【基金標(biāo)書(shū)】2010CB530400-基于“腎藏精”的臟象理論基礎(chǔ)研究

1 項(xiàng)目名稱： 基于 “ 腎藏精 ” 的臟象理論基礎(chǔ)研究 首席科學(xué)家： 王擁軍 上海中醫(yī)藥大學(xué) 起止年限： 2010 年 1 月 8 月 依托部門： 國(guó)家中醫(yī)藥管理局 上海市科委 2 一、研究?jī)?nèi)容 1.“ 腎藏精 ” 理論溯源和知識(shí)管理平臺(tái)建立 對(duì)中醫(yī) “ 腎藏精 ” 的古今文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)全面地梳理歸納，從生理、病理、診斷、治療等方面進(jìn)行理論分析；利用知識(shí)工程與知識(shí)管理的理論和方法 ,建立 “ 腎藏精 ” 臟象理論知識(shí)管理平臺(tái)。 通過(guò)臨床流行病學(xué)研究與腎相關(guān)疾病中醫(yī)證型的分布特征 ，明確腎虛證在疾病中的分布規(guī)律；著重進(jìn)行不孕不育（女子不孕癥和男子不育癥）、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和障礙性貧血（再生障礙性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）等疾病的療效機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。 3 “ 腎藏精 ” 與干細(xì)胞和 在補(bǔ)腎填精法指導(dǎo)下，觀察相關(guān)方藥對(duì) “ 腎精虧虛 ” 、 “ 命門火衰 ” 及 “ 自然衰老 ” 模型動(dòng)物的作用機(jī)制以及對(duì) 殖干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞）增殖、分化功能的影響，探索腎精命火的生理狀態(tài)和病理轉(zhuǎn)化規(guī)律。 4從腎論治效應(yīng) 驗(yàn)證研究 通過(guò)補(bǔ)腎填精法治療，從病（證）探因，以效證因，觀察 “ 腎精虧虛 ” 型不孕不育、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和障礙性貧血患者相關(guān)干細(xì)胞和 合研究 “ 腎藏精 ” 在 “ 腎主生殖 ” 、 “ 腎主骨 ” 、 “ 腎生髓 ” 、 “ 腦為髓之海 ” 理論中的作用。 5. “ 腎藏精 ” 臟象理論創(chuàng)新研究 圍繞統(tǒng)一的目標(biāo)和假說(shuō)，對(duì)上述研究結(jié)果進(jìn)行綜合分析，建立 “ 腎藏精 ” 臟象理論與干細(xì)胞和 3 二、預(yù)期目標(biāo) (一 )總體目標(biāo) 1闡明 “ 腎藏精 ” 的現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)，創(chuàng)新和發(fā)展中醫(yī)臟象理論。 2. 揭示相關(guān)疾病從腎論治 臨床療效產(chǎn)生的內(nèi)在規(guī)律和物質(zhì)基礎(chǔ)。 3揭示 “ 腎藏精 ” 的科學(xué)實(shí)質(zhì)，創(chuàng)新和發(fā)展中醫(yī)臟象理論。 4以 “ 腎藏精 ” 理論研究為示范，建立中醫(yī)臟象理論研究的創(chuàng)新方法學(xué)體系。 5形成一支多學(xué)科交叉合作的具有較強(qiáng)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力的現(xiàn)代中醫(yī)科研隊(duì)伍。 （二）五年預(yù)期目標(biāo) 1在中醫(yī)臟象理論創(chuàng)新和中醫(yī)基本理論研究的方法學(xué)方面取得突破。 （ 1）完成 “ 腎藏精 ” 臟象理論文獻(xiàn)和臨床流行病學(xué)研究，建立數(shù)據(jù)信息庫(kù)，構(gòu)建知識(shí)管理平臺(tái)。 （ 2）基本闡明 “ 腎精 ” 與干細(xì)胞、 “ 命火 ” 與 腎藏精 ” 與干細(xì)胞和 ,實(shí)現(xiàn) “ 腎藏精 ” 理論的現(xiàn)代科學(xué)知識(shí)創(chuàng)新。 （ 3）基本闡明 “ 腎精虧虛 ” 、 “ 命門火衰 ” 相關(guān)疾病與干細(xì)胞和 從腎論治 ” 的規(guī)律性。 （ 4）在中醫(yī)臟象理論研究方法學(xué)方面取得突破，實(shí)現(xiàn)中醫(yī)臟象理論的現(xiàn)代創(chuàng)新。 2在國(guó)際有較大影響力的學(xué)術(shù)期刊上發(fā)表中醫(yī) “ 腎藏精 ” 相關(guān)的研究論文。發(fā)表 5 6篇研究水平高、影響力大的中醫(yī)理論研究論文。在國(guó)內(nèi)核心期刊發(fā)表論文130 160篇，發(fā)表 0 50篇。出版專著 4 5部，申報(bào)國(guó)家發(fā)明專利 68項(xiàng)。 3形成多學(xué)科構(gòu)成的中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論研 究隊(duì)伍，推動(dòng)中醫(yī)相關(guān)學(xué)科的整體發(fā)展。預(yù)期培養(yǎng)博士后 15名，博士研究生 60名，碩士研究生 70名；培養(yǎng)高 水平領(lǐng)軍 人才2 3名。 4 三、研究方案 （一） 總體 思路 本項(xiàng)目擬采用現(xiàn)代生物學(xué)方法，結(jié)合臨床實(shí)踐，深入開(kāi)展 “ 腎藏精 ” 臟象理論的基礎(chǔ)研究。研究的思路是，準(zhǔn)確把握中醫(yī)臟象理論的實(shí)質(zhì)，在對(duì)中醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)理論、基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床研究進(jìn)行深入審視的基礎(chǔ)上，提出科學(xué)假說(shuō)，圍繞假說(shuō)開(kāi)展深入的探索和驗(yàn)證，從而得出科學(xué)的認(rèn)識(shí)和結(jié)論。 腎藏先天之精，構(gòu)成胚胎的原始物質(zhì)（ “ 兩神相搏，合而為形，常先身生，是謂精 ” ）； 腎也藏后天之 精，維持生命活動(dòng)（ “ 腎者主水，受五臟六腑之精而藏之 ” ）。胚胎干細(xì)胞是早期胚胎中具備發(fā)育為各種組織和器官能力的全能細(xì)胞。因此，腎所藏之 “ 精 ” 與胚胎干細(xì)胞以及成體干細(xì)胞恰相對(duì)應(yīng)。干細(xì)胞增殖與分化影響生命全過(guò)程，其平時(shí)處于沉默休眠狀態(tài)，在人體修復(fù)損傷時(shí)被喚醒與激活，發(fā)揮其功能，印證了 “ 腎者，主蟄，封藏之本，精之處也 ” 的論述。 命門之火集中體現(xiàn)為腎陽(yáng)的功能。前期研究工作發(fā)現(xiàn)腎陽(yáng)（命火）涵蓋了全身的神經(jīng) 免疫（ 絡(luò)，體現(xiàn)為命門之火周游全身的溫煦與推動(dòng)作用。 腎藥可 喚醒并激活干細(xì)胞以修復(fù)病損組織。 據(jù)此，本項(xiàng)目提出以下科學(xué)假說(shuō)：腎精的物質(zhì)基礎(chǔ)，主要表現(xiàn)在干細(xì)胞；命火的功能基礎(chǔ)，主要體現(xiàn)在 藏精是干細(xì)胞與 腎填精法治療腎精虧虛、命門火衰病證，主要是通過(guò)調(diào)控干細(xì)胞和 （二） 技術(shù)途徑 第一階段：通過(guò)文獻(xiàn)檢索、數(shù)據(jù)挖掘，建立中醫(yī) “ 腎藏精 ” 理論數(shù)據(jù)信息庫(kù)和知識(shí)管理平臺(tái)。 第二階段：通過(guò)臨床流行病學(xué)研究，設(shè)計(jì)統(tǒng)一調(diào)查問(wèn)卷，研究不孕不育、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和障礙性貧血的中醫(yī)證型的頻率分布。