全自動(dòng)臨床樣品核酸的純化和應(yīng)用

1、全自動(dòng)臨床樣品核酸的純化和應(yīng)用生產(chǎn)工具推動(dòng)社會(huì)進(jìn)步，進(jìn)步的源泉來源于不斷創(chuàng)新。 qiagen-biorobot qiagen公司簡(jiǎn)介 來自德國(guó)，創(chuàng)建于1985年，世界上最優(yōu)秀的核酸純化廠商。年銷售額數(shù)十億美金，產(chǎn)品暢銷全球。 提供各種樣品核酸純化的優(yōu)質(zhì)試劑。根據(jù)單個(gè)樣品量不同，有不同的純化試劑盒；根據(jù)樣品數(shù)量不同，有各種通量的試劑盒。 提供全自動(dòng)核酸純化工作站，此工作站同時(shí)具備自動(dòng)移液功能，并可以和其他儀器聯(lián)合使用，具有不同的擴(kuò)展功能。qiagen公司儀器簡(jiǎn)介 biorobot 9600：通量較低的標(biāo)準(zhǔn)型 biorobot 9604：用于臨床樣品標(biāo)準(zhǔn)型 biorobot 3000：多功能用戶定

2、制型 biorobot 8000：高通量全自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)型 biorobot rapidplate ：96和384孔板移液系統(tǒng) biorobot twister i：存儲(chǔ)和移板系統(tǒng)，和3000連用，也可和酶標(biāo)儀、pcr儀等連用。 biorobot twister ii：和8000連用，功能同i型。biorobot 9604主要功能 專為臨床樣品的核酸自動(dòng)純化設(shè)計(jì)，可以得到高純度的基因組dna、病毒dna及rna。 樣品來源：各種血樣、體液、口腔刮離細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)物等。 所得到的核酸用于分子診斷、病毒檢測(cè)，血液分型、法醫(yī)dna指紋鑒定、制藥公司藥物篩選等。 biorobot 9604主要優(yōu)點(diǎn) 分子診斷

3、所需dna/rna的自動(dòng)純化 精確、快速的液面定位系統(tǒng)和移液系統(tǒng) 滿意的得率和可信的結(jié)果 自動(dòng)的樣品跟蹤和過程控制系統(tǒng) 同時(shí)進(jìn)行96樣品，且有很好的可重復(fù)性 一次性帶濾芯槍頭可安全處理有傳染性的樣品 配套的高質(zhì)量試劑 簡(jiǎn)單易學(xué)的軟件操作系統(tǒng)biorobot 9604 亞型 a：viral rna b： viral rna/dna，genomic dna ，swab，amplification set up。 c：total rna，cytoplamic rna。biorobot 9604硬件 介紹12345678910111213 x-y-z-robotic arm：液面定位和自動(dòng)移液 dil

4、utor syringe drives：對(duì)移液量的精確檢測(cè) vacuum manifold system：產(chǎn)生負(fù)壓，從純化板抽濾掉各種緩沖液 sample identification system：樣品條形碼讀取系統(tǒng) tip-disposal station：去除一次性帶濾芯槍頭12345 tip-rack holder area：可存放足夠的一次性帶濾芯槍頭 external reagent delivery module：各種緩沖液存放位置 high-speed pipetting system：控制4個(gè)加液頭的加液速度 labware identification system：手持型

5、96孔純化板條形碼讀碼系統(tǒng) qiasoft operation system：簡(jiǎn)單好學(xué)的操作系統(tǒng)，編好的操作程序，亦可根據(jù)需要自己編寫程序678910 safety shield：安全防護(hù)罩 multipurpose slot：多功能槽，可以放收集管等 thermoblock slot：加熱模塊，用于升高溫度以加快蛋白裂解等111213qiasoft operation system 在windows 95基礎(chǔ)上編寫而成 有編好的現(xiàn)成操作程序，看懂英文就會(huì)操作 可以根據(jù)自己的需要自行編寫程序qiasoft 3.0運(yùn)行環(huán)境 execute environment：運(yùn)行已編寫好的程序，并有配套的試

6、劑盒提供。 edit environment：創(chuàng)建和編寫自己的程序。 setup environment：用于增加和調(diào)整 slot和 rack的位置，與edit environment同時(shí)使用。qiasoft 3.0 main menu excute:start sample processing edit:create your own protocols setup:adjust work table configurationexecute environmentprocess paneltime panelmassage logprocotolbiorobot 9604 樣品來源bio

7、robot 9604 配套試劑 試劑盒中含有用于結(jié)合核酸的硅膠膜板和收集板、封口膜等所有附件。 試劑盒中有足夠的各種緩沖液用于純化所規(guī)定的樣品數(shù)。 每一個(gè)試劑盒都有對(duì)應(yīng)的已經(jīng)編好的程序。核酸純化原理核酸（水相）（水相）吸附洗脫高鹽乙醇低ph核酸（水相）核酸（結(jié)合硅膠膜）低鹽高溫高phnucleic acid in solutioneffect of chaotropic saltsbinding of nucleic acidqiaamp 8 dna blood biorobot kit(72)qiaamp 96 dna blood biorobot kit(12) 從新鮮或凍存的血液、血清、

