全自動臨床樣品核酸的純化和應用

1、全自動臨床樣品核酸的純化和應用生產工具推動社會進步，進步的源泉來源于不斷創(chuàng)新。 qiagen-biorobot qiagen公司簡介 來自德國，創(chuàng)建于1985年，世界上最優(yōu)秀的核酸純化廠商。年銷售額數十億美金，產品暢銷全球。 提供各種樣品核酸純化的優(yōu)質試劑。根據單個樣品量不同，有不同的純化試劑盒；根據樣品數量不同，有各種通量的試劑盒。 提供全自動核酸純化工作站，此工作站同時具備自動移液功能，并可以和其他儀器聯合使用，具有不同的擴展功能。qiagen公司儀器簡介 biorobot 9600：通量較低的標準型 biorobot 9604：用于臨床樣品標準型 biorobot 3000：多功能用戶定

2、制型 biorobot 8000：高通量全自動標準型 biorobot rapidplate ：96和384孔板移液系統(tǒng) biorobot twister i：存儲和移板系統(tǒng)，和3000連用，也可和酶標儀、pcr儀等連用。 biorobot twister ii：和8000連用，功能同i型。biorobot 9604主要功能 專為臨床樣品的核酸自動純化設計，可以得到高純度的基因組dna、病毒dna及rna。 樣品來源：各種血樣、體液、口腔刮離細胞及細胞培養(yǎng)物等。 所得到的核酸用于分子診斷、病毒檢測，血液分型、法醫(yī)dna指紋鑒定、制藥公司藥物篩選等。 biorobot 9604主要優(yōu)點 分子診斷

3、所需dna/rna的自動純化 精確、快速的液面定位系統(tǒng)和移液系統(tǒng) 滿意的得率和可信的結果 自動的樣品跟蹤和過程控制系統(tǒng) 同時進行96樣品，且有很好的可重復性 一次性帶濾芯槍頭可安全處理有傳染性的樣品 配套的高質量試劑 簡單易學的軟件操作系統(tǒng)biorobot 9604 亞型 a：viral rna b： viral rna/dna，genomic dna ，swab，amplification set up。 c：total rna，cytoplamic rna。biorobot 9604硬件 介紹12345678910111213 x-y-z-robotic arm：液面定位和自動移液 dil

4、utor syringe drives：對移液量的精確檢測 vacuum manifold system：產生負壓，從純化板抽濾掉各種緩沖液 sample identification system：樣品條形碼讀取系統(tǒng) tip-disposal station：去除一次性帶濾芯槍頭12345 tip-rack holder area：可存放足夠的一次性帶濾芯槍頭 external reagent delivery module：各種緩沖液存放位置 high-speed pipetting system：控制4個加液頭的加液速度 labware identification system：手持型

5、96孔純化板條形碼讀碼系統(tǒng) qiasoft operation system：簡單好學的操作系統(tǒng)，編好的操作程序，亦可根據需要自己編寫程序678910 safety shield：安全防護罩 multipurpose slot：多功能槽，可以放收集管等 thermoblock slot：加熱模塊，用于升高溫度以加快蛋白裂解等111213qiasoft operation system 在windows 95基礎上編寫而成 有編好的現成操作程序，看懂英文就會操作 可以根據自己的需要自行編寫程序qiasoft 3.0運行環(huán)境 execute environment：運行已編寫好的程序，并有配套的試

6、劑盒提供。 edit environment：創(chuàng)建和編寫自己的程序。 setup environment：用于增加和調整 slot和 rack的位置，與edit environment同時使用。qiasoft 3.0 main menu excute:start sample processing edit:create your own protocols setup:adjust work table configurationexecute environmentprocess paneltime panelmassage logprocotolbiorobot 9604 樣品來源bio

7、robot 9604 配套試劑 試劑盒中含有用于結合核酸的硅膠膜板和收集板、封口膜等所有附件。 試劑盒中有足夠的各種緩沖液用于純化所規(guī)定的樣品數。 每一個試劑盒都有對應的已經編好的程序。核酸純化原理核酸（水相）（水相）吸附洗脫高鹽乙醇低ph核酸（水相）核酸（結合硅膠膜）低鹽高溫高phnucleic acid in solutioneffect of chaotropic saltsbinding of nucleic acidqiaamp 8 dna blood biorobot kit(72)qiaamp 96 dna blood biorobot kit(12) 從新鮮或凍存的血液、血清、