數(shù)據(jù)資源統(tǒng)一納入數(shù)據(jù)信息 庫(kù)，進(jìn)行綜合統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)一步支撐實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)、臨床驗(yàn)證和理論創(chuàng)新研究。 第三階段： “ 腎藏精 ” 與干細(xì)胞和 察補(bǔ)腎填精 方藥對(duì) “ 腎精虧虛、命門火衰 ” 及 “ 自然衰老 ” 模型動(dòng)物的作用機(jī)制以及對(duì) 為臨床驗(yàn)證提供檢測(cè)指標(biāo)依據(jù)。 第四階段：從腎論治效應(yīng)機(jī)制研究。采用從?。ㄗC）探因和以效證因的方法，驗(yàn)證補(bǔ)腎填精法治療與腎相關(guān)疾病的療效機(jī)制，探索干細(xì)胞和 從腎論治 ” 相關(guān)疾病中的作用規(guī)律。 第五階段：進(jìn)行相關(guān)疾病從腎論治臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究，揭示疾病的 生理學(xué)、5 病理學(xué)和現(xiàn)代生物學(xué)機(jī)制。 第六階段： “ 腎藏精 ” 臟象理論創(chuàng)新研究。圍繞本項(xiàng)目的總體目標(biāo)和科學(xué)假說(shuō)，解決所提出的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題，完善與創(chuàng)新 “ 腎藏精 ” 臟象理論。并總結(jié)本項(xiàng)目研究的思路，建立臟象理論研究的方法學(xué)體系。 6 7 （三）創(chuàng)新點(diǎn)與特色 1理論創(chuàng)新 （ 1）提出腎精的物質(zhì)基礎(chǔ)主要表現(xiàn)在干細(xì)胞；命火的功能基礎(chǔ)主要體現(xiàn)在 腎藏精 ” 是干細(xì)胞與 腎填精法治療腎精虧虛、命門火8 衰病證，主要是通過(guò)調(diào)控干細(xì)胞和 （ 2）從 “ 腎主生殖 ” 、 “ 腎主骨 ” 、 “ 腎生髓 ” 、 “ 腦為髓之海 ” 等方面進(jìn)一步證明 “ 腎藏精 ” 理論的實(shí)質(zhì)，發(fā)展中醫(yī)臟象理論。 2應(yīng)用創(chuàng)新 （ 1）建立了 “ 腎藏精 “ 數(shù)據(jù)信息庫(kù)，構(gòu)建知識(shí)管理平臺(tái)，形成面向基礎(chǔ)和臨床科研工作的軟件系統(tǒng)。 （ 2）突出基礎(chǔ)理論研究與臨床實(shí)踐的緊密結(jié)合的中醫(yī)學(xué)特征，將 “ 腎藏精 ” 理論與臨床的不孕不育、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和障礙性貧血的辨證、診斷、治療緊密相連并發(fā)揮指導(dǎo)作用。 3方法創(chuàng)新 （ 1）應(yīng)用語(yǔ)言工具、抽象模型工具和數(shù)學(xué)工具研究 “ 腎藏精 ” 理論的科學(xué)內(nèi)涵；全面構(gòu)建 “ 腎藏精 ” 臟象理論數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)平臺(tái)。 （ 2）多學(xué)科交叉與融合，系統(tǒng)研究 “ 腎藏精 ” 理論及其與不孕不育、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和障礙性貧血的內(nèi)在關(guān)系，為中醫(yī)臟象理論研究提供新思路，創(chuàng)立中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究的新模式。 （四）可行性分析 1有中醫(yī)經(jīng)典理論支持與長(zhǎng)期臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ) 中醫(yī) “ 腎藏精 ” 理論在內(nèi)經(jīng)中已有記載，是中醫(yī)學(xué)的原創(chuàng)性理論，在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中得到廣泛證實(shí)，并不斷發(fā)展。各家學(xué)說(shuō)都肯定 “ 腎藏精 ” 理論，并且在醫(yī)書(shū)中也有大量從腎論治 “ 不孕 ”“ 精疲 ” （不孕不育）、 “ 骨痹 ”“ 骨痿 ” （骨質(zhì)疏松癥） 、 “ 呆病 ”“ 癲癥 ”“ 善忘 ” （老年性癡呆）、 “ 虛勞 ”“ 血虧 ” （珠蛋白生成障礙性貧血、再生障礙性貧血）等醫(yī)案記載。 “ 腎藏精 ” 理論在難治性、復(fù)雜性疾病的治療中發(fā)揮了十分重要的作用，這為本項(xiàng)目研究取得重大突破提供了雄厚的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。從難治性、復(fù)雜性疾病入手，在揭示 “ 腎藏精 ” 內(nèi)在調(diào)控機(jī)制的基礎(chǔ)上，提出解決多環(huán)節(jié)復(fù)雜病理過(guò)程的治療理論，將會(huì)實(shí)現(xiàn)中醫(yī)臟象理論方法學(xué)研究的突破。 2現(xiàn)代生物學(xué)研究方法可行 對(duì)中醫(yī) “ 腎藏精 ” 理論的總結(jié)、闡釋與再挖掘離不開(kāi)現(xiàn)代科技手段，隨著現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)突飛猛進(jìn)的發(fā)展以及觀念的更新，多學(xué)科交叉、融合的實(shí)踐，越來(lái)越多的現(xiàn)代生物學(xué) 技術(shù)在 “ 腎藏精 ” 等中醫(yī)理論研究中得到應(yīng)用。 國(guó)際對(duì)干細(xì)胞研究的關(guān)注也為本項(xiàng)目帶來(lái)很大機(jī)遇，國(guó)內(nèi)外研究也認(rèn)識(shí)到 “ 腎藏精 ” 的部分生物學(xué)基礎(chǔ)。本項(xiàng)目中沈自尹院士領(lǐng)導(dǎo)的課題組以 “絡(luò) ” 學(xué)說(shuō)為切入點(diǎn)，幾十年的工作基礎(chǔ)9 揭示了中醫(yī) “ 腎 ” 臟象理論的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，近年又證實(shí)補(bǔ)腎藥（淫羊藿總黃酮）能夠促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)外側(cè)區(qū)域干細(xì)胞的增殖，并能使皮質(zhì)干細(xì)胞向腎上腺皮質(zhì)功能成熟層遷移。這些研究有力地支持了本項(xiàng)目提出的科學(xué)假說(shuō)，有力地推動(dòng)了中醫(yī) “ 腎藏精 ” 理論科學(xué)實(shí)質(zhì)的研究。3研究隊(duì)伍多學(xué)科交叉，科研力量雄厚 有多個(gè)全國(guó)中醫(yī) 臨床研究研究基地、國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科、國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、國(guó)家工程技術(shù)中心、國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室、國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)專病?？啤?guó)家中醫(yī)藥管理局三級(jí)實(shí)驗(yàn)室等支撐。前期研究基礎(chǔ)扎實(shí)，團(tuán)隊(duì)主要成員是本領(lǐng)域國(guó)內(nèi)外著名學(xué)者，為本項(xiàng)目的研究奠定了良好的前期工作基礎(chǔ)。 