【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中Tenascin-C,HA和PKC-α,-β的差異表達

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 前 言 皮膚損傷的再生修復(fù)與瘢痕演變是一個復(fù)雜的過程，近年來由于細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)在再生修復(fù) 方面機制的認識有了很大的進展。皮膚再生修復(fù) 共同完成。填充于膠原間的蛋白聚糖調(diào)控膠原等 細胞的功能，在皮膚創(chuàng)傷再生修復(fù)及瘢痕愈合中發(fā)揮著重要作用，盡管科研工作者們試圖闡明確切機制，但其中具體機理目前還不完全清楚。 人體皮膚（ 表皮和真皮所構(gòu)成，真皮（ 于表皮下方，由致密結(jié)締組織構(gòu)成，對表皮起連接、支持、營養(yǎng)、保護等作用，并參與創(chuàng)傷愈合。真皮分乳頭層（ 網(wǎng)織層（ 層，二者之間無明顯界限，厚度約為 1頭層纖維致密，細胞數(shù)目多，富含大量的毛細血管和感覺神經(jīng)末梢，且與表皮緊密連接。網(wǎng)織層是構(gòu)成真皮的主體部分，因富含成纖維細胞、膠原纖維以及細胞外基質(zhì)等，構(gòu)成框架結(jié)構(gòu)，故保持了皮膚的彈性與韌性，此外，還有血管、神經(jīng)、淋巴管以及毛囊、皮脂腺等結(jié)構(gòu) 1。 皮膚損傷深度 （ 組織層次 ） 的不同， 可 再生與瘢痕愈合 。皮膚附 屬器存在是再生 （ 完全愈合 ） 的前提 。 當(dāng)皮膚 淺層（真皮乳頭層） 損傷后， 因真皮網(wǎng)狀層存在毛囊 傷后由 這些附屬器細胞及其內(nèi)的干細胞、傷口 鄰近 的 正常 皮膚 基底細胞 和真皮層纖維細胞 增殖來實現(xiàn)再生 2。但損傷網(wǎng)狀層后會導(dǎo)致成纖維細胞（ 活化、增殖、合成膠原以及分化異常，最終形成瘢痕增生 。 多項研究觀察表明， 真皮組織缺損的 深 度和瘢痕增生程度 成正比 ，真皮組織回植于組織缺損 傷口 可減輕瘢痕的增生 3。將真皮組織切取后，完整覆蓋于瘢痕疙瘩與慢性潰瘍 傷口 ，能促進表皮生長 ，皮 膚彈性的增加，并且抑制了移植皮膚收縮及瘢痕的增生 4， 體外構(gòu)建組織工程皮膚形成 和 自體皮內(nèi)植入復(fù)合異種脫細胞真皮基質(zhì) 可 提高傷口愈合 5 蛋白聚糖（ 一類重要而獨特的蛋白糖復(fù)合物，研究始于 19世紀(jì)末， 20世紀(jì) 50年代才逐漸認識到 帶負電荷的糖胺聚糖鏈通過共價鍵與蛋白質(zhì)連接而成。 存在于細胞內(nèi)分泌顆粒之中。按其結(jié)構(gòu)和特性分為 6種：腱糖蛋白 （ 、透明質(zhì)酸蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 （ 、硫酸 角質(zhì)素 （ 、核心蛋白聚糖 （ 、硫酸乙酰肝素 （ 、多功能蛋白聚糖 （ 。鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)組織中呈較高水平表達 8， 而且 ，乳頭層 與角質(zhì)形成細胞結(jié)合；隨著真皮再生的完成， 志等 9研究表明，在培養(yǎng)基中補充 少 示 用。但目前該方面的研究報道較少。 主要分布于真皮乳頭 層 的 分靠近基底膜血管和皮膚附件，表達呈線形，在真皮中分布極微 。 而 兩側(cè)環(huán)繞基底膜；棘細胞層的最上部有中等濃度的 透明質(zhì)酸 ，可能與刺激 透明質(zhì)酸 釋放的物質(zhì)位于基底層附近有關(guān) ， 且更有利于皮膚再生。 蛋白激酶 C（ , 由多種具有不同生物學(xué)特性的同工酶組成 的絲氨酸 /蘇氨酸激酶家族成員 10,11，分子量為 77據(jù) 將其分為 3類 12： 1）經(jīng)典型 ，由 、 1、2、 四種亞型組成。 