不同培養(yǎng)基配方對苦苣苔科植物迷你無菌苗生長的影響

1、    不同培養(yǎng)基配方對苦苣苔科植物迷你無菌苗生長的影響    蘇江岑忠用覃勇榮賀慶梅摘 要：本實(shí)驗(yàn)以迷你型植株作為無菌材料，對其進(jìn)行繼代培養(yǎng)和壯苗生根培養(yǎng)，分別測定試管苗不同時期生理指標(biāo)。結(jié)果表明，ms+0.06mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8，是苦苣苔科植物迷你繼代培養(yǎng)的最佳配方；ms+0.06mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8，是苦苣苔科植物迷你壯苗生根的最佳配方；ms+10g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8，蔗糖10

2、g/l也可以促進(jìn)苦苣苔科植物迷你壯苗生根。關(guān)鍵詞：苦苣苔科植物 迷你 無性繁殖體系：s682.31 ：a ：1674-098x（2019）04（a）-0198-05苦苣苔科，雙子葉植物綱合瓣花亞綱的一科。多為具根狀莖的草本，少數(shù)為灌木或喬木。大約有140屬，2000余種，分為兩個亞科，其中，苦苣苔亞科cyrtandroideae主要生長在亞洲及非洲熱帶地區(qū)；而另一個亞科，大巖桐亞科gesnerioideae主要生長于美洲熱帶地區(qū)1。中國有56屬（其中28屬特產(chǎn)中國），約413種，均屬于苦苣苔亞科，多數(shù)生長在云南、廣西和廣東等省區(qū)，多生于石灰?guī)r山的陡崖上。苦苣苔科植物極具觀賞價值，有些可供藥用2

3、。例如，苦苣苔中藥，有解蛇毒之功效，常用于毒蛇咬傷。小型苦苣苔，是迷巖里的一款經(jīng)典大花品種，迷你株型，淡紫色線條斑超大花朵。然而，苦苣苔科植物分布并不廣泛，而且生存受到了自然環(huán)境和人為等因素的破壞。對于現(xiàn)在苦苣苔科植物面臨著嚴(yán)重的生存威脅和瀕?，F(xiàn)狀，必須要推動該科植物科學(xué)可持續(xù)發(fā)展及相關(guān)研究3。在已見報道的苦苣苔科植物中，主要的組培外植體為大型植株7-10，而用苦苣苔迷你型作為材料，必將是一種新的技術(shù)，因此本次研究對苦苣苔科的保護(hù)，產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，迷你型的研究具有非常重要的意義。本實(shí)驗(yàn)以苦苣苔科迷你型初代培養(yǎng)的叢生芽作為無菌材料，對苦苣苔科迷你型進(jìn)行快速繁殖，通過繼代培養(yǎng)、壯苗生根階段設(shè)置不同的配

4、方，探討可應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)的連續(xù)性迷你苦苣苔培養(yǎng)方案，為迷你的可持續(xù)開發(fā)利用和苦苣苔科的保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料由河池學(xué)院植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供的苦苣苔科迷你的初代培養(yǎng)叢生芽。1.2 試驗(yàn)方法1.2.1 繼代培養(yǎng)階段叢生芽長至3cm時進(jìn)行轉(zhuǎn)接。繼代培養(yǎng)基設(shè)置9個配方：ms+0.03mg/l6-ba+0.03mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.06mg/l6-ba+0.03mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.09mg/l6-ba+0.03mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g

5、/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.03mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.06mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.09mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.03mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.06mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.09mg/l6

6、-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。1.2.2 壯苗生根階段（1）naa和6-ba組合配比對壯苗生根的影響。叢生芽長達(dá)5cm時轉(zhuǎn)接，本實(shí)驗(yàn)設(shè)置9個壯苗生根的配方，如下：ms+0mg/l6-ba+0.03mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.03mg/l6-ba+0.03mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.06mg/l6-ba+0.03mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l

7、蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.03mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.06mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0 mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.03mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8 g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+0.06mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。（2）蔗糖對壯苗生根

8、的影響。叢生芽長達(dá)5cm時方可轉(zhuǎn)接，本實(shí)驗(yàn)設(shè)置5個壯苗生根的配方，如下：ms+10g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+15g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+20g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+25g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。ms+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8。1.3 測定指標(biāo)和方法抽取不同時期每個配方10株苦苣苔科試管苗，測定其葉寬、葉長、葉片數(shù)、株高、根長、根數(shù)、分蘗數(shù)、球莖直徑，再求取其平均值。葉寬、葉長、株高、根長、球莖直徑測量工具是尺子，葉片數(shù)、根數(shù)、分蘗數(shù)測量方法是目測。2 結(jié)果與分