項(xiàng)目的承擔(dān)單位均在中醫(yī)臟象相關(guān)理論領(lǐng)域和難治性、復(fù)雜性疾病的中醫(yī)藥防治領(lǐng)域進(jìn)行過(guò)深入的研究，具有深厚的前期工作基礎(chǔ)和完善的儀器設(shè)備及技術(shù)條件。 項(xiàng)目研究隊(duì)伍由老中青三代優(yōu)秀科學(xué)家組成，是一支多學(xué)科交叉、結(jié)構(gòu)合理、具有國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力的創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)。各課題負(fù)責(zé)人及學(xué)術(shù)骨 干是包括中國(guó)科學(xué)院院士在內(nèi)的相關(guān)領(lǐng)域資深專家，具有豐富的科研經(jīng)驗(yàn)和理論與臨床實(shí)踐，有承擔(dān)國(guó)家重點(diǎn)、重大項(xiàng)目的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，這為本項(xiàng)目研究取得重大突破提供了深厚的研究基礎(chǔ)及堅(jiān)實(shí)的保障。 王擁軍教授作為擬申請(qǐng)項(xiàng)目的首席科學(xué)家，是國(guó)家杰出青年科學(xué)基金獲得者，國(guó)家衛(wèi)生部有突出貢獻(xiàn)中青年專家，國(guó)家教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才，國(guó)家人事部新世紀(jì)百千萬(wàn)人才工程國(guó)家級(jí)人選，全國(guó)第二屆百名杰出青年中醫(yī)。擔(dān)任國(guó)家科技部科技成果、國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)（通訊和會(huì)議評(píng)審）、國(guó)家教育部、國(guó)家科技部、國(guó)家衛(wèi)生部評(píng)審專家以及國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科 技咨詢與評(píng)審專家。具有較好的總體組織和協(xié)調(diào)能力，具有宏觀的科學(xué)研究視野。 （五）課題設(shè)置 課題 1 ： “ 腎藏精 ” 理論文獻(xiàn)與臨床信息綜合分析研究研究?jī)?nèi)容 1.“ 腎藏精 ” 理論相關(guān)文獻(xiàn)的研究 （ 1） 以中醫(yī)藥古籍文獻(xiàn)和當(dāng)代國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)為研究對(duì)象，全面收集，采用文獻(xiàn)整理和數(shù)字化分析研究相結(jié)合的方法，規(guī)范中醫(yī)名詞術(shù)語(yǔ)，確立符合 “ 腎藏精 ” 理論辨證論治和現(xiàn)代科學(xué)認(rèn)知規(guī)律的構(gòu)成要素（包括疾病、證候、治法、方劑、中藥等）及表征要素，明確各要素的屬性。 （ 2） “ 腎藏精 ” 臟象理論溯源研究：包括陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)、五行學(xué)說(shuō)、天人相應(yīng)學(xué)說(shuō)對(duì) 中醫(yī)腎精命火臟象理論的影響。 （ 3） “ 腎藏精 ” 臟象理論基本概念、原理和演變規(guī)律研究：包括相關(guān)基本概念內(nèi)涵10 與外延、解剖形態(tài)、生理功能與病理狀態(tài)、臟象內(nèi)在系統(tǒng)聯(lián)系、體質(zhì)類型以及相關(guān)現(xiàn)代生物學(xué)參數(shù)研究。 （ 4） “ 腎藏精 ” 臟象理論相關(guān)疾病與證候的基本原理與規(guī)律研究：包括中醫(yī)腎精命火臟象理論相關(guān)疾病與證候的病因病機(jī)、臨床表征信息、辨證論治依據(jù)、古代病案分析、現(xiàn)代文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)研究。 （ 5） “ 腎藏精 ” 臟象理論相關(guān)疾病的治則治法研究；相關(guān)的方劑、中藥研究； “ 治未病 ” 原則和方法學(xué)研究。 2.“ 與腎相關(guān) ” 疾病臨床流行病學(xué)調(diào)查研究 以不孕不育、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和珠蛋白生成障礙性貧血等 “ 與腎相關(guān) ”疾病為研究對(duì)象，全面收集中西醫(yī)相關(guān)文獻(xiàn)，從病因病機(jī)、證候特征、治則治法、療效機(jī)理等方面進(jìn)行全面系統(tǒng)整理和挖掘，建立證候?qū)W分析技術(shù)路線，開(kāi)展基于臨床流行病學(xué)方法的 “ 與腎相關(guān) ” 疾病的特征分析，研究其基本規(guī)律。 3. 本項(xiàng)目系列課題研究結(jié)果的綜合數(shù)據(jù)信息庫(kù)建立 （ 1） “ 腎藏精 ” 臟象理論相關(guān)病證臨床療效內(nèi)在規(guī)律研究的綜合信息數(shù)據(jù)庫(kù)。包括從腎論治不孕不育、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆、珠蛋白生成障礙性貧血的研究成果，目前相關(guān)的臨床研究方案及其評(píng) 價(jià)，至今為止相關(guān)的方法學(xué)研究及其評(píng)價(jià)，結(jié)合本項(xiàng)目臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)。 （ 2） “ 腎藏精 ” 臟象理論相關(guān)病證基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究綜合信息數(shù)據(jù)庫(kù)。包括各疾病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型與 絡(luò)調(diào)節(jié)和干細(xì)胞的研究。 4. 中醫(yī) “ 腎藏精 ” 理論知識(shí)管理平臺(tái) “ 腎藏精 ” 臟象理論的知識(shí)管理平臺(tái)處理的數(shù)據(jù)、知識(shí)庫(kù)的建立與完善、知識(shí)管理平臺(tái)的建立。 預(yù)期目標(biāo) 1 應(yīng)用文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)、理論分析 方法， 全面、系統(tǒng)獲取 “ 腎藏精 ” 文獻(xiàn)資料進(jìn)行理論分析 ， 詮釋中醫(yī)腎精命火臟象理論，闡明其理論的基本科學(xué)內(nèi)涵； 2 應(yīng)用調(diào)查研究 和 臨床流行病學(xué)調(diào)查等方法， 揭 示相關(guān)疾病、證候從腎論治臨床療效產(chǎn)生的內(nèi)在規(guī)律； 3 將獲取的 “ 腎藏精 ” 研究的數(shù)據(jù)和信息 ， 分析、歸納、集成為結(jié)構(gòu)性知識(shí)，通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘，構(gòu)建 “ 腎藏精 ” 理論的數(shù)據(jù)信息庫(kù)和知識(shí)管理平臺(tái)， 4 建立以國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科為基礎(chǔ)的創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)，培養(yǎng)國(guó)家高層次理論研究學(xué)術(shù)帶頭人 1、學(xué)術(shù)骨干 8、博士研究生 6、碩士研究生 8； 5. 