基于均勻設(shè)計(jì)法評(píng)價(jià)制川烏和川貝、浙貝反藥配伍組合鎮(zhèn)痛與祛痰鎮(zhèn)咳作用

1、基于均勻設(shè)計(jì)法評(píng)價(jià)制川烏和川貝、浙貝反 藥配伍組合鎮(zhèn)痛與祛痰鎮(zhèn)咳作用摘要目的：研究制川烏與川貝、浙貝反藥配伍 組合不同配比和劑量變化對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛、祛痰、鎮(zhèn)咳作用的影 響。方法：采用均勻設(shè)計(jì)法，按2因素7水平以小鼠醋酸致 扭體次數(shù)、氣管酚紅分泌量、咳嗽次數(shù)為指標(biāo)，分別觀察制 川烏與川貝、制川烏與浙貝2種合煎液口服給藥后對(duì)小鼠鎮(zhèn) 痛、祛痰、鎮(zhèn)咳作用的影響，并選取有顯著意義的配比和劑 量進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：對(duì)扭體次數(shù)的影響：合煎液能降低小鼠 扭體次數(shù)；經(jīng)回歸分析可知，制川烏與川貝存在協(xié)同作用， 且1 ： 1時(shí)協(xié)同作用最小，總劑量大于5 g - kg-1時(shí)，1 ： 1 合煎液對(duì)扭體次數(shù)的降低作用最小。對(duì)氣管

2、酚紅分泌量的影 響：合煎液能增加小鼠氣管酚紅分泌量；經(jīng)回歸分析可知， 制川烏與川貝存在拮抗作用，且1：1時(shí)拮抗作用最大，當(dāng) 總劑量小于10 gkg-1且川貝：制川烏等于5 ： 1時(shí)，合煎 液對(duì)氣管酚紅分泌量的升高作用接近最小。對(duì)咳嗽次數(shù)的影 響：合煎液降低小鼠咳嗽次數(shù)；經(jīng)回歸分析可知，制川烏與 川貝存在拮抗作用，且當(dāng)1 ：5 表3制川烏與浙貝配 伍均勻設(shè)計(jì)劑量表table 3 the dose proportion of aconiti radix coctaand fritillaria thunbergii based on uniform design2.3小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn) 制川烏與川貝

3、、浙貝配伍實(shí)驗(yàn) 分別進(jìn)行。每一實(shí)驗(yàn)80只小鼠如表2分8組，各組小鼠給 藥或生理鹽水0. 5 h后，腹腔注射0. 6%乙酸0. 01 mlg-1 體重，觀察15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。2.4小鼠氣管酚紅分泌實(shí)驗(yàn)制川烏與川貝、浙貝配伍 實(shí)驗(yàn)分別進(jìn)行。每一實(shí)驗(yàn)80只小鼠如表2分8組，各組小 鼠給藥或生理鹽水每天1次，連續(xù)3 d,最后一次灌胃1 h 后，腹腔注射0.5%苯酚紅溶液每只0.5 mlo注射1 h后處 死小鼠，剪開頸前皮膚，分離氣管，在氣管上剪一個(gè)小洞， 磨平的12號(hào)針頭從洞口慢慢插入，血管夾固定。用1 ml注 射器吸5%碳酸氫鈉0. 5 ml緩慢推入氣管，反復(fù)推抽3次， 將灌洗液抽出

4、注入試管中。按上述方法連續(xù)操作3次。分別 取0. 2 ml灌洗液放入96孔板中，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)為595 nm 下測(cè)量吸光度a o2.5小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)制川烏與川貝、浙貝配伍實(shí)驗(yàn) 分別進(jìn)行。每一實(shí)驗(yàn)80只小鼠如表2分8組，各組小鼠給 藥或生理鹽水1 h后，通過超聲霧化器連接噴霧頭，25%氨 水均勻地噴入鐘罩內(nèi)，然后將小鼠置于玻璃鐘罩中，開始 計(jì)時(shí)，噴霧25 s,立即取出小鼠，觀察并記錄小鼠3 min內(nèi) 的咳嗽次數(shù)。2.6數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用土s表示，先用spss 13.0軟件 的秩和檢驗(yàn)或單因素方差分析，后采用matlab 7. 8軟件進(jìn)行多元逐步回歸分析，以p3.2制川烏與川貝、浙貝配伍對(duì)小鼠氣管酚

