分子診斷應用于嚙齒類實驗動物的健康監(jiān)控

1、 排除(隔離): 進入設施前對大小鼠進行篩查 監(jiān)控:監(jiān)控嚙齒動物健康狀況的變化本講主要關注于監(jiān)測-環(huán)境，傳染性疾病，遺傳學，飼養(yǎng)技術和物料健康監(jiān)控健康監(jiān)控=檢查動物是否符合健康要求的檢查動物是否符合健康要求的質控措施質控措施目錄目錄目標目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 目標（健康監(jiān)控能為您做什么？目標（健康監(jiān)控能為您做什么？） 通過以下方式，通過以下方式，促進高質量（穩(wěn)定促進高質量（穩(wěn)定）的研的研究-（隔離檢疫區(qū)（隔離檢疫區(qū)）-排除可能干擾研究的已排除可能干擾研究的已感染動物染動物 -（實驗區(qū)區(qū)）-檢測特定區(qū)域內需排除病原體檢測特定區(qū)域內需排除病

2、原體 很難發(fā)現(xiàn)首發(fā)病例，其真正意義在于尋找病原體擴散很難發(fā)現(xiàn)首發(fā)病例，其真正意義在于尋找病原體擴散的證據(jù)的證據(jù) 其他原因：傳染媒介，質量監(jiān)控，需要向合作方運輸?shù)鹊饶夸浤夸浤繕艘螅☉懦⑸锪斜? 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 要求最好符合您的需求 重點關注發(fā)生在您設施的會影響實驗的傳染性病原排除列表過長會危及實驗項目傳染性疾病的要求傳染性疾病的要求=排除列表排除列表應排除病原體列表應排除病原體列表 病毒：觸發(fā)機體的全身反應 白細胞介素、B細胞及T細胞，感染一般較迅速，影響輕微和短暫，不可在環(huán)境中復制存活易排除。 細菌：疾病一般由病原體入侵或者其產(chǎn)生的外毒素引起，可在環(huán)

3、境中增殖，難排除。 真菌：出現(xiàn)明顯病變時，考慮培養(yǎng)辨認。 寄生蟲：除少數(shù)非致病物種，一般不允許存在。目錄目錄目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 重點關注亞臨床感染-若出現(xiàn)臨床疾病，需進行調查 權衡哪些項目會影響您的工作 -一個標準不能適用于全部 -一個動物房可能有多重標準 1.免疫正常vs.免疫缺陷動物 2.短期研究vs.長期研究 -不同的病原體在不同時期繁殖的速率和影響不同嚙齒類動物健康評判標準嚙齒類動物健康評判標準 從第一只動物從第一只動物感染到檢測出來一般會延遲數(shù)周至數(shù)月染到檢測出來一般會延遲數(shù)周至數(shù)月 盡量選擇主要病原體進行檢測盡量選擇主要

4、病原體進行檢測 -明顯疾病的病原體明顯疾病的病原體 -影響研究結果的病原體影響研究結果的病原體（特定領域） -官方應排除的病原體病原體（認證，發(fā)文章）評判標準評判標準 質控程序質控程序確認動物是否符合評判標準確認動物是否符合評判標準 組成部分組成部分 -樣品- 動物的-品系、年齡、樣品種類（血清、糞便，等等）、是否暴露？ 環(huán)境的-位置（靜壓箱（plenum)、過濾器，等等） -樣品數(shù)量？ -檢測頻率？ -安排、執(zhí)行及報告基于評判標準的質控程序基于評判標準的質控程序目錄目錄目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 哨兵鼠選擇 敏感種屬，雌性，封閉群，每盒至

5、少2只 暴露方法 接觸法（最有效，但不實用） 臟墊料法（100%臟墊料，常用） 檢測間接并有延遲 通過哨兵鼠采樣通過哨兵鼠采樣 大體和顯微鏡檢測(病理) 分離培養(yǎng) 直接檢測（PCR） 抗體血清學檢測方法檢測方法目錄目錄目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 運輸樣本 血清（用5倍體積的PBS稀釋）用于檢測之前暴露的病毒 糞便、口腔拭子、毛皮拭子，使用PCR方法檢測細菌、寄生蟲和病毒（目前感染的） 毛皮拭子（扯下或粘下的毛發(fā)亦可），使用PCR來檢測管狀線蟲屬（Syphacia） 和皮螨；或者是環(huán)境拭子采自于IVC籠架，可以替代毛皮拭子。 病變部位用10%