出版學(xué)術(shù)專著 3 部：中醫(yī) “ 腎藏精 ” 臟象理論、從腎論治的治則治法11 和方劑中藥、 基于“腎藏精”的養(yǎng)生康復(fù)理論； 6）發(fā)表高水平理論及其方法學(xué)研究論文 18。 經(jīng)費(fèi) 比例： 承擔(dān)單位： 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)、天津中醫(yī)藥大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 呂愛(ài)平 參加人員 ： 鄭洪新、孟靜巖、 才麗平、 李敬林 、 于春泉、王惠君、 尚德陽(yáng)課題 2 ： “腎藏精”理論與干細(xì)胞和 研究?jī)?nèi)容 根據(jù)中醫(yī)經(jīng)典理論，腎精盛衰主宰了人體生、長(zhǎng)、壯、老的全過(guò)程，隨著年齡增長(zhǎng)，腎精出現(xiàn)虧損；以藥測(cè)證是研究中醫(yī)臟象理論的重要方法，通過(guò)藥物的作用機(jī)制可探索證的特殊內(nèi)涵。本課題即在上述兩種基本策略的基礎(chǔ)上，采用不同月齡段大鼠及腎陽(yáng)虛大鼠模型，并用補(bǔ)腎藥物干預(yù)，觀察補(bǔ)腎改善腎精虧虛以及激 活內(nèi)源性干細(xì)胞（包括神經(jīng)干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞等）的效果及機(jī)制，從而部分揭示腎藏精的臟象理論內(nèi)涵研究。進(jìn)而，在體外模型，研究補(bǔ)腎藥物對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞自我更新、多系分化的影響以及機(jī)制。綜合體內(nèi)外研究，為補(bǔ)腎藥物激活內(nèi)源性干細(xì)胞，為腎精的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵提供依據(jù)。 1. 補(bǔ)腎填精法改善自然衰老大鼠腎精虧虛與激活內(nèi)源性干細(xì)胞的研究 采用不同月齡段 4、 8、 18、 24月），對(duì) 24月齡大鼠采用淫羊藿苷、淫羊藿總黃酮進(jìn)行干預(yù) 3個(gè)月，每組 15只。 （ 1） 觀察補(bǔ)腎藥物改善腎虛的效果：檢測(cè) 補(bǔ)腎干預(yù)的老年大鼠認(rèn)知功能、骨密度等的影響。 （ 2） 觀察補(bǔ)腎藥物激活內(nèi)源性干細(xì)胞的效果及機(jī)制： 提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（ 胞，研究 向分化的增齡性改變及補(bǔ)腎藥物的干預(yù)作用；采用大鼠 較不同年齡段及補(bǔ)腎藥物干預(yù)后 確 化譜、增殖 /分化平衡增齡改變的分子機(jī)制，并深入鑒定。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的重要通路逐一進(jìn)行研究。 觀察神經(jīng)干細(xì)胞（ 自我更新、定向分化的增齡性改變及補(bǔ)腎藥物的干預(yù)作用 ；采用大鼠 較不同年齡段及補(bǔ)腎藥物干預(yù)后12 確 化譜、增殖 /分化平衡增齡改變的分子機(jī)制，并深入鑒定。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的影響神經(jīng)干細(xì)胞分化的重要通路逐一進(jìn)行研究。 （ 3） 檢測(cè)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)指標(biāo)，明確補(bǔ)腎藥物激活內(nèi)源性干細(xì)胞的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫途徑：取血，檢測(cè)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)指標(biāo)。 （ 4） 總結(jié)補(bǔ)腎藥物改善腎虛和激活內(nèi)源性干細(xì)胞的關(guān)系，并明確發(fā)揮作用的主要神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制。 2. 補(bǔ)腎填精法改善腎陽(yáng)虛大鼠腎精虧虛與激活內(nèi)源性干細(xì)胞的研究 采用皮質(zhì)酮腎陽(yáng)虛 大鼠模型，并用補(bǔ)腎藥物淫羊藿苷、淫羊藿總黃酮進(jìn)行干預(yù)，每組 15只。 （ 1） 觀察補(bǔ)腎藥物激活內(nèi)源性干細(xì)胞的效果及機(jī)制： 提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（ 胞，研究 向分化的改變及補(bǔ)腎藥物的干預(yù)作用；采用大鼠 較各組 確 化譜、增殖 /分化平衡增齡改變的分子機(jī)制，并深入鑒定。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的重要通路逐一進(jìn)行研究。 觀察神經(jīng)干細(xì)胞（ 自我更新、定向分化的改變及補(bǔ)腎藥物的干預(yù)作用；采用大鼠 較各組 確 化譜、增殖 /分化平衡改變的分子機(jī)制，并深入鑒定。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的影響神經(jīng)干細(xì)胞分化的重要通路逐一進(jìn)行研究。 （ 2） 檢測(cè)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)指標(biāo)，明確補(bǔ)腎藥物激活內(nèi)源性干細(xì)胞的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫途徑：取血，檢測(cè)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)指標(biāo)。 （ 3） 總結(jié)補(bǔ)腎藥物改善腎虛和激活內(nèi)源性干細(xì)胞的關(guān)系，并明確發(fā)揮作用的主要神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制。 3體外研究補(bǔ)腎藥物激活神經(jīng)干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、胚胎及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的效果及機(jī)制。 （ 1） 神經(jīng)干細(xì)胞通過(guò)自我更新 擴(kuò)增干細(xì)胞池，并能分化為神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞。在充分鑒定神經(jīng)干細(xì)胞的基礎(chǔ)上，研究補(bǔ)腎藥物對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自我更新的影響；分別利用上述三種終末細(xì)胞的標(biāo)志物，觀察淫羊藿苷、淫羊藿總黃酮對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化的作用。采用大鼠 究藥物干預(yù)前后相關(guān)基因表達(dá)的變化，篩選補(bǔ)腎藥干預(yù)神經(jīng)干細(xì)胞自我更新、分化譜、增殖 /分化平衡改變的分子機(jī)制和通路，并深入鑒定。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的影響神經(jīng)干細(xì)胞分化的重要通路逐一進(jìn)行研究。 （ 2） 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)自我更新補(bǔ)充數(shù)量，并能向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì) 胞分化，也有報(bào)道能向神經(jīng)細(xì)胞、呼吸道上皮細(xì)胞跨胚層分化。