山里紅葉提取物抗脂肪肝作用探究

1、山里紅葉提取物抗脂肪肝作用探究摘 要：目的：研究篩選山里紅葉抗髙血脂性脂肪肝活性 部位。方法：采用高血脂脂肪肝模型，模型組與正常組及給 藥組在生理狀況、肝體比計(jì)算、生化檢測(cè)指標(biāo)(tc、tg)及肝 脂變率進(jìn)行比較，并結(jié)合肝臟病理檢查研究山里紅葉提取物 抗脂肪肝作用。結(jié)果：模型組與正常組及各給藥組比較，肝 體比(p<0. 05)有顯著性差異，血清總膽固醇及甘油三酯均高 于正常組(p<0. 05),給藥組肝臟病理學(xué)檢查有明顯改善。結(jié) 論：山里紅葉70%乙醇提取的正丁醇部位有明顯抗脂肪作用。關(guān)鍵詞：山里紅葉；脂肪肝；大鼠中圖分類號(hào)：r285. 5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：a文章編號(hào)：1673-7717

2、(2008) 03-0559-03study on the antifatty liver of the extract of the leaves of crataegus pinnatifida bge var. majorzhang wen-jiel, zhang chun-nei2, wang dong-yan3, ying xi-xiangl(1. liaoning university of tcm, shenyang 110032, liaoning, china； 2. liaoning tianhua drug-equipment co., ltd,shenyang 1100

3、32, liaoning, china； 3. dalian hospital of ship-building, dalian 116011, liaoning, china）abstract： objective ： screen the active part of antifatty liver of the leaves of crataegus pinnatifida bge vat. major. methods : a composite model of hyperlipemia of rat was established to study the pharmacologi

4、cal function of the extract of the leaves of crataegus pinnatifida bge var. major , and the results of experiment were analyzed using one-way anova. results： the extract remarkably affected the results of tc , tc , the ratio of liver-body weight and pathological examina/tion. conclusion： the extract

5、 of 70% ethanol was loaded on porous polymer resin column, and the n-butanol fraction of the elute was established to be the optimal active partkeywords： the leaves of cratoegus pinnatifida bge var. major； fatty liver； rat脂肪肝絕大多數(shù)是由中性脂肪過量蓄積所致，在正常的 情況下，肝臟只含有少量的脂肪，占肝臟重量的4%7%,當(dāng) 其脂肪含量超過肝臟重量（濕重）的10%時(shí)，即為脂肪

6、肝1。 脂肪肝見于各種疾病，同時(shí)也影響其疾病的恢復(fù)。許多疾病 之所以久治不愈，肝功能不能恢復(fù)的原因之一，就是因?yàn)橹?肪肝的存在。只有消除脂肪肝并減緩形成肝硬化的時(shí)間，避 免發(fā)生肝功能衰竭，才有利于其他疾病的治療。近年來單味 中草藥在抗脂肪肝的療效方面基本取得了共識(shí)2,筆者采 用70%乙醇提取山里紅葉，干燥提取物分別用氯仿及正丁醇 萃取，最后進(jìn)行各部位抗脂肪肝作用研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。1實(shí)驗(yàn)儀器材料1. 1儀器7600型全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）； ar2140電子分析天平（上海奧豪斯公司）;ld4-2型離心機(jī)（常 州國(guó)華電器有限公司）;hh-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器 有限公司）;dw-

7、2型恒溫調(diào)熱器（江蘇南通縣教學(xué)儀器二廠）； zdhw調(diào)溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。1.2試藥甘油三酯檢測(cè)試劑盒（北京九強(qiáng)生物有限公 司）；總膽固醇檢測(cè)試劑盒（北京九強(qiáng)生物有限公司）；膽固 醇中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司;丙硫氧囉噪（沈陽 東北大藥房）；豬油（沈陽市五一市場(chǎng)售板油煉制）；基礎(chǔ)飼 料（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）；95%藥用酒精（沈陽 衛(wèi)龍商貿(mào)有限公司）；10%烏拉坦溶液（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥理 教研室提供）。1.3藥材山里紅葉采于遼寧省沈陽市遼中縣，經(jīng)遼寧中 醫(yī)藥大學(xué)植物教研室王冰教授鑒定為山里紅葉（crataegus pinnatifida bge. var. m