6、的中性福爾馬林緩沖溶液浸泡，進行組織病理學檢查 鼻咽棉拭子進行PCR檢測 活體動物運輸檢測收集樣本目錄目錄目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 監(jiān)控一般針對能真正威脅到設施安全的微生物，而非一些不常見的微生物 大多數(shù)的設施監(jiān)控會針對流行病原體至少每季度檢一次，對于其他病原體則一年檢一次質量控制（QC）頻率 最通用的程序： 對于常見的微生物及該設施已發(fā)現(xiàn)過的病原體進行季度檢測 年度檢測時檢全項 開放飼養(yǎng)的動物房檢測房間哨兵鼠（也可以用臟墊料接觸哨兵鼠） 檢測方法 血清學適用于大部分病毒 肉眼檢查或PCR適用于寄生蟲及細菌學檢查日常的動物房檢測1. 管理

7、、研究等人員的觀察2. 數(shù)據(jù)評估繁育、研究結果等3. 日常送檢篩查以排除微生物感染（主要是臨床癥狀不明顯的個體）4. 針對某些問題進行深入的診斷性評價（疾病、異常結果等）記住：日常健康質量控制只是整個嚙齒類動物健康監(jiān)測計劃當中的一部分總結 健康監(jiān)控計劃應該根據(jù)當時的（微生物感染）風險和環(huán)境類型制定 很多流行性的微生物不能很好地通過臟墊料進行傳播，阻礙檢測 IVC或者帶有空氣過濾器的籠盒系統(tǒng)里的種群動物最好用血清學方法檢測接觸臟墊料的哨兵動物，并 通過PCR檢測補充結果。而對于無法完全轉移到哨兵鼠上的微生物，可采用傳統(tǒng)的寄生蟲學方法檢測籠架動物 -環(huán)境棉拭子是一個很重要的輔助樣本 常規(guī)項目的質量

8、控制檢測可以不運送動物到外部實驗室進行檢測，但是送檢活體動物對于診斷調查仍有益處杭州赫貝，專業(yè)實驗外包服務杭州赫貝，專業(yè)實驗外包服務聯(lián)系人：李海龍聯(lián)系人：李海錄目錄目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 目錄目錄目標要求（應排除微生物列表) 標準（如何定義陽性）項目-測試方法 -樣品 -頻率 重點關注亞臨床感染-若出現(xiàn)臨床疾病，需進行調查 權衡哪些項目會影響您的工作 -一個標準不能適用于全部 -一個動物房可能有多重標準 1.免疫正常vs.免疫缺陷動物 2.短期研究vs.長期研究 -不同的病原體在不同時期繁殖的速率和影響不同嚙齒

9、類動物健康評判標準嚙齒類動物健康評判標準 從第一只動物從第一只動物感染到檢測出來一般會延遲數(shù)周至數(shù)月染到檢測出來一般會延遲數(shù)周至數(shù)月 盡量選擇主要病原體進行檢測盡量選擇主要病原體進行檢測 -明顯疾病的病原體明顯疾病的病原體 -影響研究結果的病原體影響研究結果的病原體（特定領域） -官方應排除的病原體病原體（認證，發(fā)文章）評判標準評判標準 從第一只動物從第一只動物感染到檢測出來一般會延遲數(shù)周至數(shù)月染到檢測出來一般會延遲數(shù)周至數(shù)月 盡量選擇主要病原體進行檢測盡量選擇主要病原體進行檢測 -明顯疾病的病原體明顯疾病的病原體 -影響研究結果的病原體影響研究結果的病原體（特定領域） -官方應排除的病原體病原體（認證，發(fā)文章）評判標準評判標準 從第一只動