2） 新型 ，包括 、 、 和 五種亞型。 3）非典型 ，包括 和 三種亞型。大量研究表明， 不同的組織表達和 特定的細胞內(nèi)定位 13， 對激活信號的敏感性和特異性 以及 生物學(xué) 作用并不完全相同 14,15。 實驗表明，將 制 殖 16；腎上腺素與 受體結(jié)合后 激活 制 17，但具體激活了何種亞型還有待進一步研究。 導(dǎo)致 18。張選奮等 19發(fā)現(xiàn)，在兔耳、人體皮膚肉芽組織、周邊組織及瘢痕組織內(nèi) 明在 傷口 愈合和瘢痕增生過程中有活化 20,21。 然而 ， 分布 以及 再生 和 瘢痕修復(fù)過程中的表達 變化 未見 研究 報道 。 近年來， 學(xué) 者們制作了 多種 動物皮膚創(chuàng)傷再生 或 瘢痕愈合的實驗?zāi)Ｐ?。 皮膚創(chuàng)傷 模型分為切開和 切除 模型兩種，用于研究愈合過程和瘢痕演變 2,22。有關(guān)皮膚創(chuàng)傷 再生 修復(fù)的動物實驗?zāi)Ｐ王r見報道 ， 關(guān)于皮膚創(chuàng)傷再生 國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道 。 本實驗擬建立兔耳腹側(cè)皮膚再生與瘢痕愈合的一體化模型。應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和核酸分子原位雜交技術(shù)檢測 傷口 再生與瘢痕愈合過程中 、 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 變化及表達差異。 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 材料與方法 1 材料 物 本實驗所用新西蘭大耳白兔 18 只 （ 蘭州大學(xué)動物實驗中心提供 ，普通動物，合格證號：）， 雌雄不限，體重 只單籠適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后進行試驗。 實驗過程獲得蘭州大學(xué)動物倫理 委員會批準(zhǔn) ， 所有實驗動物均受到人文關(guān)懷 。 料 脫載玻片 南通天盛實驗器材有限公司 2. 2存管 美國 液器頭 美國 要試劑 1. 鼠抗兔 克隆抗體 國 2. 鼠抗兔 克隆抗體 國 3. 小鼠 劑盒 武漢博士德生物工程有限公司 4. 位雜交檢測試劑 武漢博士德生物工程有限公司 5. 位雜交檢測試劑盒 漢博士德生物工程有限公司 6. 色試劑盒 武漢博士德生物工程有限公司 7. 天津市光復(fù)化工科技公司 8. 檸檬酸 ( 天津市濱?；瘜W(xué)試劑有限公司 9. 武漢博士德生物工程有限公司 10. 過氧化氫 (3%) 天津市光復(fù)化工科技公司 11. 原位雜交用 武漢博士德生物工程有限公司 12. 戊巴比妥鈉 國，國內(nèi)分裝 13. 武漢博士德生物工程有限公司 14. 硫化鈉 (25%) 天津化學(xué)試劑公司 15. 胰蛋白酶 (3%) 武漢博士德生物工程有限公司 16. 一抗稀釋液 武漢博士德生物工程有限公司 17. ) 國，國內(nèi)分裝 試劑為 分析純。 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 驗儀器 國） 康， 湖北亞光， 海躍進醫(yī)療器械廠， 海躍進醫(yī)療器械廠 海梅香儀器廠） 500國） 600L，日本） 特， 像分析軟件 (國） 計分析軟件（ 國） 石蠟切片機 組織攤烤片機 石蠟包埋機 核酸分子原位雜交儀 光學(xué)顯微鏡 微量振蕩器 耳再生 新西蘭大白兔 18 只，雌雄不限，體重 單 只分籠觀察飼養(yǎng) 1W（ 圖1使用 5%硫化鈉膏進行兔耳腹側(cè)脫毛，飼養(yǎng) 3 天后再進行實驗 。 