多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段導(dǎo)學(xué)案

1、課題 2 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段學(xué)習(xí)目標(biāo) 知識 目標(biāo)：1、了解 PCR技術(shù)的基本操作2、理解 PCR的原理3、討論 PCR的應(yīng)用 能力目標(biāo)：在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段的實(shí) 驗(yàn)過程中，應(yīng)避免外源DNA污染，嚴(yán)格控制溫度等反應(yīng)條件 情感態(tài)度價(jià)值觀：通過對 PCR實(shí)驗(yàn)的操作及結(jié)果分析，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和實(shí)事求是的科研精神自主學(xué)習(xí)一： PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA的過程，與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程類似：1細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制條件分析：條件組分作用模板原料酶能量引物2細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程的解析：解旋：解旋酶、 ATP， DNA兩條鏈打開，形成兩條DNA單鏈。引物結(jié)合：在DNA單鏈 3端與 DNA反向配對

2、結(jié)合。DNA聚合酶結(jié)合：DNA聚合酶與模板鏈結(jié)合，標(biāo)志著單鏈合成開始。子鏈合成： DNA聚合酶從引物3端開始，將配對的脫氧核苷酸連接起來。后續(xù)加工： DNA聚合酶 I 將引物切去， 并合成空缺處的 DNA單鏈，再由 DNA連接酶將不連續(xù)的DNA子鏈連接起來（半不連續(xù)合成。先導(dǎo)鏈，滯后鏈）子鏈合成特點(diǎn)：。思考 DNA分子能準(zhǔn)確復(fù)制的原因有哪些？。3 DNA 分子復(fù)制的人工控制解開螺旋：在時(shí)， DNA雙螺旋打開，形成兩條DNA單鏈，稱為變性?；謴?fù)螺旋：在左右時(shí)，兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為復(fù)性。復(fù)制條件：。反應(yīng)場所： （自動(dòng)溫度周期性調(diào)節(jié)） 。思考緩沖液相當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的什么成分？（核基 質(zhì)）

3、4 PCR的反應(yīng)過程變性復(fù)性延伸變性：在時(shí)DNA解旋復(fù)性：在時(shí)引物與DNA單鏈結(jié)合延伸：在時(shí)合成DNA子鏈（兩個(gè)引物間的序列）實(shí)驗(yàn)操作（1） PCR 反應(yīng)體系：緩沖液、，、兩種 RNA引物，水（2） 實(shí)驗(yàn)操作步驟按照 PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液；將 PCR反應(yīng)體系50 L 用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管（0.5mL）中；將微量離心管放到PCR儀中；設(shè)置 PCR儀的工作參數(shù)。DNA在 PCR儀中大量擴(kuò)增。2 4 水浴法：將微型離心管依次在、的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時(shí)間。3實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)（ 1）避免外源 DNA污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。（ 2）緩沖液和酶分裝成小份， 20低溫

4、保存。（ 3）每添加一種反應(yīng)成分，更換一個(gè)移液器的槍頭。（ 4）混勻后離心處理，使反應(yīng)液集中在離心管底部。【典例分析】例 1 標(biāo)準(zhǔn)的PCR過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，這三大步需要的溫度依次是() 。A94、 55、 72B72、 55、 94C55、 94、 72D80、 55、 72例 2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR 技術(shù) ) 是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增，其簡要過程如圖所示。下列關(guān)于PCR技術(shù)敘述不正確的是() 。A PCR技術(shù)是在實(shí)驗(yàn)室中以少量DNA制備大量DNA的技術(shù)B反應(yīng)中新合成的

5、DNA又可以作為下一輪反應(yīng)的模板C PCR技術(shù)中以核糖核苷酸為原料，以指數(shù)方式擴(kuò)增D應(yīng)用 PCR技術(shù)與探針雜交技術(shù)可以檢測基因突變限時(shí)訓(xùn)練1 DNA分子復(fù)制時(shí)，解旋的兩條鏈中（）A 僅一條作為復(fù)制模板B 兩條鏈作為模板并復(fù)制出兩個(gè)不同的DNA分子C兩條鏈作為模板并復(fù)制出兩個(gè)相同的DNA分子D 兩條鏈作為模板，各自合成一條子鏈，然后兩條母鏈重新結(jié)合為原來的雙螺旋分子，兩條新鏈結(jié)合成一個(gè)全新的 DNA分子2. 下列關(guān)于DNA復(fù)制過程的正確順序是（）互補(bǔ)堿基對之間氫鍵斷裂互補(bǔ)堿基對之間形成氫鍵 DNA 分子在解旋酶的作用下解旋以解旋后的母鏈為模板進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對 子鏈與母鏈盤旋成雙螺旋狀結(jié)構(gòu)ABCD3. 下列各項(xiàng)過程中，遵循“堿基互補(bǔ)配對原則”的有（） DNA復(fù)制 RNA復(fù)制轉(zhuǎn)錄翻譯逆轉(zhuǎn)錄ABCD4. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)模擬生物體DNA的復(fù)制必需的一組條件是（）酶 游離的脫氧核苷酸ATP DNA分子 mRNA tRNA 適宜的溫度適宜的