8、骨髓、體液、細(xì)胞懸液自動(dòng)純化基因組、線粒體和病毒的dna。 2個(gè)小時(shí)內(nèi)從200ul樣品中得到6ug dna。 用于一般的分子生物學(xué)操作外，還可以用于hla分型、基因疾病的診斷等。qiaamp 96 virus biorobot kit(12)qiaamp 96 virus rna biorobot kit(12) 從血漿、血清、尿液、腦脊/髓液、無細(xì)胞的體液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中自動(dòng)純化病毒的rna/dna。 前者可以在2.5個(gè)小時(shí)內(nèi)從200ul樣品中同時(shí)得到90%以上的dna和rna，后者可以在20-40分鐘內(nèi)從140ul樣品中得到90%以上的病毒rna。 所得到的dna/rna主要用于病毒檢測(cè)

9、和分型。如肝炎病毒a-g，hiv，cmv和腸道病毒等。qiaamp 96 dna swab biorobot kit(12)從棉簽（如口拭子）上純化dna在2個(gè)小時(shí)內(nèi)可得到1-2ug dna所得到的dna除可以用于一般的分子生物學(xué)操作外，還可以用于hla分型、基因疾病的診斷、親子鑒定等。 rneasy 96 biorobot kit(24)從人和動(dòng)物細(xì)胞中純化總rna和細(xì)胞質(zhì)rna可以在75分鐘內(nèi)從10-5x106細(xì)胞中得到100ug rna所得到的rna除可以用于一般的分子生物學(xué)操作外，還可以用于高通量藥物篩選、藥物研究和分子診斷等。自動(dòng)純化的過程和應(yīng)用 因樣品不同而大同小異，主要是樣品的預(yù)

10、處理和所用的緩沖液有所不同，這在各個(gè)產(chǎn)品的操作手冊(cè)中都有詳細(xì)說明。 以從全血中純化核酸為例作一些介紹,從200ul樣品中得到6ug dna，純度可以達(dá)到90%以上，并在2個(gè)小時(shí)內(nèi)處理完96個(gè)樣品。qiaamp 96 dna blood biorobot kit(12) number of preparations 12x96 qiaamp 96 plates 12 square-well blocks 14 tape pad 1x25 sheets airpore tape 1x25 sheets caps for collection microtubes 8x120 collection

11、microtube racks 12 2-ml tubes for qiagen protease 50 caps for qiagen protease 50qiaamp 96 dna blood biorobot kit(12) 15-ml tubes for buffer al 15 qiagen protease 6x140mg protease solvent( sodium azide) 6x10ml 500-ml bottle for buffer aw2 1 buffer al (chaotropic salt) 1x330ml buffer aw1(concentrate)

12、6x175ml buffer aw2(concentrate) 4x274ml buffer ae 48x5ml handbook 1三種緩沖液的作用 qiagen protease：裂解蛋白。 protease solvent ( sodium azide) ：含疊氮化鈉的蛋白溶解液，防止蛋白酶被菌污染。 buffer al (chaotropic salt)：在乙醇存在條件下，形成高鹽體系，同時(shí)蛋白酶在al中能更好地裂解細(xì)胞，使dna結(jié)合在硅膠膜上。 buffer aw1 (chaotropic salt和ethanol)：去除硅膠膜上的抑制劑（如血紅素、糖酸、肝素、鐵離子等pcr抑制劑）

13、。 buffer aw1（ ethanol）：將硅膠膜上的鹽去掉（al、aw1）純 化 過 程水和全血pcr產(chǎn)物的比較pcr產(chǎn)物的分析 從水中得到的產(chǎn)物經(jīng)過pcr后沒有擴(kuò)增出任何產(chǎn)物。 從全血得到的產(chǎn)物經(jīng)過pcr后擴(kuò)增出產(chǎn)物，且條帶一致，說明重復(fù)性很好。重復(fù)性和純度檢驗(yàn) rna：a260/a280=1.9-2.1；dna：a260/a280=1.7-1.9 得率基本上在6ug左右，a260/280=1.8左右hla typing ssp-pcr analysis of donor dna using primers specific for hla genes drb (lanes 123)

14、and dqb (lanes 2445). genomic dna was isolated from human whole blood using the qiaamp 96 dna blood biorobot procedure and amplified with 45 different allele-specific primers targeted at genes drb1 through to drb5, and dqb1. allele-specific amplicons appear as intense bands below the 439 bp control

15、amplicon (human growth hormone gene) in lanes 8, 9, 22, 37, 38, and 40.human leucocyte antigen typingfactor v analysis factor v leiden genotyping using lightcycle technology. the figure shows two peaks corresponding to the dna melting temperatures recorded for the wild-type allele (640c) and the mut

16、ant allele (570c) in a heterozygotic individual (red line) and a control dna (blue line). genomic dna was isolated from human whole blood using the qiaamp 96 dna blood biorobot procedure.factor v 遺傳分析 end! thank you very muchi6f3b0y)v%s#pxluiqfnck8h5e2a+x*u$rznwkthpembj7g4c1z-w&t!qymvjrgodl9i6f3

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