模型是 借鑒 使用激光、機械磨削皮膚后損傷至真皮乳頭層的傷口可以再生而缺損深度 到達蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 網(wǎng)織層甚至更深的組織時瘢痕修復(fù)的原理 制作。 兔耳緣靜脈注射 3%戊巴比妥鈉注射液（ 1ml/醉，將兔耳腹側(cè)組織充分展平，放置于自制的固定臺（體積為 .0 將 自制的 取皮 刀片固定 妥當(dāng)，放置于耳尖處，刀刃面與兔耳皮膚呈約 25夾角，力量均勻向兔耳根部切割傷口，切割過程中，仔細觀察 傷口 深度，切取深度到達耳軟骨表面， 在 兔耳腹側(cè)切割出面積 約 為10 0淺 到 深 的 切口 。 分別于每只 制作 兩個 傷口 ， 間距約 計72 個 。 每次均 為同一方向切割兔耳組織 （由耳尖至耳根均為由淺至深）。 在傷后 0h、 3d、 6d、 9d、 12d、 27d，任意切取 3 只兔耳部 傷口 （切取面積為超出 傷口 邊緣 2全層皮膚組織），共 12 例標(biāo)本，固定于多聚甲醛溶液中，分別行 色、免疫組織化學(xué)染色以及核酸分子原位雜交檢測。 圖 1 兔耳皮膚再生 of of in 劑配置 8g 用 30g 1000州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 0.4 g 3. 1% 1.0 d 1000.0 . 1 . 4% % 滴定 500.0 度 60 5. 1% % 500 500 . 10 g 檸檬酸鈉 44.1 g 1% . 20 檬酸鈉 % . 50 檬酸鈉 % 州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 9. 20%甘油 甘油 0. 3%檸檬酸 6 1. 蛋白酶 胰蛋白酶 實驗 步驟 理 切片 1） 脫水透明 ： 將標(biāo)本取 出后用水 沖洗 、沿由淺至深方向從正中切開， 切 開面 朝下方放入組織包埋盒內(nèi)，蓋好蓋片，標(biāo)記后放入全自動 乙醇脫水 機內(nèi)進行組織脫水， 此過程 具體 步驟 為 ： 80%、 90%、 95%、 100%各種濃度乙醇 盒內(nèi) 2 小時。 2） 浸蠟、包埋 ：將脫水后的組織放置于已加熱至 56的 石蠟 液中，分三次（第 1 次 30 2 次 90 3 次 90浸 蠟 ，取代組織中含有的透明劑。浸蠟后的組織 放于組織包埋盒中矢狀面朝下，移至石蠟組織包埋機出蠟口下方，用眼科鑷加以固定，注入液態(tài)石蠟，組織完全被石蠟浸沒后，將包埋盒移至冷臺， 石蠟 迅速 凝固，組織即被包在其中， 形成 蠟塊。 3） 切片和貼片 ：在每張載玻片上標(biāo)記 （ 3d、 6d、 9d、 12d、 27d） ，每組切 11張蠟片（ 1張 普通載玻片撈取 ，免疫組化 和 原位雜交 各 5張用為 防脫載玻片撈取 ）。 將蠟塊放入盛有水的容器中，置于冰柜中冷凍， 15塊組織 均從 傷口 淺層至深層的方向 固定于切片機持蠟器上，刀片安裝于刀臺后固定穩(wěn)妥，調(diào)整切片厚度為 調(diào)整 恒溫水箱溫度至 40，修整蠟塊距組織邊緣約 從皮面下刀 開始切片，用鑷子將切好的蠟帶輕輕移至水面上充分展平，載玻片中段部撈起蠟片，傾斜移去余水，置于 60恒溫箱內(nèi)，普通片烤片 1小時，防脫片烤片 2小時，以脫去熔化 的 組織間隙的石蠟。 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 E 染色 （ ） 切片 置于 二甲苯 I 中脫蠟 10甲苯 號 5水酒精內(nèi)洗 12次 ， 95%酒精 190%酒精 1度 85%酒精 1來水再洗 2在蘇木精素染色 5次置于自來水中清洗 11%鹽酸酒精分化 20s，自來水洗 1水（ 1%）中進行返藍作業(yè) 30s，其次置于自來水中洗滌 1紅染色 20s，自來水洗 30 秒之后， 85%乙醇中進行脫水 20 秒， 90%酒精 30 秒鐘，依次為： 95%號酒精 195%號酒精 1水酒精號 2水乙醇號 2甲苯號浸 2二甲苯 號浸 2二甲苯 號 2性樹膠 封片 。 