頭孢哌酮鈉中乙二胺四乙酸二鈉的檢查

1、頭孑旬哌酮鈉中乙二胺四乙酸二鈉的檢查摘要目的運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定頭抱哌酮鈉原料藥屮乙二胺 四乙酸二鈉的含量。方法 釆用依利特ods c18色譜柱(4. 6 mmx250 mm, 5 inn)；以ph 3.4醋酸鹽緩沖液及乙睛為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；流速 1.5 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫40°c。結(jié)果edta-2na的濃度與峰 面積在25. 23-75. 68 u g/ml范|韋|內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為： y=6. 5401x +5. 4383, r=0. 9999；平均回收率 97. 7%, rsd 為 1. 0%。結(jié)論 該 方法可行，對(duì)頭抱哌酮鈉的質(zhì)量控制

2、有一定的意義。關(guān)鍵詞高效液相色譜法；梯度洗脫；頭砲哌酮鈉；乙二胺四乙酸 二鈉中圖分類號(hào)r927 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼b 文章編號(hào)2095-0616 (2013) 10-102-02頭抱哌酮鈉是日本富山化學(xué)工業(yè)公司研制開發(fā)的笫三代頭孑包菌素， 1981年上市，在國(guó)外通過(guò)輝瑞公司銷售。頭砲哌酮鈉是我國(guó)國(guó)家基本藥物, 與其他第三代頭砲菌素相比具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)、毒性低、療效好、 過(guò)敏反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，所以從上市以來(lái)，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。我公司 在生產(chǎn)頭抱哌酮鈉過(guò)程中，用乙二胺四乙酸二鈉作為絡(luò)合劑，查閱相關(guān)文 獻(xiàn)得知，但edta-2na易與鈣螯合，長(zhǎng)期大劑量使用或靜脈注射速度過(guò)快, 乙二胺四乙酸二鈉會(huì)與血

3、液及骨骼中的鈣形成水溶液螯合物引起低血鈣 癥或骨鈣流失，為確保其臨床用藥安全性，我們對(duì)產(chǎn)品中殘留的二乙胺四 乙酸二鈉進(jìn)行定量研究1-2 o本實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)3-9采用高效液相梯度洗 脫法測(cè)定其中乙二胺四乙酸二鈉的含量，操作簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠, 并不受其他成分的干擾，可用于本產(chǎn)詁屮乙二胺四乙酸二鈉的含量測(cè)定。1材料與方法1. 1儀器與試劑美國(guó)安捷倫1200型高效液相色譜儀，chemistation色譜工作站； bp211d型萬(wàn)分之一電子分析天平，德國(guó)賽多利斯，科學(xué)儀器（北京）有限 公司。頭抱哌酮鈉樣品（由珠海保稅區(qū)麗珠合成制藥冇限公司提供，批號(hào) 為100400k 1004002. 100400

4、3）；乙二胺四乙酸二鈉（分析純，天津市福 晨化學(xué)試劑廠提供）；水為注射川水；無(wú)水醋酸鈉（分析純，天津市廣成 化學(xué)試劑有限公司）；冰醋酸（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。1.2方法1.2. 1色譜條件 色譜柱為依利特ods c18柱（46mmx 250 mm, 5 p m）；柱溫為40°c；流動(dòng)相a為ph 3. 4醋酸鹽緩沖液（取醋酸鈉0.68 g, 冰醋酸5. 8 g,加水稀釋成1000 ml,用冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至3. 4）,流動(dòng) 相b為乙月青；流速為1.5 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；進(jìn)樣量為20 u lo 按表1進(jìn)行線性梯度洗脫。在此條件下，乙二胺四乙酸二鈉色譜峰與相鄰 成分

5、均可達(dá)到基線分離，見圖1。1. 2. 2溶液制備（1）對(duì)照品溶液的配制:精密稱取edta對(duì)照品50. 00 mg,置于100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液; 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 ml,置50 ml容量瓶中，先加5 ml的1%硫酸銅溶液，再用水稀釋至刻度，搖勻。（2）供試品溶液的制備：精密稱取頭他 哌酮鈉樣品50. 00 mg,置50 ml容量瓶中，先加5 ml的1%硫酸銅溶液使 溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻。2結(jié)果2. 1方法學(xué)考察2. 1. 1線性關(guān)系的考察取edta-2na對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀 釋制成每1毫升中含100 p g的溶液，作為線性母液。分別取