5、紅分泌量的影響各組小鼠氣管酚紅分 泌量結(jié)果見表4,采用單因素方差分析結(jié)果顯示，與模型組 比較，各給藥組小鼠的氣管酚紅分泌量均升高，且多數(shù)組有 顯著性差異(p小鼠咳嗽次數(shù)與藥組配伍比例和用藥劑量相關(guān)性分析：總劑量026. 62 gkg-1,合煎液對(duì)咳 嗽次數(shù)的影響呈先升高后下降的趨勢(shì)，如拋物線：小于10 g kg-1時(shí)呈上升趨勢(shì)，大于20 g kg-1時(shí)呈下降趨勢(shì)，大 于10小于20 gkg-1時(shí)不同配比下上升或下降的趨勢(shì)不同。 川貝比例越高，拋物線上升或下降速率越慢，而制川烏比例 越高，上升或下降速率越快。驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)：取40只小鼠分4組，即模型組、制川烏 組(0. 36 g kg-1).川貝組

6、(1.8g kg-1).制川烏(0.36 g kg-1)川貝(1.8 g kg-1)配伍組，每組10只，具體 方法同氨水引咳實(shí)驗(yàn)。數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)，結(jié)果見表7,與 模型組比較，制川烏、川貝單用和配伍組均顯著降低小鼠咳 嗽的次數(shù)(p醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，制川烏與川貝、浙貝合煎液均有鎮(zhèn)痛作用。此前也有文獻(xiàn)報(bào)道了制川烏 和貝母總堿對(duì)醋酸致痛和熱板致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 12-13 o本研究經(jīng)回歸分析可知，在制川烏0.1621.6 gkg-1和川貝0.0315 gkg-1 (分別等效于2010年版 中國藥典川烏用量低限的0.5472倍和高限的0.27 36倍，川貝用量低限的0. 0525倍和高限的0. 0

7、157. 5倍） 劑量范圍內(nèi)，合煎液中制川烏與川貝對(duì)扭體次數(shù)無交互作 用，但有協(xié)同降低扭體次數(shù)的作用，兩藥合用鎮(zhèn)痛作用增強(qiáng)。 扭體次數(shù)與配比劑量的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，總劑量小于5 gkg-1 （相當(dāng)于藥典用量高限的2.08倍）時(shí)，合煎液對(duì)扭 體次數(shù)無影響；1 ： 1總劑量大于5 g kg-1時(shí)，合煎液對(duì)扭 體次數(shù)的降低速率最慢，提示此時(shí)的鎮(zhèn)痛作用最小。經(jīng)實(shí)驗(yàn) 驗(yàn)證進(jìn)一步表明制川烏與川貝配伍比例為1：1時(shí)鎮(zhèn)痛作用 有增強(qiáng)趨勢(shì)。而制川烏與浙貝合煎液由于對(duì)小鼠扭體次數(shù)未 呈現(xiàn)出規(guī)律性的影響，沒能擬合出回歸方程。氣管酚紅分泌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，制川烏與川貝、浙貝合煎 液都有祛痰作用，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相符