n C 與 色 （ ） 首先進行預(yù)實驗，按照抗體說明書推薦最佳稀釋濃度值，將 一抗原液按照 1:100、 1:300、 1:500 三種比例稀釋， 抗原液按照 1:300、 1:800、 1:2000三種比例稀釋，并同時使用三種抗體濃度進行實驗， 依照最后顯色結(jié)果確定最佳反應(yīng)濃度 ： 為 1:500， 1:800。 1. 切片 常規(guī) 脫蠟 至 水：二甲苯 號 10甲苯 號內(nèi) 5水 乙醇號 5水酒精 號 5水酒精 號中 595%酒精 585%酒精 5餾水 10 洗 5 次。 2. 30% +蒸餾水 10 份混合，室溫 10活內(nèi)源性過氧化物酶，蒸餾水洗 33 次。 3. 熱 抗原修復(fù)： 將切片放入盛有 檬酸鹽緩沖液的高壓鍋內(nèi)（ 右） ， 電磁爐加熱至沸騰后計時 3電，冷卻后取出，用 沖液（ 滌 5 次。 4. 加 5%閉液，室溫 20甩去多余液體，不洗 。 5. 別在切片上滴加三種濃度的一抗稀釋液， 4過夜，次日取出后放于 37恒溫箱復(fù)溫 20 23 次。 6. 加 濃度為 物素化兔抗山羊 37 20 23 次 。 7. 加 劑， 37 20 54 次 . 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 8. 色使用 色試劑盒（ 取 1餾水，在試管中加入 A、 B、 C 試劑各 1 滴，充分混勻后加至切片上，室溫下顯色，鏡 下嚴格控制顯色劑反應(yīng)時間， 8 分鐘后自來水終止顯色，蒸餾水洗 22 次。 9. 蘇木素液復(fù)染，脫水、透明并封片，顯微鏡下觀察。 1酸分子原位雜交 在實驗開始前， 實驗 所有試劑 及 器械均 用 理， 并且將手術(shù)器械用 120 、 30壓處理， 實驗過程 依照無菌原則操作 ，以防實驗中 1. 切片脫蠟 至 水 ： 二甲苯 10甲苯 5水 乙醇 5水酒精 5水酒精 595%酒精 585%酒精 5餾水 10 洗 5 次。 2. 3%別加至每張切片上，充分浸沒組織，放置于室內(nèi) 10消除 內(nèi)源性酶， 然后放置于 蒸餾水 中 洗 5 分鐘 3 次。 3. 暴露 信使核糖核酸的核酸 片段： 將濃度為 3%檸檬酸新鮮稀釋 好的 胃蛋白酶 液 （ 3%檸檬酸 1濃縮型胃蛋白酶 液 2 滴） 加于 切片上 ，放置于溫箱內(nèi)調(diào)溫至 37 消化 20 分鐘 ，用 洗 53 次 ，置于 蒸餾水 洗缸洗 5 4. 后固定： 胃蛋白酶消化后用 理過的 1% 溫 下固定 10分鐘 ， 置于 蒸餾水 洗缸內(nèi)洗 53 次。 5. 預(yù)雜交： 將為 20%的 甘 油 20入干雜交盒底部，以 保持 雜交過程中切片的 濕度， 避免造成干片，在 每張切片 上滴入原位雜交 預(yù)雜交液 20l， 置于恒溫箱 內(nèi)設(shè)置溫度在 38 后，進行預(yù)雜交 2 小時 ， 取出后 吸 去切片上的 余液。 6. 雜交： 將 雜交液 約 20l 分別滴加在每個 切片 內(nèi)（以雜交液完全浸沒組織為標(biāo)準(zhǔn)），并將 原位雜交專用蓋玻片 保護膜揭去后 蓋在切片上， 中性樹脂膠封住蓋玻片四周，放置于核酸分子原位雜交儀內(nèi)設(shè)定溫度為 37 ， 雜交過夜。 7. 雜交后洗滌： 用 眼科尖鑷子輕輕 揭 除封片膠及 蓋玻片， 37 的 252 次， 37 含 152 次， 37 含 洗 15 次。 8. 滴加封閉液 ： 37 20去 玻片上 多余液體，不洗。 9. 滴加生物素化鼠抗地高辛 ： 37 60位雜交用 5 次 ，蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 期間保持切片濕度，防止干片 。 10. 滴加 ： 37 20 5 次。 11. 滴加生物素化過氧化物酶 ： 37 20 ，用 5 次。 12. 