6、線性母液5. 0 ml、8.0 ml、10.0 ml、12.0 ml、15.0 ml 置 20 ml 容量瓶中;加水稀釋 至刻度，搖勻，即得線性iv溶液。按“121項(xiàng)”色譜條件精密進(jìn)樣 20 ul注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以edta濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面 積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：y =6. 5401x + 5.4383, r=0. 9999,結(jié)果表明，edta-2na 在 25. 23 u g/ml 75. 68 u g/ml 范圍內(nèi) 濃度與峰面積線性關(guān)系良好。2. 1. 2精密度試驗(yàn) 精密吸取edta-2na對(duì)照品溶液,按“12. 1項(xiàng)” 色譜條件進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣5次，

7、記錄所測(cè)量色譜的峰面積，得出edta峰 面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd值為1.30%,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用高效液相色譜 法對(duì)乳酸鈉的含量進(jìn)行檢測(cè)具有良好的精密度。2. 1.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液在5°c條件下放置，分別于0、2、4、6、8h進(jìn)樣，以edta峰面積計(jì)算，rsd值為1.3%,表明對(duì)照甜溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定。2. 1. 4加樣回收率試驗(yàn)精密稱取edta對(duì)照品50. 50 mg,置100 ml 容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密稱取 已知edta-2na殘留含量的本品（批號(hào)1004001, edta-2na殘留未檢出） 50.01 mg> 50.

8、17 mg、50. 28 mg,置50譏 容量瓶中，分別加入上述對(duì)照 品貯備液4譏、5 ml. 6 ml,再分別加5 ml的1%硫酸銅溶液，最后用水 定容至刻度；分別制成高、屮、低3個(gè)濃度的供試品溶液，按“ 1.2.1項(xiàng)” 色譜條件進(jìn)樣，每個(gè)濃度下測(cè)試3次，計(jì)算edta的平均回收率（n二9）為 97. 7%, rsd=1. 0%,見表 2。2. 1.5檢測(cè)限和定量限 取edta對(duì)照品溶液，逐步稀釋，精密量取20 ul,注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，按s/n二3 （噪音高度的3倍） 計(jì)算檢測(cè)限；按s/n二10 （噪音高度的10倍）計(jì)算定量限。結(jié)果edta的檢 測(cè)限為 0. 0238 ?g/m

9、l；定量限 0. 0595 ?g/mlo2.2樣品測(cè)定取不同批次的頭抱哌酮鈉樣品共3批，按“1. 2. 2項(xiàng)”方法制備供試 品溶液，按“12. 1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)樣,測(cè)定edta-2na的含量，見表3。3討論乙二胺四乙酸二鈉含量測(cè)定多釆用薄層分析、滴定法和比色法，由于 這些方法專屬性差、選擇性差,故考慮采用專屬性較高的hplc法。在本 實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)較全面的方法學(xué)驗(yàn)證，建立了一種梯度反相hplc測(cè)定 法，在該色譜系統(tǒng)中，色譜峰保留時(shí)間適宜，峰形良好，重現(xiàn)性好，該方 法用于測(cè)定頭也哌酮鈉原料藥屮乙二胺四乙酸二鈉的含量，準(zhǔn)確、可靠。參考文獻(xiàn)1刁巖忠，韓繼永，陳祥峰.hplc法測(cè)定注射用泮托拉哇鈉中

10、乙二 胺四乙酸二鈉的含量j約物分析雜志，2011, 31 （2）： 282-284.2韓繼永，張秋香，袁玉，等反相高效液相色譜法測(cè)定注射用奧 美拉呼鈉中乙二胺四乙酸二鈉含量j醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010, 29 ( 11 )： 1493-1495.3 耿志旺，劉蔚，劉茜，等.hplc法測(cè)定丙泊酚注射液屮乙二胺四 乙酸二鈉含量j藥物分析雜志，2011, 31 (3)： 586-588.4 屈蓉，錢桂英，陳佳反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定鹽酸林可 霉素注射液中乙二胺四乙酸二鈉的含量j約學(xué)與臨床研究，2012, 20(4)： 372-374.5 薛琦，楊龍華反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定混懸滴眼液中乙 二胺四乙酸二鈉含量j中國(guó)藥業(yè),2012, 21 (1)： 24-25.6 雒麗紅，徐英，高雪軍，筆.hplc法測(cè)定病毒性疫苗中edta二鈉 殘余量j微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2010, 38 (1)： 55-59.7 鄭睿行，張旭，方芳，等高效液相色譜法測(cè)定醬腌菜制品中edta 殘留量j中國(guó)食品添加劑,2011, 105 (2)： 212-21