本項(xiàng)目擬觀察13 上述藥物對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自我更新、分化的影響。采用大鼠 究藥物干預(yù)前后相關(guān)基因表達(dá)的變化，篩選補(bǔ)腎藥干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自我更新、分化譜、增殖 /分化平衡改變的分子機(jī)制和通路，并深入鑒定。對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的重要通路逐一進(jìn)行研究。 （ 3） 胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞具有分化的全能特性，是研究干細(xì)胞分化的較好模型。國(guó)外已報(bào)道胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞、成骨細(xì)胞、造血干細(xì)胞、胰島細(xì)胞的定向分化。本項(xiàng) 目擬觀察上述藥物對(duì)胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞定向分化的影響。采用大鼠 究藥物干預(yù)前后相關(guān)基因表達(dá)的變化，篩選補(bǔ)腎藥干預(yù)胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞定向分化的分子機(jī)制和通路，并深入鑒定。 （ 4） 綜合體內(nèi)外研究結(jié)果，總結(jié)補(bǔ)腎藥物激活內(nèi)源性干細(xì)胞的主要神經(jīng)內(nèi)分泌免疫途徑，細(xì)胞內(nèi)主要信號(hào)通路，從而揭示腎精命火的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵。 預(yù)期目標(biāo) 1. 明確補(bǔ)腎藥物改善自然衰老大鼠的效果和激活內(nèi)源性干細(xì)胞的關(guān)系；明確補(bǔ)腎藥物發(fā)揮作用的主要神經(jīng)內(nèi)分泌免疫途徑和細(xì)胞內(nèi)分子機(jī)制。 2. 明確補(bǔ)腎藥物激 活腎陽(yáng)虛大鼠內(nèi)源性干細(xì)胞的效果；明確補(bǔ)腎藥物發(fā)揮作用的主要神經(jīng)內(nèi)分泌免疫途徑和細(xì)胞內(nèi)分子機(jī)制。 3. 通過(guò)上述的以藥測(cè)證以及機(jī)制的深入研究，為腎精命火的中醫(yī)理論提供現(xiàn)代生物學(xué)意義上的解釋，升華中醫(yī)“腎藏精”理論。 4. 培養(yǎng)一批高層次的中醫(yī)和中西醫(yī)結(jié)合研究型人才，培養(yǎng)研究生 10增強(qiáng)各科研單位的協(xié)作能力，提高承擔(dān)中醫(yī)重大科研課題的能力。 5. 發(fā)表論文 20中被 篇以上，申請(qǐng)專利 1項(xiàng)。 經(jīng)費(fèi)比例： 承擔(dān)單位： 復(fù)旦大學(xué)、湖南中醫(yī)藥大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 沈自尹 參 加人員 ： 劉柏炎、卞琴 、 張新民、黃建華、 丁道芳、 譚琥、屈波 課題 3 ： 從不孕不育探討“腎主生殖”理論的研究 研究?jī)?nèi)容 （ 1） 配合課題一的流行病調(diào)查研究（不孕不育與腎精不足、命門火衰證候體質(zhì)相關(guān)14 的流行病學(xué)調(diào)查）及本課題實(shí)驗(yàn)及臨床研究數(shù)據(jù)處理的需要研制結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)采集軟件。 （ 2） 通過(guò)本課題相關(guān)古籍文獻(xiàn)梳理及現(xiàn)代研究數(shù)據(jù)挖掘，在本課題實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)管理基礎(chǔ)上，建立溫腎填精方藥干預(yù)生殖的實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)庫(kù)。 （ 3） 通過(guò)“腎精虧虛、命門火衰”型不孕不育患者臨床四診 信息采集、精子質(zhì)量及活性、卵泡成熟及排出、子宮卵巢血供指數(shù)、盆腔熱代謝值動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)、細(xì)胞體液免疫、免疫因子等多源數(shù)據(jù)采集及臨床研究數(shù)據(jù)，建立溫腎填精方藥治療不孕不育的臨床數(shù)據(jù)研究數(shù)據(jù)庫(kù)。 2. 基于腎藏精的溫腎填精方藥促進(jìn)生殖的實(shí)驗(yàn)研究 （ 1） 基于 溫腎填精復(fù)方、單味藥及單體含藥血清制備研究。應(yīng)用 術(shù)制備溫腎填精復(fù)方（右歸丸、五子衍宗丸等）、單味藥及單體（淫羊藿、補(bǔ)骨脂、淫羊藿苷、淫羊藿總黃酮、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素等）含藥血清以應(yīng)用于體外篩選研究及體外藥效機(jī)制研究。 （ 2） 溫腎填精方藥及單體成 分干預(yù)生殖的 3體顆粒細(xì)胞體外藥效評(píng)價(jià)篩選研究。選擇 3脂肪細(xì)胞株、超排卵所得的原代培養(yǎng)鼠顆粒細(xì)胞，應(yīng)用 脂肪細(xì)胞、鼠顆粒細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)觀察各藥物含藥血清對(duì) 3脂肪細(xì)胞、鼠顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、激素分泌、芳香化酶表達(dá)等情況，在篩選有效的溫腎填精方藥、單味藥及單體成分基礎(chǔ)上進(jìn)行本課題實(shí)驗(yàn)及臨床研究。 （ 3） 溫腎填精方藥促胚胎干細(xì)胞定向分化為卵母細(xì)胞及精原細(xì)胞研究。首先 收集似干細(xì)胞的克隆、用免疫細(xì)胞學(xué)分析胚胎干細(xì)胞標(biāo)志蛋白鑒定干細(xì)胞克隆，通 過(guò)溫腎填精藥物干預(yù)， 觀察對(duì)胚胎干細(xì)胞 分化發(fā)育的影響。 （ 4） 溫腎填精方藥促進(jìn)生殖細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及其機(jī)制研究。 選擇未成熟卵細(xì)胞、成熟卵細(xì)胞、受精的成熟卵細(xì)胞、受精卵， 應(yīng)用免疫組化及激光共聚焦顯微技術(shù)觀察溫腎填精方藥含藥血清對(duì)未成熟卵細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、體外受精和胚胎發(fā)育的影響。 （ 5） 溫腎填精方藥對(duì)胚胎著床微環(huán)境的影響研究。通過(guò)建立超促排卵周期和自然周期胚胎受體小鼠模型，通過(guò)比較妊娠率和胚胎著床率，盆腔熱代謝及子宮內(nèi)膜整合素 表達(dá)情況研究溫腎填精方藥對(duì)胚胎著床微環(huán)境的影響。 （ 6） 溫腎填精方藥對(duì)冷凍卵細(xì)胞、精子 、受精卵解凍復(fù)蘇的干預(yù)研究。 采用程序冷凍方法，用 溫腎填精方藥 含藥血清 配制的冷凍保存液和解凍液，冷凍保存小鼠精子、卵細(xì)胞、胚胎和卵巢組織，通過(guò) 透射電鏡、 共聚焦顯微鏡、 免疫組化等方法 評(píng)價(jià)溫腎填精方藥對(duì)冷凍精子、卵細(xì)胞、受精卵解凍復(fù)蘇的干預(yù)。 3. 基于腎藏精的溫腎填精方藥促進(jìn)生殖的臨床研究 15 （ 1） 基于熱成像技術(shù)的溫腎填精方藥調(diào)節(jié)腎精不足、命門火衰證的客觀化研究。