8、14-15。經(jīng) 回歸分析結(jié)果表明，在制川烏0.1621. 6 gkg-1和川貝 0.0315 g - kg-1,合煎液中制川烏與川貝對(duì)升高氣管粉紅 分泌量存在拮抗作用，制川烏能減弱川貝對(duì)氣管酚紅分泌量 的升高作用，且二者比例1 ： 1時(shí)，此種拮抗作用最大。進(jìn) 一步分析顯示，合煎液隨總劑量增加升高氣管酚紅分泌量， 當(dāng)川貝：制川烏等于5 : 1總劑量小于10 g kg-1時(shí)升高速 率趨于最慢，說明此時(shí)合煎液的祛痰作用趨于最?。划?dāng)1 ： 1 總劑量大于22 gkg-1時(shí)升高速率最慢，提示此時(shí)合煎液 的祛痰作用最小。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證進(jìn)一步表明1：1時(shí)制川烏與 川貝之間存在一定的拮抗作用。而制川烏與浙貝合煎液

9、由于 對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量未呈現(xiàn)出規(guī)律性影響，沒能擬合出回 歸方程。氨水引咳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，制川烏與2種貝母的合煎液都 具有鎮(zhèn)咳作用，與其他學(xué)者的研究結(jié)果相符14-15?；貧w 分析得知，在制川烏0. 1621. 6 gkg-1和川貝0.0315 gkg-1,合煎液中制川烏與川貝對(duì)降低小鼠咳嗽次數(shù)存在 一定的拮抗作用，制川烏能減弱川貝對(duì)咳嗽次數(shù)的降低作 用，且比例為1：515李萍，季暉，徐國鈞，等.貝母類中藥的鎮(zhèn)咳祛痰作用研究j.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)， 1993,24 (6):360.valuation on analgesic , expectorant and antitussive effect

10、s of compatibleuse of aconiti radix cocta and fritillaria cirrhosa orfritillaria thunbergiitan shu-fangl, 2, liu chun-fang, wang chun-sheng, wang dan-hua., zhang yan-qiong, lin na (1. institute of chinese materia medica, china academy of chinese medical sciences, beijing 100700, china；2. jiangxi col

11、lege of traditional chinese medicine, nanchang 330004, china)abstract objective： to study the analgesic,expectorant and antitussive effects of the compatible use of aconiti radix cocta and fritillaria cirrhosa or f. thunbergii with differe nt matchi ng ratio or dose in mice. method： the two-factor,

12、seven-level uniform design method was adopted to observe the analgesic, expectorant and antitussive effects of the oral administration with the two combined decoctions in rats , with frequency of body torsions induced by acetum, secretion of phenol red in tracheas and frequency of coughs as indexes

13、significant matching proportions and doses were collected for verification. resuit： the effect on the frequency of body torsions :the combined decoctions couldeffectively reduce the frequency of body torsions according to a regression analysis, aconiti radix cocta and f. cirrhosa had the synergistic

14、 effect, which was maximized with a ratio of 1 ： 1. the 1 : 1 combined decoction played the least role in reducing the frequency of body torsions with a total dose of more than 5 g kg-1. the effect on the secretion of phenol red in tracheas the combined decoctions could effectively increase the secr

15、etion of phenol red in tracheas according to a regression analysis, aconiti radix cocta and f. thunbergii had the antagonism, which was maximized at the ratio of 1 ： 1, and minimized with a total dose of less than 10 g kg-1 and a ratio of 5 * 1 between f thunbergii and aconiti radix cocta. the effec

16、t on the frequency of coughs the combined decoctions could effectively reduce the frequency of coughs according to a regression analysis, aconiti radix cocta and f. cirrhosa had the antagonism, which was maximized at the ratio of more than 1 : 5 and less than 10 : 1. there was no interaction between

17、 aconiti radix cocta and f. thunbergii f. thunbergii could reduce the frequency of coughs, whereas aconiti radix cocta showed no effect. conclusion： the compatible application of aconiti radix cocta and f. cirrhosa could enhance the analgesic effect of aconiti radix cocta and reduce the expectorant and antitussive effects of f. cirrhosa, which vary according to different matching ratio and dose the compatible application of aeoniti radix cocta and f. thunbergii shows no effect on the antitussive effect of f. thunbergii . this study provides expe