8、ajor n. e. br.） o 藥材干燥，粉 碎，備用。2動(dòng)物與分組雄性wistar大鼠由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供, 合格證號(hào)：遼實(shí)動(dòng)字第(2000)042號(hào)。將體重為(200±20)g 的雄性wistar大鼠64只飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為8組，每組 8只，分別為正常組、造模組，氯仿層、正丁醇層及水層給 藥低、高劑量組。3山里紅葉提取物的制備稱取山里紅葉藥材3kg,加70%乙醇，提取2次，第1 次加溶劑14倍，提取3h；第2次加溶劑10倍，提取2h, 合并提取液，減壓回收乙醇，備用。以每ml樹脂吸附相當(dāng) 總黃酮25. 8mg山里紅葉提取物為上樣量，用8倍量于樹脂 床體積的水洗脫

9、除雜，再用濃度為70%乙醇洗脫，洗脫用量 為樹脂床3倍體積，洗脫物濃縮，分別用氯仿、正丁醇萃取, 減壓蒸去溶劑得3個(gè)萃取部位(氯仿層、正丁醇層及水層)， 備用。4模型復(fù)制和給藥正常組動(dòng)物攝食基礎(chǔ)飼料，其他各組均攝食下述配方組成的高脂飼料：基礎(chǔ)飼料加2%膽固醇、0.2%丙硫氧11 密除的豬油,按體重分別灌服山里紅葉提取物(參照心安膠囊:每粒含總黃酮80mg,每次3粒，每日23次，每日最高服用量 720mg) 3,山里紅葉提取物出膏率約為20%,總黃酮含量約 30%,因此720mg總黃酮為12g生藥所含有，即人每日服用 山里紅葉藥材為12g - 70kg-lo實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人臨床用藥劑量 估算公式為：

10、db=daxkb/ka（其中db是動(dòng)物公斤體重劑量， da是人公斤體重劑量，k5/k1是動(dòng)物和人折算系數(shù)之比約為 6. 3） 4,按計(jì)算公式計(jì)算，動(dòng)物每日服山里紅葉生藥量： 0. 9gkg-l （低劑量），5. 4g kg-1 （高劑量），換算成提取物 分別為：低劑量每ml含生藥0. 12g,高劑量每ml含生藥0. 72g 提取物，即大鼠每日灌胃1次，每次lnil,連續(xù)喂飼16天， 于當(dāng)晚先稱體重后將所有大鼠禁食12h,并于次日用10%的 烏拉坦溶液將所有的動(dòng)物麻醉后于頸動(dòng)脈取血、測(cè)血清膽固 醇及甘油三酯等指標(biāo)，并將所有的動(dòng)物處死后，取新鮮肝臟, 稱重，觀察肝臟外觀變化。5觀察指標(biāo)5.1生理情

11、況精神、活動(dòng)、飲食、皮毛及體重。5. 2肝體比計(jì)算取血后斷頸處死動(dòng)物并解剖，取肝稱重。 計(jì)算肝體比（肝濕重與體重比值）。5.3血液生化檢查大鼠于末次給藥后禁食12h自眼眶靜 脈叢取血，分離血清，測(cè)定tc及tg。5.4病理學(xué)光鏡檢查給藥后第15d處死動(dòng)物，取新鮮肝 臟，稱重，然后取肝左葉組織，切成約2mm小塊后，用4% 中性甲醛固定，經(jīng)過酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包 埋，切片，蘇木精-伊紅（he）染色封片后，在光學(xué)顯微鏡下 觀察組織結(jié)構(gòu)。6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用sigmastat3. 5統(tǒng)計(jì)軟件完成。7結(jié)果7.1生理情況實(shí)驗(yàn)期間正常組動(dòng)物精神充沛，靈活好 動(dòng)，飲食正常，皮毛整潔，體重持續(xù)增加，不同給