色：將 配置好的 色劑 滴于組織上， 顯微鏡 下嚴格控制顯色時間， 10 自來水終止顯色，蒸餾水中 52 次 。 13. 復(fù)染： 切片放置于 蘇木素 溶液內(nèi) 染色 2充分水洗。 14. 分化 液內(nèi)浸泡 20s，水洗 2 次 ，返蘭 液 10洗 1 次 。 15. 酒精梯度脫水，二甲苯透明， 風(fēng)機吹干 ，中性樹膠封片。 16. 雜交時加入 作為空白對照 組 。 結(jié)果判讀：由病理實驗室兩名醫(yī)師對 、 疫組化切片以及 1 位雜交 片 鏡下 進行 結(jié)果判斷 。 、 性表達于真皮乳頭層的成纖維細胞，切片陽性染色細胞呈棕黃色 ； 1要在表皮細胞、纖維細胞胞漿、毛囊、皮脂腺中陽性表達 ，呈棕黃色。 3 半定量圖像分析 將 、 及 1 淺、深層 傷口 內(nèi) 的 表達 像分析軟件 進行分析 ，顯微鏡 下 400 倍 觀察 ， 將 傷口 從淺側(cè)到深側(cè)分為 10 段 ，每段 傷口 面積為 1.0 取 切片 每段 組織 內(nèi) 100 個視野進行分析， 并 進行系統(tǒng)光密度校正， 0 為 白， 255 為 黑，數(shù)值 愈大表達水平 愈 高。 距離淺側(cè)邊 3傷口 自定義為 淺層傷口， 而 距離淺側(cè)邊 8傷口 自定義為 深層傷口 。 傷口收縮因深淺而不同，因此， 4傷口為過渡傷口。 4 統(tǒng)計學(xué) 分析 將 件 分析所得 出 的數(shù)據(jù)用均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差（ x s ）表示 ，并 采用 件包統(tǒng)計處理，方差齊性時 ， 多組間均數(shù)比較采用方差分析（兩兩比較時使用最小顯著差異法） ，方差不齊時采用秩和檢驗 法， P差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 結(jié) 果 1 一般狀況 所有 動物 均 單只 分 籠飼養(yǎng) ， 進食 活動 均 良好， 實驗中 動物 無意外死亡 。 2 兔耳 傷口 愈合過程形態(tài)學(xué) 傷后 0h，傷口邊緣整齊 ， 可清晰看到 傷口 由淺至深的層次 。 傷后 3d， 可見 傷口 組織收縮、 血痂 形成，傷口周邊輕度 紅腫。 傷后 6d， 淺層 傷口 痂皮 與 創(chuàng)緣 皮膚剝離 ，揭開痂皮， 可見新鮮肉芽組織 生長，表面濕潤 ；深層血痂連續(xù)，與組織貼附 較 緊密，高 出皮 面。 傷后 9d，淺層 創(chuàng)緣皮膚向中央緊縮并已 愈合；深層 傷口 血痂 亦 完 整 脫落，大部分傷口已上皮化 。 傷后 12d，已 無法 辨 清 淺層 傷口 與正常皮膚的界限 ； 而 深層 傷口 則呈現(xiàn)出圓形、 凸起于皮面的 瘢痕 ，粉 紅 色，表面光滑 ， 質(zhì)地 較 韌。 傷后 27d， 淺層 無法辨 認 ； 深層傷口 為圓形 瘢痕 ， 凸起 于 皮面 ，色 澤與 周圍正常皮膚 較接近 ， 質(zhì)韌 （照片 1） 。 淺層 傷口 再生 修復(fù) ，無法辨別與周圍皮膚的差異；深層 傷口 瘢痕愈合。 0h 3d 6d 9d 12d 27d 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 照片 1 兔耳皮膚 傷口 愈合過程形態(tài)學(xué)。 淺層 傷口 最終呈現(xiàn)再生；深層 傷口 瘢痕愈合。 創(chuàng)傷后 9d， 淺層 傷口 已愈合 ； 深層 傷口 部分未上皮化 ， 多數(shù)已形成 新鮮的瘢痕組織 。傷后 27d，淺層 傷口 無法辨認；深層傷口 形成增生性 瘢痕 。 of in d 27d d of a t 7d 3 傷后兔耳 傷口 愈合過程組織學(xué) （照片 2） 傷后 0h， 傷口 深度從 表皮 缺如 逐漸延及 真皮淺層 、皮下組織，直到 耳軟骨表面。淺層 傷口 及其周邊組織無明顯出 血 ， 深層 傷口 可見 大量紅細胞。 