9、析2.1 繼代培養(yǎng)階段2.1.1 不同濃度naa和6-ba組合配方對繼代培養(yǎng)的影響苦苣苔科植物迷你繼代培養(yǎng)不同時期的形態(tài)指標(biāo)和葉綠素含量結(jié)果見表1。繼代培養(yǎng)是組培擴(kuò)繁的核心環(huán)節(jié)，也是培養(yǎng)出成千上萬無菌苗的關(guān)鍵所在。當(dāng)叢生芽長至3cm時進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基設(shè)置9個配方，主要是細(xì)胞生長素、細(xì)胞分裂素的不同。繼代培養(yǎng)主要看株高、葉片數(shù)和分蘗數(shù)這3個指標(biāo)。從表1可以清晰看到繼代培養(yǎng)50d出來的無菌苗在株高、葉片數(shù)、葉長和球莖直徑基本都高于30d，而分蘗數(shù)低于30d；總體而言，繼代培養(yǎng)50d的無菌苗長勢更好、株高更高、葉片數(shù)更多、葉長更長、球莖更大、形態(tài)指標(biāo)更可觀。苦苣苔科植物迷你繼代培養(yǎng)不同濃度n

10、aa和6-ba組合配方的形態(tài)指標(biāo)結(jié)果見表2、表3。從表2、表3我們可以清晰的看到，培養(yǎng)30d和50d的葉片數(shù)和分蘗數(shù)的最大均都在配方5，30d的葉片數(shù)和分蘗數(shù)最大值分別為67.7片和6.75株，50d的葉片數(shù)和分蘗數(shù)最大值分別為39.3片和7.4株，然而兩次株高最大值卻均在配方2，分別是4.74和4.84cm。雖說配方2的株高最好，但是葉片數(shù)和分蘗數(shù)這兩項重要指標(biāo)并不優(yōu)?？傮w而言，繼代培養(yǎng)配方5的無菌苗占的優(yōu)勢更多，長勢更好，葉片數(shù)和分蘗數(shù)更多，形態(tài)指標(biāo)更可觀。因此配方5ms+0.06mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30 g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8，更適合苦苣苔科

11、植物迷你繼代培養(yǎng)。綜上所述，綜合9個配方、6個指標(biāo)來看，在0.06mg/lnaa和0.06mg/l6-ba組合下，葉片數(shù)67.7、39.3片和分蘗數(shù)6.75、7.4株均是兩次實(shí)驗(yàn)最高值，而株高、葉長、球莖直徑也偏高。因此，配方5ms+0.06mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8，是苦苣苔科植物迷你繼代培養(yǎng)的最佳配方。2.2 壯苗生根階段2.2.1 不同naa和6-ba濃度組合配方對壯苗生根的影響苦苣苔科植物迷你壯苗生根不同時期的形態(tài)指標(biāo)見表4。壯苗生根是無菌苗用于生產(chǎn)的一個重要環(huán)節(jié)，無菌苗的生長狀況直接影響移栽后的成活率，本次實(shí)驗(yàn)設(shè)置9個

12、配方，探索最佳壯苗生根培養(yǎng)方案。待叢生芽長達(dá)5cm左右時方可以壯苗生根培養(yǎng)。壯苗生根關(guān)鍵主要看根數(shù)、根長和球莖直徑。從表4中我們可以看出，在根數(shù)、根長、球莖直徑、葉長、葉寬上均是配方4和配方9較高，但是配方4的株高3.53cm、葉片數(shù)40.37片，都低于配方9的株高3.72cm、葉片數(shù)76片。但是其生根數(shù)11.14條太少，根長1.33cm較低，球莖0.41cm，達(dá)不到本實(shí)驗(yàn)壯苗生根的目的，配方9中的無菌苗總體長勢來說更占優(yōu)勢，有最多的根24.4根，根系最長3.28cm，球莖最大0.81cm，植株健壯，生長速度更快，最有利于用來馴化栽培。綜上所述，配方9 ms+0.06mg/l6-ba+0.09