8、骨髓、體液、細胞懸液自動純化基因組、線粒體和病毒的dna。 2個小時內從200ul樣品中得到6ug dna。 用于一般的分子生物學操作外，還可以用于hla分型、基因疾病的診斷等。qiaamp 96 virus biorobot kit(12)qiaamp 96 virus rna biorobot kit(12) 從血漿、血清、尿液、腦脊/髓液、無細胞的體液、細胞培養(yǎng)上清液中自動純化病毒的rna/dna。 前者可以在2.5個小時內從200ul樣品中同時得到90%以上的dna和rna，后者可以在20-40分鐘內從140ul樣品中得到90%以上的病毒rna。 所得到的dna/rna主要用于病毒檢測

9、和分型。如肝炎病毒a-g，hiv，cmv和腸道病毒等。qiaamp 96 dna swab biorobot kit(12)從棉簽（如口拭子）上純化dna在2個小時內可得到1-2ug dna所得到的dna除可以用于一般的分子生物學操作外，還可以用于hla分型、基因疾病的診斷、親子鑒定等。 rneasy 96 biorobot kit(24)從人和動物細胞中純化總rna和細胞質rna可以在75分鐘內從10-5x106細胞中得到100ug rna所得到的rna除可以用于一般的分子生物學操作外，還可以用于高通量藥物篩選、藥物研究和分子診斷等。自動純化的過程和應用 因樣品不同而大同小異，主要是樣品的預

10、處理和所用的緩沖液有所不同，這在各個產品的操作手冊中都有詳細說明。 以從全血中純化核酸為例作一些介紹,從200ul樣品中得到6ug dna，純度可以達到90%以上，并在2個小時內處理完96個樣品。qiaamp 96 dna blood biorobot kit(12) number of preparations 12x96 qiaamp 96 plates 12 square-well blocks 14 tape pad 1x25 sheets airpore tape 1x25 sheets caps for collection microtubes 8x120 collection

11、microtube racks 12 2-ml tubes for qiagen protease 50 caps for qiagen protease 50qiaamp 96 dna blood biorobot kit(12) 15-ml tubes for buffer al 15 qiagen protease 6x140mg protease solvent( sodium azide) 6x10ml 500-ml bottle for buffer aw2 1 buffer al (chaotropic salt) 1x330ml buffer aw1(concentrate)

12、6x175ml buffer aw2(concentrate) 4x274ml buffer ae 48x5ml handbook 1三種緩沖液的作用 qiagen protease：裂解蛋白。 protease solvent ( sodium azide) ：含疊氮化鈉的蛋白溶解液，防止蛋白酶被菌污染。 buffer al (chaotropic salt)：在乙醇存在條件下，形成高鹽體系，同時蛋白酶在al中能更好地裂解細胞，使dna結合在硅膠膜上。 buffer aw1 (chaotropic salt和ethanol)：去除硅膠膜上的抑制劑（如血紅素、糖酸、肝素、鐵離子等pcr抑制劑）

13、。 buffer aw1（ ethanol）：將硅膠膜上的鹽去掉（al、aw1）純 化 過 程水和全血pcr產物的比較pcr產物的分析 從水中得到的產物經過pcr后沒有擴增出任何產物。 從全血得到的產物經過pcr后擴增出產物，且條帶一致，說明重復性很好。重復性和純度檢驗 rna：a260/a280=1.9-2.1；dna：a260/a280=1.7-1.9 得率基本上在6ug左右，a260/280=1.8左右hla typing ssp-pcr analysis of donor dna using primers specific for hla genes drb (lanes 123)

14、and dqb (lanes 2445). genomic dna was isolated from human whole blood using the qiaamp 96 dna blood biorobot procedure and amplified with 45 different allele-specific primers targeted at genes drb1 through to drb5, and dqb1. allele-specific amplicons appear as intense bands below the 439 bp control

15、amplicon (human growth hormone gene) in lanes 8, 9, 22, 37, 38, and 40.human leucocyte antigen typingfactor v analysis factor v leiden genotyping using lightcycle technology. the figure shows two peaks corresponding to the dna melting temperatures recorded for the wild-type allele (640c) and the mut

16、ant allele (570c) in a heterozygotic individual (red line) and a control dna (blue line). genomic dna was isolated from human whole blood using the qiaamp 96 dna blood biorobot procedure.factor v 遺傳分析 end! thank you very muchi6f3b0y)v%s#pxluiqfnck8h5e2a+x*u$rznwkthpembj7g4c1z-w&t!qymvjrgodl9i6f3

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