傷后 3d，淺層 傷口 結(jié)痂，棘層 增生、變 厚， 并可見 增生的 及 少量膠原纖維 ， 傷口 及 周邊組織水腫， 無 明顯炎 性 細胞浸潤 ； 深層 傷口 深達軟骨表面 ， 傷口 周邊 組織 輕度 水腫， 泛 增生 ，可見少量 出血，伴炎癥細胞 的 浸潤。 傷后 6d， 淺層 傷口 表皮 基本恢復(fù) 完整， 但 比 周圍正常組織厚 ， 生；深層 傷口 棘細胞 明顯 增厚， 纖維 細胞明顯 增生， 創(chuàng)周 輕度水腫 且有 少量纖維素性滲出 和 紅細胞 分布 。 傷后 9d，淺層 傷口 表皮連續(xù) ，厚度也 接近 于 周圍正常組織厚度；深層 傷口棘層明顯增 厚 ，創(chuàng) 緣周圍 組織仍輕度水腫， 纖維細胞明顯增生。 傷后 12d，深層 傷口 纖維細胞 大量 增生，纖維成分增 多 ， 傷口 由致密纖維組織 所 填充，膠原纖維增加明顯，散在 少量 紅細胞。 傷后 27d，淺層 傷口 在 鏡下 與正常組織無法區(qū)分 ；深層 傷口 纖維細胞 、 膠原明顯增 多 。 0h 3d 6d 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 9d 12d 27d 照片 2 兔耳皮膚 傷口 （ 色 ， 40） 。 創(chuàng)傷后 9d，淺層 傷口 表皮連續(xù)，厚度接近周圍正常組織；深層 傷口 棘層明顯增厚，創(chuàng)緣周圍組織仍輕度水腫。傷后 27d，淺層 傷口 在鏡下與正常組織無法區(qū)分；深層 傷口 纖維細胞明顯增多。 of 40). d to of in in 7d be in 4 、 1 表達 層 傷口 的表達在各時間點均高 于 淺層 傷口 陽性表達于成纖維細胞， 呈棕黃色 。 在傷后 3d 的 淺層 和深層 傷口內(nèi)即有表達，傷后 9d 時達到高峰， 12d 后逐漸下降， 但 深層傷口 傷后 27d（瘢痕改建期）再次升高（ p。隨 傷口 加深， 傷口 的表達均增加 ： 傷后 127d 深層傷口 的 表達 明顯 高 于 淺層 傷口 （ p片 3，表 1） 。 層 傷口 表達 在各時間點 均較 淺層 傷口 低 達于真皮層，呈棕黃色 。 淺層 傷口 于傷后 3d 即有表達 ，此后表達水平持續(xù)上升，于傷后 27d 時最高。深層 傷口 表達量傷后 持續(xù)上升 ， 第 9后逐漸下降。 傷后 12d 和 27d 淺層傷口 的 達量在各時間點均較深層傷口高（ p片 4，表 2） 。 層 傷口 表達在各時間點高 于淺層 傷口 要在表皮細胞、纖維細胞胞漿、毛囊、皮脂腺表達，陽性細胞呈棕黃色 。 淺層 傷口 于傷后 3d 即有表達，傷后 9d 時達到高峰， 12d 后逐漸下降。 深層 傷口 表達水平 在各時間點 較淺層 傷口 高 （ p照片 5，表 3） 。 蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中 A 和 層 傷口 表達 均 高于淺層 傷口 要在表皮細胞、纖維細胞胞漿、毛囊、皮脂腺中陽性表達 ， 陽性細胞染色呈棕黃色， 淺層 傷口 于 傷后 3d 即有表達 ， 傷后 9d 時達到高峰， 12d 后逐漸下降 。 深層傷口 表達量逐漸增加， 9d 時達到 高峰。 深層 傷口 各時間點 均 高于淺層 傷口 （ p照片 6，表 4） 。 層 傷口 再生愈合而深層 傷口 瘢痕愈合 淺層 傷口 于傷后 9d 再生 修復(fù) ，肉眼無法辨別與周圍皮膚的差異 ；深層 傷口于 傷后 27d 呈 現(xiàn) 瘢痕愈合。 3d 6d 9d 12d 27d 照片 3 兔耳皮膚創(chuàng)傷后 表達（免疫組化 ， 40）。 真皮成纖維細胞 陽性表達。 in 40). n C in 3d 6d 9d 12d 27d 照片 4 兔耳皮膚創(chuàng)傷后 達（免疫組化 ， 40）。 陽性表達位于真皮乳頭層 。 A in 40) A in 3d 6d 9d 12d 27d 照片 5 兔耳皮膚創(chuàng)傷后 達（原位雜交） 。