13、mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8，更適合苦苣苔科植物壯苗生根培養(yǎng)。2.2.2 不同蔗糖濃度對壯苗生根的影響苦苣苔科植物不同蔗糖濃度對壯苗生根的影響，形態(tài)指標(biāo)和葉綠素含量見表5。本次實(shí)驗(yàn)設(shè)置五個配方，探索蔗糖最佳壯苗生根培養(yǎng)方案。待叢生芽長達(dá)5cm左右時方可以壯苗生根培養(yǎng)。蔗糖壯苗生根關(guān)鍵主要看根數(shù)、根長和球莖直徑。從表5中我們可以看出，在根數(shù)21條、根長1.63cm、球莖直徑0.5cm、葉長0.96cm及葉寬0.66cm上均是配方1最高；從分析來看，配方5生根數(shù)太少僅10.5條，根長0.83cm較低，達(dá)不到本實(shí)驗(yàn)壯苗生根的目的；配方3株高3.67cm最高、葉片

14、數(shù)51.33片最多，但是它的根數(shù)15.67條、根長1.33cm并不是最好；而配方1中的無菌苗總體來說更占優(yōu)勢，有最多的根21條、根系1.63cm最長、球莖直徑0.5cm最大、葉長0.96cm最長及葉寬0.66cm最寬，植株健壯，生長速度更快，最有利于用來馴化栽培。綜上所述，配方1ms+10g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8，更適合苦苣苔科植物蔗糖壯苗生根培養(yǎng)。3 討論本實(shí)驗(yàn)以迷你型植株作為無菌材料，利用組培快繁技術(shù)，對其進(jìn)行繼代培養(yǎng)和壯苗生根培養(yǎng)，分別測定試管苗不同時期生理指標(biāo)，從而探索出苦苣苔科植物迷你無性繁殖體系的最佳培養(yǎng)方案，研究出完整的、可應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)的連續(xù)性迷你苦苣苔培

15、養(yǎng)方案，能在短時間內(nèi)培育出成千上萬健康的、優(yōu)質(zhì)的迷你植株滿足市場需求，不僅能夠很好的發(fā)揮其觀賞價值，也能為迷你植株可持續(xù)開發(fā)利用和苦苣苔科的保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)表明，繼代培養(yǎng)，主要對比6-ba濃度和naa濃度對苦苣苔科植物迷你繼代培養(yǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)配方5無菌苗的葉片數(shù)更多、分蘗數(shù)更多，因此，配方5ms+0.06mg/l6-ba+0.06mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8是苦苣苔科植物迷你繼代培養(yǎng)的最佳配方。壯苗生根設(shè)置了naa和6-ba組合九個配方，探索出最有利于壯苗生根的培養(yǎng)方案。實(shí)驗(yàn)證明，在九個配方中，并不是同一個配方出來的苗各個指標(biāo)都是最高。從根數(shù)、根長、

16、葉長和葉片數(shù)指標(biāo)上看配方9最高；而從株高、葉綠素含量看配方7較高；在葉寬上看，配方8最高。但是總體而言配方9無菌苗長勢更占優(yōu)勢，有較多的根，根系較長，植株健壯，生長速度快。分析原因，主要在于激素含量不同，對比9個配方，配方9生長素含量和分裂素含量最多，生長素有利于植物的壯苗，分裂素有利于植物生根。其實(shí)，已有相關(guān)文獻(xiàn)，已經(jīng)指出，生長素有利于植物的生根，因此配方9ms+0.06mg/l6-ba+0.09mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8是苦苣苔科植物迷你壯苗生根的最佳配方。在蔗糖壯苗生根方面，只添加ms、蔗糖和瓊脂，控制ms和瓊脂，調(diào)節(jié)蔗糖濃度，設(shè)置5個濃度梯度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示配方1ms+10g/l蔗糖+4.8g/l瓊脂，ph5.65.8是苦苣苔科植物迷你蔗糖壯苗生根的最佳配方。參考文獻(xiàn)1 趙偉. 三種國產(chǎn)唇柱苣苔屬野生花卉的組培、扦插和幼苗半致死溫度研究d.上海師范大學(xué)，2015.2 湯正輝. 苦苣苔科植物的快速繁殖、離體保存及耐陰性研究d.四川大學(xué)，2007.3 楊文光，儲嘉琳，張耀廣.中國苦苣苔科植物瀕危狀況評估分析j.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2014（6）：746-751，756.4 陳明昭，溫佑興，黃瑩.幾種苦苣苔科植物的組織培養(yǎng)j.廣東園林，1985（4）：39.5 徐文芬.貴州唇形科、苦苣苔科藥用植物資源的調(diào)查研究j.貴州科學(xué)，2