12、藥組在灌 胃后均有不同程度的精神萎靡，活動(dòng)減少，飲食減少，皮毛 凌亂，體重下降等表現(xiàn)，給藥組動(dòng)物的精神和飲食量明顯優(yōu) 于造模組。肉眼觀察正常組肝臟無異常變化，模型組肝臟體 積增大，重量增加，包膜緊張，邊緣圓鈍，切面油膩，呈奶 黃色，屬典型肝細(xì)胞脂肪變性。7. 2肝體比各組給藥前后肝重與肝體比結(jié)果見表1。模型組與正常組*肝指數(shù)，經(jīng)單因素方差分析有顯著性 差異(p<0. 05),且與水層高劑量組及正丁醇低*、高劑量組 *有顯著性差異(p<0. 05),說明正丁醇高劑量給藥組有顯著 預(yù)防脂肪肝作用。7. 3血液生化檢測(cè)tc與tg血液生化檢測(cè)結(jié)果見表23。經(jīng)one-way anova統(tǒng)計(jì)結(jié)

13、果表明：模型組與正常組*比 較tc有顯著性差異(p<0. 05),與正丁醇層提取物低*、高劑 量組*有顯著性差異(p<0. 05),說明正丁醇高劑量給藥組有 顯著降低血清總膽固醇作用。經(jīng)one-way anova統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明：模型組與正常組*丁6 比較有顯著性差異(p0. 05),與其他各組*比較均有顯著性 差異(p<0. 05),與正丁醇高劑量組*比較有顯著性 (p<0. 05),說明正丁醇高劑量給藥組有顯著降低血清甘油三 酯作用。7.4病理學(xué)光鏡檢查結(jié)果(1)正常組大鼠肝臟無異常病 變、模型組肝臟均出現(xiàn)程度不同的彌漫性肝脂變結(jié)果。正常 組(圖1)大鼠肝小葉分界清楚，

14、肝小葉中央為中央靜脈，肝 細(xì)胞呈多邊形互相連接形成單層肝板向周圍呈放射狀排列， 細(xì)胞核呈圓形或卵圓形，單核，核仁12個(gè)，胞漿豐富多 呈嗜酸性，胞漿中偶有數(shù)個(gè)脂滴，圓形或橢圓形。(2) 模型組(圖2)可見肝細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡大小不等位于 胞漿內(nèi)，以小葉周邊區(qū)較嚴(yán)重，中心區(qū)較輕，嚴(yán)重時(shí)融合為 一大空泡將細(xì)胞核擠向胞膜下。偶見正常肝小葉結(jié)構(gòu)消失出 現(xiàn)假小葉呈肝硬化改變，可見肝細(xì)胞壞死及再生。(3) 山里紅葉正丁醇、氯仿及水高劑量組肝臟病理切片 顯微鏡檢結(jié)果見圖35。正丁層高劑量組微結(jié)構(gòu)均明顯改善，其中以高劑量組效 果最好，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡明顯減少，周 邊區(qū)尤為明顯，細(xì)胞核形狀大多規(guī)則，染色質(zhì)分布均勻。8討論病理切片表明高血脂成功造成大鼠脂肪肝模型，以此為 基礎(chǔ)研究了山里紅葉70%乙醇提取物3個(gè)部位預(yù)防脂肪肝作 用，結(jié)果造模組有肝臟壞死，近似肝癌變；正丁醇層病理檢 查肝脂肪病變比其他均較輕；水層脂肪變性以小葉周邊為 主，周邊重，中心輕，與氯仿層區(qū)別不大，以上各組與造模 組比較均有不同程度好轉(zhuǎn)現(xiàn)象。山里紅葉70%乙醇提取物正 丁醇萃取部位對(duì)脂變肝細(xì)胞修復(fù)作用表明，該藥對(duì)脂肪肝有 顯著的預(yù)防作用。血液生化及肝體比研究結(jié)果也證明大鼠高 血脂形成后，對(duì)肝臟