采用單中心或多中心、隨機(jī)、 平行對(duì)照的臨床實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，分為正常女性組、正常男性組、女性腎精不足、命門火衰不孕組、男性女性腎精不足、命門火衰不育組，應(yīng)用熱成像 技術(shù)評(píng)價(jià)右歸丸、五子衍宗丸對(duì)受試者全身及局部細(xì)胞代謝熱值的動(dòng)態(tài)影響及規(guī)律。 （ 2） 溫腎填精方藥調(diào)節(jié) 絡(luò)治療不孕癥的臨床研究。 采用單中心或多中心、隨機(jī)、平行對(duì)照的臨床實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別對(duì) 能失調(diào)不孕及 者進(jìn)行評(píng)價(jià)研究。能失調(diào)不孕分為觀察及對(duì)照組， 對(duì)照組為腹腔鏡分粘術(shù)后患者，觀察組在上述干預(yù)上加用溫腎填精中藥，觀察溫腎填精方藥對(duì) 免疫功能失調(diào)性不孕干預(yù)作用。 者也分為對(duì)照組與觀察組，對(duì)照組給予西醫(yī)促排卵藥物，治療組在上述基礎(chǔ)上給予右歸丸和五子衍宗丸加減，觀察溫腎填精方藥對(duì) 娠結(jié) 局的影響。 （ 3） 溫腎填精方藥調(diào)節(jié)少精弱精不育癥精子數(shù)量及活性的臨床研究。采用單中心或多中心、隨機(jī)、平行對(duì)照的臨床實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，分為觀察及對(duì)照 2 組，對(duì)照組給予左卡尼汀，治療組給予右歸丸和五子衍宗丸加減，評(píng)價(jià)溫腎填精方藥對(duì)精子的數(shù)量及活性的影響。 選取 30 份不同男性的精液標(biāo)本洗滌優(yōu)選后，分為溫腎填精中藥干預(yù)組及對(duì)照組，分別與不同濃度的 37共同孵育， 評(píng)價(jià)不同濃度蛋白激酶 A（ ， 與調(diào)節(jié)精子的活力的影響、篩選出 體外精子活力影響的最佳時(shí)間和濃度、初步探討 響 精子活力的機(jī)制。 預(yù)期目標(biāo) 制出結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)采集軟件，建立不孕不育的實(shí)驗(yàn)及臨床數(shù)據(jù)庫(kù)。 孕不育的證治規(guī)律，揭示“腎主生殖”與不孕不育臨床療效的內(nèi)在聯(lián)系，深化從腎論治不孕不育的理論意義。 殖干細(xì)胞、干預(yù)胚胎著床及 絡(luò)功能的相關(guān)性。 病（證）探因、以效證因，以及機(jī)制的研究，為腎藏精、腎主生殖的中醫(yī)理論提供現(xiàn)代生物學(xué)意義上的解釋，升華中醫(yī)“腎藏精”理論。 養(yǎng)研究生 19，其中博士研究生 3，增強(qiáng)各科研單位的協(xié)作能力，提高承擔(dān)中醫(yī)重大科研課題的能力。 0，其中被 錄 5 篇以上，撰寫(xiě)專著 1 部。 16 項(xiàng)，獲專利授權(quán) 1 項(xiàng)。 經(jīng)費(fèi)比例： 承擔(dān)單位： 成都中醫(yī)藥大學(xué)、北京中醫(yī)藥大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 陸華 參加人員 ： 李曰慶、王米渠、 王彬、劉偉信、楊丹、朱明輝、胡翔 課題 4 ： 從骨質(zhì)疏松癥探討“腎主骨”理論的研究 研究?jī)?nèi)容 1. 補(bǔ)腎填精法治療骨質(zhì)疏松癥的 證治規(guī)律研究 （ 1） 多源信息采集平臺(tái)的建立?；诠琴|(zhì)疏松癥患者的臨床表現(xiàn)，建立中醫(yī)四診信息的臨床證候量表。研制結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)采集軟件，在 成臨床數(shù)據(jù)信息庫(kù)，數(shù)據(jù)納入課題一統(tǒng)一分析。 （ 2）臨床療效評(píng)價(jià)研究。 選擇臨床 65醫(yī)辨證屬于腎精虧虛型。 檢驗(yàn)各組患者在年齡、性別和體重上差異無(wú)顯著性。測(cè)定部位為 正后得到校正值 常組 照組自愿接受福善美治療，治療組自愿接受青娥丸合二仙湯治療。每組均為 60例，治療 6個(gè)月。 通過(guò)中醫(yī)證候積分、骨質(zhì)疏松癥相關(guān)評(píng)價(jià)量表、骨密度（ 影像學(xué)特異性表現(xiàn)等檢測(cè)手段，評(píng)價(jià)補(bǔ)腎填精法治療骨質(zhì)疏松癥的療效，揭示其產(chǎn)生療效的物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)長(zhǎng)期隨訪量表評(píng)價(jià)及終點(diǎn)事件調(diào)查，評(píng)價(jià)該法治療骨質(zhì)疏松癥的遠(yuǎn)期療效。闡述補(bǔ)腎填精法治療骨質(zhì)疏松癥的證治規(guī)律，揭示“腎主骨”與骨質(zhì)疏松癥臨床療效的內(nèi)在聯(lián)系，深化從腎論治骨質(zhì)疏松癥的理論意 義。 2補(bǔ)腎填精法治療骨質(zhì)疏松癥的物質(zhì)基礎(chǔ)研究 （ 1）骨代謝指標(biāo)檢測(cè)。包括骨合成代謝指標(biāo)： of 骨堿性磷酸酶（ 骨分解代謝指標(biāo)： （ 2）骨質(zhì)疏松癥患者 健康志愿者為正常組，青娥丸合 3二仙湯為治療組，福善美為對(duì)照組，每組的樣本量15例。抽取外周血，進(jìn)行“ 標(biāo)檢測(cè)。 （ 3）骨質(zhì)疏松癥患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能研究。分組和治療同上。骨髓穿刺，分離純化，進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分子標(biāo)志鑒定（ OP， 揭示補(bǔ)腎填精法影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的環(huán)節(jié)17 及促成骨的作用。采用人 選并鑒定藥物干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的關(guān)鍵基因和分子通路。 3. 補(bǔ)腎填精法治療骨質(zhì)疏松癥的療效機(jī)制研究 （ 1）動(dòng)物模型建立。選擇去雙側(cè)卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型，在疾病模 型建立的基礎(chǔ)上，再建立腎陽(yáng)虛型大鼠骨質(zhì)疏松病證結(jié)合模型 鄺安堃，吳裕，丁霆，等某些助陽(yáng)藥對(duì)于大劑量皮質(zhì)激素所致耗竭現(xiàn)象的影響中華內(nèi)科雜志， 1963， 2(2)： 113。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、青娥丸合二仙湯治療組、福善美對(duì)照組，每組 20只動(dòng)物。 （ 2）相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。骨密度及生物力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：取四肢骨、椎體、椎間盤等。雙能 能材 料 試驗(yàn)機(jī)檢測(cè)股骨三點(diǎn)彎曲生物力學(xué)指標(biāo)。組織形態(tài)學(xué)觀察：取下丘腦、垂體、腎臟、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、 睪丸、四肢骨、椎體、椎間盤、血細(xì)胞等組織器官，進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察：生化指標(biāo)測(cè)試： 深入探討 揭示“腎藏精，主骨生髓”在原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥中的生物學(xué)機(jī)理。 （ 3） 組 10只動(dòng)物，取材和檢測(cè)同課題二 明確補(bǔ)腎填精法干預(yù) （ 4）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。抽取骨髓，進(jìn)行分子標(biāo)志鑒定。檢測(cè)向成骨分化的標(biāo)志物，包括： 價(jià)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化能力。采用大鼠 選并鑒定藥物干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的關(guān)鍵基因和分子通路。 預(yù)期目標(biāo) 1. 建立骨質(zhì)疏松癥多源信息采集平臺(tái)，研制出結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)采集軟件，形成關(guān)于骨質(zhì)疏松的臨床數(shù)據(jù)信息庫(kù)。 2. 明確補(bǔ)腎治療骨質(zhì)疏松癥的近期及遠(yuǎn)期療效，闡述補(bǔ)腎填精法治療骨質(zhì)疏松癥的證治規(guī)律，揭示“腎主骨”與骨質(zhì)疏松癥臨床療效的內(nèi)在聯(lián)系，深化從腎論治骨質(zhì)疏松癥的理論意義。 3. 明確骨質(zhì)疏松癥與骨髓 間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的關(guān)系，在此基礎(chǔ)上，明確補(bǔ)腎藥產(chǎn)生療效與干預(yù)干細(xì)胞的生物學(xué)行為的相關(guān)性。 4. 大量研究已經(jīng)表明 究也表明 此通過(guò)本項(xiàng)目的研究擬明確補(bǔ)腎藥是否通過(guò)以及通過(guò)何種 而產(chǎn)生臨床療效。 5. 通過(guò)上述的從?。ㄗC）探因、以效證因，以及機(jī)制的研究，為腎藏精、腎主骨18 的中醫(yī)理論提供現(xiàn)代生物學(xué)意義上的解釋，升華中醫(yī)“腎藏精”理論。 6. 培養(yǎng)一批高層次的中醫(yī)和中西醫(yī)結(jié)合研究型人才，培養(yǎng)研究生 10增強(qiáng)各科研單位的 協(xié)作能力，提高承擔(dān)中醫(yī)重大科研課題的能力。 7. 發(fā)表論文 20中被 篇以上，申請(qǐng)專利 1項(xiàng)。 經(jīng)費(fèi)比例： 承擔(dān)單位： 上海中醫(yī)藥大學(xué)、遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 王擁軍 參加人員 ： 施杞、任艷玲、周重建、莫文、周泉、唐得志、崔學(xué)軍、李佶 課題 5： 從老年性癡呆探討“腎生髓，腦為髓之?！崩碚摰难芯?研究?jī)?nèi)容 1補(bǔ)腎填精法治療老年性癡呆臨床療效評(píng)價(jià)研究 開(kāi)展多中心、隨機(jī)、平行對(duì)照臨床試驗(yàn)。通過(guò)中醫(yī)證候積分、老年性癡呆相關(guān)評(píng)價(jià)量表、影像學(xué)特異性表現(xiàn)等檢測(cè)手段，評(píng)價(jià)補(bǔ)腎填精法治 療老年性癡呆的臨床療效；通過(guò)長(zhǎng)期隨訪量表評(píng)價(jià)及終點(diǎn)事件調(diào)查，評(píng)價(jià)該法治療老年性癡呆的遠(yuǎn)期療效，以闡釋補(bǔ)腎填精法治療老年性癡呆腎虛證的證治規(guī)律，揭示 “腎生髓，腦為髓海 ”與老年性癡呆臨床療效的內(nèi)在聯(lián)系，深化從腎論治老年性癡呆的臨床指導(dǎo)意義。 2補(bǔ)腎填精法治療老年性癡呆的物質(zhì)基礎(chǔ)研究 （ 1）血漿特異性蛋白表達(dá)等相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。 （ 2）老年性癡呆患者 “絡(luò) ”相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。 3補(bǔ)腎填精法治療老年性癡呆的療效機(jī)制研究 （ 1）動(dòng)物模型建立。 選擇不同月齡快速老化鼠（ 鼠），在此基礎(chǔ)上，建立腎陽(yáng)虛型大鼠老 年性癡呆病證結(jié)合模型。 （ 2）相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。 動(dòng)物行為學(xué)（認(rèn)知功能及記憶能力）檢測(cè)； 不同部位腦組織形態(tài)學(xué)觀察； 特異性基因與蛋白表達(dá)檢測(cè)，揭示 “腎生髓，腦為髓海 ”理論在老年性癡呆中的生物學(xué)機(jī)理。 （ 3） “相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。 選取與老年性癡呆密切相關(guān)的 用基因芯片等技術(shù)方法，以明確補(bǔ)腎填精法干預(yù) （ 4） 神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。 通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞鑒定分子標(biāo)志檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量，并分離出神經(jīng)干細(xì)胞；通過(guò)向神經(jīng)相關(guān)細(xì)胞分化的標(biāo)志物評(píng)價(jià)干細(xì)胞分化能力。 19 預(yù)期目標(biāo) 1明確補(bǔ)腎治療老年性癡呆的近期及遠(yuǎn)期療效，闡述補(bǔ)腎填精法治療老年性癡呆的證治規(guī)律，揭示 “腎生髓，腦為髓海 ”與老年性癡呆臨床療效的內(nèi)在聯(lián)系。 2明確補(bǔ)腎治療老年性癡呆 的物質(zhì)基礎(chǔ) ， 闡述補(bǔ)腎填精法治療老年性癡呆腎虛證的臨床作用機(jī)理 ，深化從腎論治老年性癡呆的理論意義 3 明確老年性癡呆與神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)行為的關(guān)系，在此基礎(chǔ)上，明確補(bǔ)腎藥產(chǎn)生療效與干預(yù)干細(xì)胞的生物學(xué)行為的相關(guān)性。 4大量研究已經(jīng)表明 究也表明 此通過(guò)本項(xiàng)目的研究擬明確補(bǔ)腎藥是 否通過(guò)以及通過(guò)何種 而產(chǎn)生臨床療效。 5通過(guò)上述的從?。ㄗC）探因、以效證因，以及機(jī)制的研究，為腎藏精、腎生髓，腦為髓海的中醫(yī)理論提供現(xiàn)代生物學(xué)意義上的解釋，升華中醫(yī) “腎藏精 ”理論。 6 培養(yǎng)一批高層次的中醫(yī)和中西醫(yī)結(jié)合研究型人才，培養(yǎng)研究生 10增強(qiáng)各科研單位的協(xié)作能力，提高承擔(dān)中醫(yī)重大科研課題的能力。 7發(fā)表論文 15，其中被 錄 2 篇以上。 經(jīng)費(fèi)比例： 承擔(dān)單位： 天津中醫(yī)藥大學(xué)、上海中醫(yī)藥大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 張玉蓮 參加人員 ： 林水淼、周震、安紅梅、鄭錦、周永明、顧耘、郭家奎 課題 6 ： 從障礙性貧血探討 “ 腎生髓 ” 理論的研究 研究?jī)?nèi)容 1補(bǔ)腎益髓法治療珠蛋白生成障礙性貧血證治規(guī)律研究 （ 1）多源信息采集平臺(tái)的建立?；谥榈鞍咨烧系K性貧血的臨床表現(xiàn)，建立中醫(yī)四診信息的臨床證候量表；調(diào)查患者中醫(yī)癥候與基因突變型（遺傳背景與先天稟賦）關(guān)系，建立血液參數(shù)療效性指標(biāo)（ 信息采集系統(tǒng)。研制結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)采集軟件，在 成臨床數(shù)據(jù)信息庫(kù)，數(shù)據(jù)納入課題總項(xiàng)目統(tǒng)一分析。 （ 2）中藥治療珠蛋白生成障礙性貧血臨床驗(yàn)證。通過(guò) 3位中醫(yī)師臨床辨證，選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的（腎精虧損型）中間型 益髓生血顆粒前期療效基礎(chǔ)上，采用補(bǔ)腎益髓方（仙靈脾，補(bǔ)骨脂，山茱萸，熟地，阿膠，當(dāng)歸），設(shè)置正常組，安慰劑對(duì)照， 補(bǔ)腎益髓方 治療組，和益髓生血顆粒對(duì)20 照組，每組各 25例。開(kāi)展隨機(jī)、平行對(duì)照臨床試驗(yàn)，評(píng)價(jià)中藥治療 證從腎論治珠蛋白生成障礙性貧血的有效性。 2補(bǔ)腎益髓法治療 （ 1） 補(bǔ)腎益髓法 對(duì) 組選取 10例患者，采用透射電鏡、細(xì)胞 驗(yàn)等技術(shù)，從患者血液參數(shù)、紅細(xì)胞形態(tài)、紅細(xì)胞膜骨架蛋白、紅細(xì)胞包涵體、紅細(xì)胞氧化損傷、紅細(xì)胞分子免疫功能等不同層面，探討 補(bǔ)腎益髓法 治療障礙性貧血的物質(zhì)基礎(chǔ)。 （ 2） 補(bǔ)腎益髓法 對(duì) 組選取 8 10例患者，從 異基因表達(dá)、功能蛋白表達(dá)、血清多肽譜等方面，研究 補(bǔ)腎益髓法 治療珠蛋白生成障礙性貧血的分子機(jī)制。 （ 3） 補(bǔ)腎益髓法 對(duì)珠蛋白生成障礙性貧血患者 組樣本量 10例。進(jìn)行神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)（ 關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)： 漿皮質(zhì)醇、長(zhǎng)激素、雌二醇、睪酮、兒茶酚胺、乙酰膽堿、血管活性腸肽、促甲狀腺素 式細(xì)胞儀檢測(cè) 胞比例，計(jì)算 比；取血清，檢測(cè) （ 4）補(bǔ)腎益髓法對(duì)珠蛋白生成障礙性貧血患者干細(xì)胞增殖分化的影響：基于 究補(bǔ)腎益髓中藥對(duì)造血干細(xì)胞的影響。每組樣本量 10例，探討治療前后部分患者骨髓造血干細(xì)胞增殖活性、分化趨勢(shì)及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子水平的改變，采用人 選并鑒定藥物干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的關(guān)鍵基因和分子通路。 3補(bǔ)腎益髓中藥有效組分 對(duì)紅細(xì)胞分化和 利用轉(zhuǎn)人 從 轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路、表觀遺傳修飾（重點(diǎn)分析 個(gè)不同層面上深入研究益髓生血顆?；罨?（ 1） 研究補(bǔ)腎益髓中藥有效組分對(duì)珠蛋白基因開(kāi)關(guān)的影響和機(jī)制 1） 利用轉(zhuǎn)人 定細(xì)胞系研究中藥有效組分對(duì)于人 2） 利用大鼠 要研究胚胎到成鼠珠蛋白表達(dá)開(kāi)關(guān)）的影響。 3） 研究中藥有效組分對(duì)人 血干 /祖細(xì)胞紅系誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中珠蛋白基 因表達(dá)和開(kāi)關(guān)的影響（主要研究胚胎 ，重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)中藥有效組分是否具有對(duì) 4） 在上述研究獲得正性結(jié)果的基礎(chǔ)上，研究中藥有效組分影響珠蛋白基因開(kāi)關(guān)以及特異活化 點(diǎn)實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化以及表觀遺傳改變等）。 5） 在獲得正性結(jié)果的基礎(chǔ)上，選擇性實(shí)驗(yàn)用中藥有效組分治療 （ 2） 研究中藥有效組分對(duì)造血細(xì)胞分化（重點(diǎn)在紅系分化）的影響和機(jī)制 1） 利用半固體培 養(yǎng)基研究中藥有效組分對(duì)造血干細(xì)胞（ 紅系分化定向的影響 2） 利用 血干 /祖細(xì)胞紅系誘導(dǎo)液體培養(yǎng)研究中藥有效組分對(duì)紅系分化的影響。 3） 在上述研究獲得正性結(jié)果的基礎(chǔ)上，研究中藥有效組分影響 系定向和紅系祖細(xì)胞繼續(xù)分化成熟的作用機(jī)制（重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)可能影響紅系分化的蛋白質(zhì)基因以及表達(dá)變化，并進(jìn)一步研究影響紅系分化的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。） 4） 在獲得正性結(jié)果的基礎(chǔ)上，選擇幾個(gè)病例，實(shí)驗(yàn)中藥有效組分對(duì) 4. 研究補(bǔ)腎益髓中藥及其有效 組分對(duì)再生障礙性貧血大鼠動(dòng)物模型的影響： 建立再生障礙性貧血?jiǎng)游锎笫竽Ｐ停Ｐ鸵唬?60線 y 照射后第 4d 開(kāi)始給予環(huán)磷酰胺 50.0 氯霉素 62.5 3d；模型二：馬利蘭 懸液按 4d，連續(xù)灌胃 45 天，造模誘導(dǎo)），給予補(bǔ)腎益髓中藥干預(yù)治療，觀察外周血象、骨髓有核細(xì)胞及免疫功能指標(biāo)變化，同時(shí)觀察藥物對(duì)障礙性貧血模型大鼠 關(guān)指標(biāo)變化，并分離造血干細(xì)胞，觀察再障大鼠骨髓紅系干細(xì)胞增殖分化和相關(guān)生長(zhǎng)因子的變化。 預(yù)期目標(biāo) 總體 研究目標(biāo) ： 以珠蛋白生成障礙性貧血為研究對(duì)象，從證探因，以法驗(yàn)效，補(bǔ)腎益髓 中藥 治療 珠蛋白生成 障礙性貧血的臨床療效與調(diào)控造血干細(xì)胞和 絡(luò)功能的相關(guān)性，進(jìn)一步揭示 “ 腎生髓 ” 理論的科學(xué)內(nèi)涵。 在以往基礎(chǔ)上，按照循證醫(yī)學(xué)原則， 以珠蛋白生成障礙性貧血 患者 為 主要 研究對(duì)象，在廣西地中海貧血癥高發(fā)區(qū)應(yīng)用補(bǔ)腎益髓中藥治療地中海貧血癥，采用隨機(jī)、單盲、安慰劑對(duì)照臨床規(guī)范研究， 結(jié)合 轉(zhuǎn)人 通過(guò)臨床和實(shí)驗(yàn)研究，從激活 響基因開(kāi)關(guān)；22 調(diào)控珠蛋白 達(dá)；調(diào)控骨髓干 細(xì)胞誘導(dǎo)分化、促進(jìn)有效紅細(xì)胞生成，對(duì)轉(zhuǎn)人探索 補(bǔ)腎益髓法治療障礙性貧血的臨床療效與調(diào)控造血干細(xì)胞和 絡(luò)功能的相關(guān)性。 五年預(yù)期目標(biāo)： （ 1） 建立 立中醫(yī)四診信息臨床證候量表；中醫(yī)癥候與基因突變型關(guān)系量表及血液學(xué)參數(shù)療效性指標(biāo)信息采集系統(tǒng)，研制出結(jié)構(gòu)化數(shù)據(jù)采集軟件，在 導(dǎo)下形成關(guān)于珠蛋白生成障礙性貧血的臨床數(shù)據(jù)信息庫(kù)。 （ 2） 完 成 200 例珠蛋白生成障礙性貧血患者證候規(guī)律、遺傳背景關(guān)系調(diào)查， 完成200 例臨床患者 流行病學(xué)調(diào)查統(tǒng)計(jì)分析， 篩選符合條件的研究病例； （ 3） 完成 高發(fā)區(qū)符合納入條件的珠蛋白生成障礙性貧血癥患者采集，隨機(jī)分為 正常組，安慰劑對(duì)照， 補(bǔ)腎益髓方 治療組，和益髓生血顆粒對(duì)照組，每組各 25 例，開(kāi)展中藥治療對(duì)照臨床規(guī)范研究，完成 80 例 （考慮到可能脫落病例，增加 5 例患者） 珠蛋白生成障礙性貧血患者臨床有效