注意問題注意問題v（ 3）展開系統(tǒng)選擇v（ 4）對照物的選擇v（ 5）濕度和溫度的影響1. 對照提取物對照法2. 對照品對照法3. 對照藥材對照法4. 陽性對照法5. 陰性對照法v標志著今后以測定一標志著今后以測定一組成分逐漸取代測定組成分逐漸取代測定單一指標成分單一指標成分v(二二 )紙色譜法（紙色譜法（ PC）v以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開劑進行展開的分配色譜。v1.儀器與材料v（ 1）展開室v（ 2）點樣器v（ 3）色譜濾紙v固定相：水固定相：水流動相：流動相： BAW系統(tǒng)系統(tǒng) 正丁醇正丁醇 :乙酸乙酸 :水水 =4:1:5v (1) 下行法 v 點樣：直徑 2-4mmv 間距 1.5-2.0cmv 展開前：蒸汽應(yīng)飽和v 展開后：標明前沿，晾干，檢視v2.紙色譜法操作方法操作v (2) 上行法 v 點樣：直徑 2-4mmv 間距 1.5-2.0cmv 展開前：蒸汽應(yīng)飽和v 展開后：標明前沿，晾干，檢視v單向、雙向、多次、連續(xù)v(三三 )氣相色譜法（氣相色譜法（ GC）v以氣體作為流動相的色譜法。以 保留時間 作為鑒別依據(jù)。該法主要是用于 含揮發(fā)油和揮發(fā)性成分 的制劑分析v(四四 )高效液相色譜法高效液相色譜法 (HPLC)主要是利用供試品與對照物主要是利用供試品與對照物 保留時間是否相同 作為作為鑒別依據(jù)。鑒別依據(jù)。對于復(fù)雜組分尚可采用聯(lián)機技術(shù)，如本法與質(zhì)譜聯(lián)對于復(fù)雜組分尚可采用聯(lián)機技術(shù)，如本法與質(zhì)譜聯(lián)用，先分離后再作定性鑒別。用，先分離后再作定性鑒別。v（五）、毛細管電泳法（五）、毛細管電泳法（ HPCE）v以彈性石英毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。v中藥分析中可以用中藥分析中可以用